Fuente de iones Turbo V™ Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Julio de 2014 Este documento se proporciona a los clientes que han adquirido un equipo AB Sciex, para que lo usen durante el funcionamiento de dicho equipo AB Sciex. Este documento está protegido por derechos de propiedad y queda estrictamente prohibida cualquier reproducción total o parcial, a menos que AB Sciex lo autorice por escrito. El software que se describe en este documento se proporciona bajo un acuerdo de licencia. Está legalmente prohibida la copia, modificación o distribución del software en cualquier medio, a menos que se permita específicamente en el acuerdo de licencia. Además, es posible que el acuerdo de licencia prohíba igualmente desensamblar, realizar operaciones de ingeniería inversa o descompilar el software con cualquier fin. Las garantías son las indicadas en ese documento. 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SINGAPUR 739256 Fuente de iones Turbo V™ 2 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Contenido Capítulo 1 Descripción general de la fuente de iones........................................................................5 Documentación relacionada........................................................................................................................................5 Asistencia técnica.......................................................................................................................................................5 Componentes de la fuente de iones............................................................................................................................6 Sondas........................................................................................................................................................................7 TurboIonSpray Sonda............................................................................................................................................8 Sonda APCI...........................................................................................................................................................8 Conexiones de gas y electricidad..............................................................................................................................10 Circuito detector de fuente de iones.........................................................................................................................10 Sistema de escape de la fuente.................................................................................................................................10 Capítulo 2 Instalación de la fuente de iones.....................................................................................12 Preparación para la instalación.................................................................................................................................12 Instalación de la sonda.............................................................................................................................................13 Instalación de la fuente de iones en el espectrómetro de masas..............................................................................13 Conexión del tubo de muestra..................................................................................................................................14 Capítulo 3 Optimización de la fuente de iones.................................................................................15 Introducción de muestras..........................................................................................................................................15 Predeterminado..................................................................................................................................................15 Caudal.................................................................................................................................................................15 Requisitos de la entrada de muestra...................................................................................................................16 TurboIonSpray Optimización de la sonda..................................................................................................................16 Caudal y temperatura.........................................................................................................................................17 Configuración del sistema...................................................................................................................................21 Ejecución del método..........................................................................................................................................21 Configuración de las condiciones iniciales..........................................................................................................18 Optimización de la posición de la sonda TurboIonSpray ....................................................................................18 Optimización de los parámetros de la fuente de iones y del gas y la tensión.....................................................19 Optimización de la temperatura del calentador turbo.........................................................................................20 Sugerencias de optimización...............................................................................................................................20 Optimización de la sonda APCI.................................................................................................................................21 Configuración del sistema...................................................................................................................................21 Ejecución del método..........................................................................................................................................21 Configuración de las condiciones iniciales..........................................................................................................22 Optimización de Gas 1 y Curtain Gas Flow (Caudal)...........................................................................................22 Ajuste de la posición de la aguja de descarga de la corona................................................................................22 Optimización de la posición de la sonda APCI....................................................................................................23 Optimización de la corriente nebulizante............................................................................................................24 Optimización de la temperatura de la sonda APCI..............................................................................................24 Capítulo 4 Mantenimiento de la fuente de iones.............................................................................25 Limpieza de las sondas.............................................................................................................................................26 Extracción de la fuente de iones...............................................................................................................................27 Extracción de la sonda..............................................................................................................................................27 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 3 de 53 Contenido Limpieza del tubo del electrodo................................................................................................................................28 Montaje de los componentes de la sonda.................................................................................................................29 Ajuste de la extensión de la punta del electrodo......................................................................................................30 Sustitución de la aguja de descarga de la corona.....................................................................................................31 Sustitución del tubo de muestra................................................................................................................................33 Capítulo 5 Consejos de solución de problemas.................................................................................34 Apéndice A Principios de funcionamiento. Fuente de iones............................................................37 Modo TurboIonSpray ...............................................................................................................................................37 Modo APCI................................................................................................................................................................38 Región de ionización de APCI...................................................................................................................................41 Apéndice B Tensiones y parámetros de la fuente............................................................................43 TurboIonSpray parámetros para la sonda.................................................................................................................43 Parámetros para la sonda APCI.................................................................................................................................44 Descripciones de parámetros....................................................................................................................................44 Posición de la sonda.................................................................................................................................................46 Composición de los disolventes................................................................................................................................46 Apéndice C Consumibles y repuestos................................................................................................48 Historial de revisiones.........................................................................................................................50 Índice....................................................................................................................................................51 Fuente de iones Turbo V™ 4 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Descripción general de la fuente de iones TM La fuente de iones Turbo V fuente de iones. 1 ® permite utilizar la TurboIonSpray o la sonda APCI en la misma caja de la Utilice la fuente de iones para cada ionización por electrospray (ESI), con la sonda TurboIonSpray, o ionización química a presión atmosférica (APCI), con la sonda APCI. Las aplicaciones de la fuente de iones incluyen el desarrollo del método cualitativo y el análisis cualitativo y cuantitativo. ¡ADVERTENCIA! Peligro de radiación, riesgo biológico o sustancias químicas tóxicas. Use la fuente de iones solo si dispone de los conocimientos y la formación adecuada para usar, contener y evacuar los materiales tóxicos o nocivos que se emplean con la fuente de iones. Deje de usar la fuente de iones si la ventana está quebrada o dañada, y póngase en contacto con un representante del servicio técnico de AB SCIEX. Cualquier material tóxico o nocivo introducido en el equipo estará presente en la fuente de iones y la salida de escape. Deseche los objetos con filo siguiendo los procedimientos de seguridad establecidos del laboratorio. ¡ADVERTENCIA! Peligro de descarga eléctrica. Evite el contacto con las altas tensiones aplicadas a la fuente de iones durante el funcionamiento. Ponga el sistema en el modo de espera antes de ajustar el tubo de muestra u otros equipos cerca de la fuente de iones. Documentación relacionada ® Las guías y tutoriales del espectrómetro de masas y el software Analyst se instalan automáticamente con el software y están disponibles en el menú Start: All Programs > AB SCIEX > Analyst. La documentación de la fuente de iones se encuentra en el DVD de referencia del cliente. Existe una lista completa de la documentación disponible, que se puede encontrar en la Ayuda. Para ver la Ayuda del software, pulse F1. ® Las guías y tutoriales del espectrómetro de masas y el software Analyst TF se instalan automáticamente con el software y están disponibles en el menú Start: All Programs > AB SCIEX > Analyst TF. Existe una lista completa de la documentación disponible, que se puede encontrar en la Ayuda. Para ver la Ayuda del software, pulse F1. Asistencia técnica AB SCIEX y sus representantes cuentan con un equipo de especialistas técnicos y de servicio totalmente calificados ubicados por todas partes del mundo. Ellos sabrán resolver sus dudas y preguntas sobre el sistema Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 5 de 53 Descripción general de la fuente de iones y cualquier problema técnico que pueda surgir. Para obtener más información, visite el sitio web www.absciex.com. Componentes de la fuente de iones Figura 1-1 Componentes de la fuente de iones Elemento Descripción 1 Tubo de muestra 2 Torre de sondeo 3 Micrómetro del eje y empleado para colocar la sonda en el eje horizontal a fin de ajustar la sensibilidad de la fuente de iones 4 Unión de la conexión a tierra 5 Uno de los dos pestillos de la fuente que fijan la fuente de iones al espectrómetro de masas Fuente de iones Turbo V™ 6 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Descripción general de la fuente de iones Elemento Descripción 6 Orificio de ventana 7 Pasador guía 8 Calentador turbo 9 Micrómetro del eje x empleado para colocar la sonda en el eje vertical a fin de ajustar la sensibilidad de la fuente de iones 10 Anillo de retención de bronce 11 Tornillo de ajuste de la aguja de descarga de corona 12 Tapa de ajuste del electrodo 13 Tuerca del tubo de muestra ¡ADVERTENCIA! Peligro de lesiones personales. Deje de usar la fuente de iones si la ventana de la misma está quebrada o rota, y póngase en contacto con un representante del servicio técnico de AB SCIEX. Deseche los objetos con filo siguiendo los procedimientos de seguridad establecidos del laboratorio. Sondas ® La sonda TurboIonSpray y la sonda APCI proporcionan diversas opciones para probar muestras. Seleccione la sonda y el método más adecuados para el compuesto en el flujo de corriente de muestra. Tabla 1-1 Especificaciones de la fuente de iones ® Especificación TurboIonSpray Sonda Sonda APCI Intervalo de temperatura de la fuente de iones Temperatura de la sonda desde temperatura ambiente hasta 750 °C, en función del flujo de líquido Temperatura de la sonda desde 50 °C hasta 750 °C, en función del flujo de líquido Cromatografía líquida (LC) Conecta con cualquier sistema LC Gas 1/Gas 2 Consulte la Guía de planificación de instalaciones para el espectrómetro de masas. ® ® El software Analyst o Analyst TF determina la sonda que está instalada y permite emplear los controles de usuario correspondientes. Todos los datos que se adquieren mediante el uso de la fuente de iones se identifican con una abreviatura que hace referencia a la sonda empleada para adquirir los datos (TIS para la sonda TurboIonSpray y HN para la sonda APCI). Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 7 de 53 Descripción general de la fuente de iones ® TurboIonSpray Sonda La sonda TurboIonSpray es preferiblemente apta para el análisis LC/MS/MS. Produce iones mediante la evaporación de iones. La sensibilidad alcanzada con esta técnica depende tanto del caudal como del analito. Debido a una mejor desolvatación con caudales más elevados, la eficiencia de la ionización aumenta al aumentar la temperatura de la fuente de iones, lo que proporciona una mayor sensibilidad. Los compuestos con una polaridad extremadamente alta y una baja actividad superficial suelen mostrar el mayor aumento de ® sensibilidad con un incremento de la temperatura de la fuente. La técnica de la sonda TurboIonSpray es lo suficientemente suave como para usarla con compuestos lábiles, tales como péptidos, proteínas y fármacos termolábiles. TM Cuando el calentador está apagado, la sonda TurboIonSpray funciona como una fuente de iones IonSpray . También funciona con caudales de entre 5 µl/min y 3000 µl/min y vaporiza disolventes 100 % acuosos a 100 % orgánicos. La sonda TurboIonSpray consta de un tubo de acero inoxidable con un diámetro exterior de 0,012 pulgadas y se ubica en el centro con los dos calentadores turbo colocados en un ángulo de 45 grados a cada lado. Las muestras introducidas a través de la TurboIonSpray sonda se ionizan en el tubo mediante la aplicación de alta tensión (voltaje de IonSpray). Después se nebulizan mediante el chorro de gas nitrógeno caliente, seco y de UHP (ultra alta pureza) de los calentadores turbo, creando un vapor de pequeñas gotas de alta carga. La combinación de efluentes de IonSpray y el gas seco caliente procedente del turbo pulverizador se proyecta en un ángulo de 90 grados a la ruta iónica. Consulte Principios de funcionamiento. Fuente de iones en la página 37. Figura 1-2 Piezas de la TurboIonSpray sonda Elemento Descripción 1 Tuerca de ajuste del electrodo (cuello negro) que ajusta la extensión de la punta del electrodo 2 Anillo de retención de bronce que sujeta la sonda a la torre de sondeo del alojamiento de la fuente de iones 3 Punta del electrodo a través de la cual las muestras se pulverizan en la zona de entrada de muestras de la fuente de iones Sonda APCI La sonda APCI es adecuada para lo siguiente: Fuente de iones Turbo V™ 8 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Descripción general de la fuente de iones • La ionización de compuestos que no forman inmediatamente iones en una solución. Suelen ser compuestos no polares. • La creación de espectros de APCI simples para experimentos LC/MS/MS. • Los análisis de alto rendimiento de muestras complejas y sucias. Es menos sensible a los efectos de la supresión de iones. • La rápida introducción de muestras mediante inyección de flujos con o sin una columna LC. La sonda APCI puede aceptar todo el efluente, sin dividirlo, con caudales de entre 50 µl/min y 3000 µl/min (a través de una columna de calibre ancho). Puede vaporizar compuestos volátiles y lábiles con una mínima descomposición térmica. La rápida desolvatación y vaporización de las gotas y los analitos arrastrados reduce la descomposición térmica y conserva la identidad molecular para la ionización mediante la aguja de descarga de la corona. Los tampones son fácilmente tolerados por la fuente de iones sin una contaminación significativa y la vaporización intermitente del efluente pulverizado permite que el 100 % del agua se utilice sin dificultad. La sonda APCI consta de un tubo de acero inoxidable con un diámetro interior de 100 µm (0,004 pulgadas) rodeado por un flujo de gas del nebulizador (Gas 1). La corriente de muestra líquida se bombea a través del pulverizador, donde se nebuliza en un tubo cerámico que contiene un calentador. La pared interna del tubo cerámico se puede mantener a un intervalo de temperatura de entre 100 °C y 750 °C, y está supervisada por el sensor integrado en el calentador. Un chorro de gas del nebulizador a alta velocidad fluye por la punta del electrodo para dispersar la muestra en forma de vapor de finas partículas. Se desplaza por el calentador de vaporización cerámico hasta la región de reacción de la fuente de iones y a continuación sobrepasa la aguja de descarga de corona, donde las moléculas de la muestra se ionizan a medida que pasan a través de la caja de la fuente de iones. Consulte Principios de funcionamiento. Fuente de iones en la página 37. Figura 1-3 Piezas de la sonda APCI Elemento Descripción 1 Tuerca de ajuste del electrodo (cuello negro) que ajusta la extensión de la punta del electrodo 2 Anillo de retención de bronce que sujeta la sonda a la torre de sondeo del alojamiento de la fuente de iones 3 Punta del electrodo a través de la cual las muestras se pulverizan en la zona de entrada de muestras de la fuente de iones Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 9 de 53 Descripción general de la fuente de iones Conexiones de gas y electricidad Las conexiones eléctricas de alta tensión y de gas se realizan a través de la parte delantera de la placa de la interfaz y se conectan internamente mediante la caja de la fuente de iones. Cuando la fuente de iones se instala en el espectrómetro de masas, se realizan todas las conexiones de electricidad y gas. Circuito detector de fuente de iones Un circuito detector de fuente de iones deshabilita el sistema de alimentación de alta tensión para el espectrómetro de masas y el sistema de escape de la fuente en los siguientes casos: • La envoltura de la fuente de iones no está instalada o no se ha instalado correctamente. • No se ha instalado una sonda. • El espectrómetro de masas detecta un fallo de gas. Sistema de escape de la fuente ¡ADVERTENCIA! Peligro de radiación, riesgo biológico o sustancias químicas tóxicas. Use la fuente de iones solo si dispone de los conocimientos y la formación adecuada para usar, contener y evacuar los materiales tóxicos o nocivos que se emplean con la fuente de iones. Deje de usar la fuente de iones si la ventana está quebrada o dañada, y póngase en contacto con un representante del servicio técnico de AB SCIEX. Cualquier material tóxico o nocivo introducido en el equipo estará presente en la fuente de iones y la salida de escape. Deseche los objetos con filo siguiendo los procedimientos de seguridad establecidos del laboratorio. ¡ADVERTENCIA! Peligro de radiación, riesgo biológico o sustancias químicas tóxicas. Asegúrese de usar el sistema de escape de la fuente para eliminar el escape de vapor de la muestra del entorno del laboratorio. Para conocer los requisitos del sistema de escape de la fuente, consulte la Guía de planificación y suministros de instalación. ¡ADVERTENCIA! Peligro de radiación, riesgo biológico o sustancias químicas tóxicas. Ventile el sistema de escape de la fuente mediante una campana extractora externa o un orificio de ventilación externo a fin de evitar que se liberen vapores peligrosos en el entorno del laboratorio. Fuente de iones Turbo V™ 10 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Descripción general de la fuente de iones ¡ADVERTENCIA! Peligro de incendio. No dirija más de 3 ml/min de disolvente a la fuente de iones. Si se sobrepasa el caudal máximo, el disolvente puede acumularse en la fuente de iones. Asegúrese de que el sistema de escape de la fuente está funcionando para evitar que se acumulen vapores inflamables en la fuente de iones. Todas las fuentes de iones producen tanto vapores de disolventes como de muestras. Estos vapores constituyen un posible riesgo para el entorno del laboratorio. El sistema de escape de la fuente está diseñado para eliminar de forma segura los vapores de muestra y disolvente, y permitir su correcta manipulación. Una vez instalada la fuente de iones, el espectrómetro de masas no funcionará a menos que el sistema de escape de la fuente esté en funcionamiento. Un interruptor de vacío montado en el circuito de escape de la fuente mide el vacío en la fuente. Si el vacío de la fuente aumenta por encima del punto de ajuste con la sonda instalada, el sistema entrará en estado de fallo de escape (no preparado). Un sistema de escape activo elimina el escape de la fuente de iones (vapor de muestra, disolvente y gases) a través de un puerto de drenaje sin introducir ruido químico. El puerto de drenaje se conecta, a través de una cámara de drenaje y una bomba de escape de la fuente, a una botella de drenaje y, desde ahí, a un sistema de ventilación de escape suministrado por el cliente. Para obtener más información sobre los requisitos de ventilación del sistema de escape de la fuente, consulte la Guía de planificación y suministros de instalación. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 11 de 53 Instalación de la fuente de iones 2 ¡ADVERTENCIA! Riesgo de descarga eléctrica. Instale la fuente de iones en el espectrómetro de masas como último paso de este procedimiento. Hay alta tensión cuando la fuente de iones está instalada en el equipo. La fuente de iones está conectada a la interfaz de vacío y se mantiene en su posición gracias a dos pestillos de la fuente. El interior de la fuente de iones se puede observar a través de las ventanas de vidrio templado que se encuentran en el lateral y en el extremo de la fuente de iones. Cuando la fuente de iones está instalada, el software reconoce la fuente de iones y muestra la identificación de la fuente de iones. Materiales necesarios • Conjunto de alojamiento de la fuente de iones • sonda TurboIonSpray • (Opcional) Sonda APCI • Kit de consumibles de la fuente de iones ® Preparación para la instalación ¡ADVERTENCIA! Peligro de radiación, material biológico o sustancias químicas tóxicas. Asegúrese de que el electrodo sobresalga más allá de la punta de la sonda a fin de evitar que escapen vapores peligrosos de la fuente. El electrodo no debe estar embutido dentro de la sonda. ¡ADVERTENCIA! Peligro de perforación. Tenga cuidado al manipular el tubo del electrodo. La punta del tubo del electrodo es muy afilada. ¡Sugerencia! No deseche el paquete vacío. Utilícelo para guardar la fuente de iones cuando no la esté usando. • Ajuste la tapa de ajuste del electrodo negra en la sonda para desplazar la punta del electrodo dentro del tubo del electrodo. Para obtener una estabilidad y rendimiento óptimos, la punta del electrodo debe extenderse entre 0,5 mm y 1mm desde el extremo de la sonda. Consulte la Ajuste de la extensión de la punta del electrodo en la página 30. Fuente de iones Turbo V™ 12 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Instalación de la fuente de iones Instalación de la sonda ¡ADVERTENCIA! Peligro de descarga eléctrica. Asegúrese de que la fuente de iones está totalmente desconectada del espectrómetro de masas antes de continuar. ¡ADVERTENCIA! Riesgo de descarga eléctrica. Instale la sonda en la fuente de iones antes de instalar la fuente de iones en el espectrómetro de masas. PRECAUCIÓN: Posible daño en el sistema. No permita que la punta del electrodo sobresaliente o la aguja de descarga de la corona entren en contacto con ninguna pieza de la caja de la fuente de iones para evitar dañar la sonda. PRECAUCIÓN: Posible daño en el sistema. Asegúrese de que la punta de la aguja de ® descarga de corona esté separada de la abertura cuando utilice la sonda TurboIonSpray . La sonda no está previamente instalada en la fuente de iones. Extraiga siempre la fuente de iones del espectrómetro de masas antes de cambiar de sonda. Consulte Extracción de la fuente de iones en la página 27. Si la sonda no está instalada correctamente en la fuente de iones, se desactiva el suministro de alta tensión para el espectrómetro de masas y el sistema de escape de la fuente. 1. Introduzca la sonda en la de la caja. Alinee el orificio de la sonda con el pasador de alineación en la parte superior de la fuente de iones. Consulte Componentes de la fuente de iones en la página 6. 2. Presione suavemente la sonda para que los contactos se acoplen con la caja. 3. Gire el anillo de retención de latón sobre la sonda, presiónelo para acoplar sus roscas con las roscas de la torre de la caja y, a continuación, apriete con las manos el anillo todo lo que pueda. Para apretar, utilice los dedos únicamente para evitar daños en las roscas. 4. Solo para la sonda APCI, asegúrese de que la punta de la aguja de descarga de la corona de la sonda apunta hacia la abertura en la place de chapa. Consulte Ajuste de la posición de la aguja de descarga de la corona en la página 22. Instalación de la fuente de iones en el espectrómetro de masas ¡ADVERTENCIA! Riesgo de descarga eléctrica. Instale la sonda en la fuente de iones antes de instalar la fuente de iones en el espectrómetro de masas. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 13 de 53 Instalación de la fuente de iones ¡Sugerencia! Para que el rendimiento del sistema sea óptimo, utilice la placa del orificio adecuada para el sistema en cuestión. No utilice una placa del orificio de otro sistema. El número de modelo del sistema está grabado en la placa del orificio. Si la sonda de la fuente de iones no se ha instalado correctamente, no estará disponible el sistema de alimentación de alta tensión. 1. Asegúrese de que los pestillos de la fuente a cada lado de la fuente de iones apunten hacia arriba, en la posición de las 12 punto. Consulte Componentes de la fuente de iones en la página 6. 2. Alinee la fuente de iones con la interfaz de vacío asegurándose de que los pestillos de la fuente de iones estén alineados con las tomas de corriente de la interfaz de vacío. 3. Presione suavemente la fuente de iones contra la interfaz de vacío y, a continuación, gire los pestillos de la fuente de iones hacia abajo para fijar la fuente de iones en su sitio. El espectrómetro de masas reconoce la fuente de iones y muestra la identificación de la fuente de iones ® ® en el software Analyst o Analyst TF. 4. Conecte el tubo del dispositivo de suministro de muestras a la unión a tierra de la fuente de iones. Conexión del tubo de muestra ¡ADVERTENCIA! Riesgo de descarga eléctrica. No derive la conexión de unión a tierra. La unión de la conexión a tierra proporciona una conexión a tierra entre el espectrómetro de masas y el dispositivo de introducción de muestras. ¡ADVERTENCIA! Riesgo de radiación, material biológico o sustancias químicas tóxicas. Asegúrese de que la tuerca del tubo de muestra esté correctamente apretada antes de poner en funcionamiento este equipo para evitar las fugas. Consulte Componentes de la fuente de iones en la página 6. 1. Introduzca un trozo de 30 cm del tubo PEEK rojo en la tuerca del tubo de muestra. 2. Instale la tuerca del tubo de muestra en el conector de la parte superior de la sonda y, a continuación, apriete la tuerca del tubo de muestra con las manos tanto como sea posible. 3. Conecte el otro extremo del tubo PEEK rojo a la unión a tierra en la fuente de iones . Fuente de iones Turbo V™ 14 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Optimización de la fuente de iones 3 ¡ADVERTENCIA! Peligro de radiación, riesgo biológico o sustancias químicas tóxicas. Use la fuente de iones solo si dispone de los conocimientos y la formación adecuada para usar, contener y evacuar los materiales tóxicos o nocivos que se emplean con la fuente de iones. Deje de usar la fuente de iones si la ventana está quebrada o dañada, y póngase en contacto con un representante del servicio técnico de AB SCIEX. Cualquier material tóxico o nocivo introducido en el equipo estará presente en la fuente de iones y la salida de escape. Deseche los objetos con filo siguiendo los procedimientos de seguridad establecidos del laboratorio. ¡ADVERTENCIA! Peligro de incendio. No dirija más de 3 ml/min de disolvente a la fuente de iones. Si se sobrepasa el caudal máximo, el disolvente puede acumularse en la fuente de iones. Asegúrese de que el sistema de escape de la fuente está funcionando para evitar que se acumulen vapores inflamables en la fuente de iones. Optimice la fuente de iones cuando cambien la composición de la fase móvil, el analito o el caudal. El rendimiento de la fuente se ve afectado por varios parámetros. Optimice el rendimiento cuando inyecte un compuesto conocido y supervise la señal del ión conocido. Ajuste los parámetros del micrómetro, el gas y la tensión para maximizar la relación señal/ruido y la estabilidad de la señal. Introducción de muestras Predeterminado La corriente de muestra líquida se bombea a la fuente de iones mediante una bomba de LC, o bien mediante una bomba de jeringa. Si se introduce mediante una bomba de LC, la muestra se puede inyectar directamente en la fase móvil utilizando el FIA (análisis de inyección de flujos) o el conector en forma de T para infusión, o bien mediante una columna de separación utilizando un inyector de bucle o un automuestreador. Si se introduce con una bomba de jeringa, la muestra se inyecta directamente en la fuente de iones. La optimización de la infusión se puede utilizar para la optimización de la ruta iónica y la selección de fragmentos MS/MS. Caudal Los caudales de muestras se determinan por el sistema de cromatografía o por el volumen de la muestra disponible. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 15 de 53 Optimización de la fuente de iones Requisitos de la entrada de muestra • Utilice las prácticas y los procedimientos analíticos apropiados para reducir al mínimo los volúmenes muertos externos. La entrada de muestra transfiere la muestra líquida a la entrada de la fuente de iones sin pérdidas y con volúmenes muertos mínimos. • Prefiltre las muestras de forma que el tubo capilar de las entradas de muestra no quede bloqueado por partículas, muestras precipitadas o sales. • Asegúrese de que todas las conexiones estén suficientemente apretadas para evitar fugas. No las apriete demasiado. ® TurboIonSpray Optimización de la sonda ¡ADVERTENCIA! Riesgo de radiación, material biológico o sustancias químicas tóxicas. Asegúrese de que el espectrómetro de masas está correctamente ventilado y que la ventilación general del laboratorio sea adecuada. Es necesaria una ventilación adecuada del laboratorio para controlar las emisiones de los disolventes y muestras y para el funcionamiento seguro del espectrómetro de masas. PRECAUCIÓN: Posible daño en el sistema. Si el sistema de LC conectado al espectrómetro ® ® de masas no está controlado por el software Analyst o Analyst TF, no debe dejar desatendido el espectrómetro de masas mientras está en funcionamiento. El sistema de LC puede inundar la fuente de iones cuando el espectrómetro de masas pasa al modo Standby. El rendimiento de la sonda TurboIonSpray se ve afectado por varios parámetros. Optimice el rendimiento cuando inyecte un compuesto conocido y supervise la señal del ión conocido. Ajuste los parámetros para ® maximizar la relación señal/ruido y la estabilidad de la señal. Consulte TurboIonSpray parámetros para la sonda en la página 43. Nota: Si el parámetro Ion Spray Voltage (IS) o IonSpray Voltage Floating (ISVF) es demasiado alto, puede producirse una descarga de la corona, que se ve como un resplandor azul en la punta de la sonda ® TurboIonSpray . Una descarga de la corona producirá una reducción de la sensibilidad y la estabilidad de la señal de iones. Nota: Para mantener el sistema limpio y con un funcionamiento óptimo, ajuste la posición de la sonda al cambiar el caudal. ¡Sugerencia! Es más fácil optimizar la señal y la relación señal/ruido con el análisis de inyección de flujo o las inyecciones en la columna. Fuente de iones Turbo V™ 16 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Optimización de la fuente de iones Caudal y temperatura ® La cantidad y el tipo de la muestra afectan a la temperatura de la sonda TurboIonSpray óptima. A caudales mayores, aumenta la temperatura óptima. Un factor más significativo es la composición del disolvente. A medida que el contenido orgánico del disolvente aumenta, debe disminuir la temperatura de sonda óptima. La sonda TurboIonSpray se emplea normalmente con caudales de muestra de entre 40 y 1000 µL/min. El calor se utiliza para aumentar el índice de evaporación, lo que mejora la eficiencia de la ionización y da lugar a una mayor sensibilidad. Los caudales extremadamente bajos de disolventes con alto contenido orgánico no suelen necesitar temperaturas elevadas. Caudal (µl/min) Temperatura (°C) 1 a 20 0 a 100 20 a 100 150 a 350 100 a 300 300 a 400 300 a 1000 400 a 500 Configuración del sistema 1. Configure la bomba HPLC para suministrar la fase móvil con el caudal necesario. Consulte Tensiones y parámetros de la fuente en la página 43. 2. Conecte la unión de conexión a tierra de la fuente de iones a una bomba, mediante un inyector equipado con un bucle de 5 µl, o a un automuestreador. 3. Si utiliza un automuestreador, configúrelo para realizar múltiples inyecciones. Ejecución del método 1. Iniciar el software Analyst ® ® o Analyst TF. 2. En la barra de navegación, en el modo Tune and Calibrate (Ajuste y calibración), haga doble clic en Manual Tuning (Ajuste manual). 3. Abra un método optimizado con anterioridad, o bien cree un método basado en los compuestos. 4. Si la fuente de iones se ha dejado enfriar, haga lo siguiente. a. Defina el parámetro Temperature (TEM) en 450. b. Deje que la fuente de iones se caliente durante 30 minutos. La fase de 30 minutos de calentamiento evita que los vapores de los disolventes se condensen en la sonda fría. 5. Inicie la adquisición. 6. Inicie el flujo y la inyección de muestras. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 17 de 53 Optimización de la fuente de iones Configuración de las condiciones iniciales 1. En la pestaña Source/Gas del editor Tune Method Editor, escriba un valor inicial para Ion Source Gas 1 (GS1). En bombas de LC, utilice un valor entre 40 y 60 para GS1. 2. Escriba un valor inicial para Ion Source Gas 2 (GS2). En bombas de LC, utilice un valor entre 30 y 50 para GS2. Nota: Gas 2 se utiliza con caudales mayores típicos en un sistema de LC y en colaboración con una mayor temperatura. 3. En el campo IonSpray Voltage (IS) [Voltaje de IonSpray (IS)] o IonSpray Voltage Floating (ISVF), escriba el valor adecuado para el espectrómetro de masas. Tabla 3-1 Valores de los parámetros IS e ISVF Espectrómetro de masas Valor inicial Sistemas de las series 3200, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500 y 6500 4500 ® TripleTOF 5500 4. En el campo Curtain Gas (CUR) , escriba el valor adecuado para el espectrómetro de masas. Tabla 3-2 Valores del parámetro CUR Espectrómetro de masas Valor inicial Sistemas 3200, 3500, 4000 y 4500 20 Sistemas 5000 y 5500 25 Sistemas 6500 30 ® TripleTOF De 20 a 25, en función del caudal ® Optimización de la posición de la sonda TurboIonSpray 1. Mire a través de la ventana del alojamiento de la fuente de iones para ver la posición de la sonda. 2. Utilice la configuración anterior del micrómetro vertical y horizontal o defina 5 como su posición inicial. 3. Utilice el FIA o un conector en forma de T para infusión para inyectar un caudal elevado de muestra. 4. Supervise la señal en el software. Fuente de iones Turbo V™ 18 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Optimización de la fuente de iones 5. Utilice el micrómetro horizontal para ajustar la posición de la sonda con pequeños incrementos hasta alcanzar la mejor señal o relación señal/ruido. La sonda se puede optimizar ligeramente a cada lado de la abertura. ¡Sugerencia! Es más fácil optimizar la señal y la relación señal/ruido con el análisis de inyección de flujo o las inyecciones en la columna. 6. Utilice el micrómetro vertical para ajustar la posición de la sonda con pequeños incrementos hasta alcanzar la mejor señal o relación señal/ruido. Nota: La posición vertical de la sonda depende del caudal. Con caudales más bajos, la sonda debe estar más cerca de la abertura. Con caudales más altos, la sonda debe estar más alejada. ¡ADVERTENCIA! Peligro de radiación, material biológico o sustancias químicas tóxicas. Asegúrese de que el electrodo sobresalga más allá de la punta de la sonda a fin de evitar que escapen vapores peligrosos de la fuente. El electrodo no debe estar embutido dentro de la sonda. 7. Ajuste la tapa negra de ajuste del electrodo en la sonda para extender la punta del electrodo. Normalmente, la extensión óptima del electrodo es de entre 0,5 mm y 1,0 mm más allá del extremo de la sonda. Después de optimizar la sonda ya solo necesitará pequeños ajustes. Si ha quitado la sonda, o si cambia la composición del analito, el caudal o el disolvente, repita el procedimiento de optimización después de la instalación. ¡Sugerencia! Dirija la pulverización de líquido de la sonda TurboIonSpray lejos de la abertura a fin TM de prevenir la contaminación de la misma, para evitar la penetración del caudal Curtain Gas , lo que puede producir una señal inestable, y para evitar cortocircuitos a causa de la presencia del líquido. Optimización de los parámetros de la fuente de iones y del gas y la tensión Optimice el Gas 1 (gas del nebulizador) para conseguir una mayor sensibilidad y estabilidad de la señal. El Gas 2 (gas del calentador) ayuda a evaporar el disolvente, lo que ayuda a incrementar la ionización de la muestra. Una temperatura demasiado elevada puede provocar una vaporización prematura del disolvente en la punta ® de la sonda TurboIonSpray , especialmente si la sonda está demasiado baja, lo que provocará la inestabilidad de la señal y un ruido de fondo químico elevado. De igual modo, un caudal de gas del calentador elevado puede producir una señal ruidosa o inestable. TM Utilice la menor tensión posible de la fuente IonSpray sin perder la señal. Céntrese en la señal/ruido y no solo en la señal. Si la tensión de la fuente IonSpray es demasiado alta, podría producirse una descarga de corona. Se ve como un resplandor azul en la punta de la sonda TurboIonSpray. Esto producirá una reducción de la sensibilidad y la estabilidad señal de iones. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 19 de 53 Optimización de la fuente de iones 1. Ajuste GS1 y GS2 en incrementos de 5 hasta alcanzar la mejor señal o relación señal/ruido. Nota: Para evitar la contaminación, utilice el valor de CUR más alto posible sin sacrificar la sensibilidad. No configure CUR por debajo de 20. Esto ayuda a evitar la penetración del flujo de Curtain Gas, que puede producir una señal ruidosa, a evitar la contaminación de la abertura y aumentar la relación señal/ruido general. 2. Aumente el parámetro CUR hasta que la señal empiece a disminuir. 3. Ajuste IS o ISVF en incrementos de 500 V a fin de maximizar la relación señal/ruido. Nota: Si el parámetro Ion Spray Voltage (IS) o IonSpray Voltage Floating (ISVF) es demasiado alto, puede producirse una descarga de la corona, que se ve como un resplandor azul en la ® punta de la sonda TurboIonSpray . Una descarga de la corona producirá una reducción de la sensibilidad y la estabilidad de la señal de iones. Optimización de la temperatura del calentador turbo La temperatura óptima del calentador depende del compuesto, el caudal y la composición de la fase móvil. Cuanto mayor sea el caudal y mayor la composición acuosa, mayor será la temperatura optimizada. Cuando optimice la temperatura de la fuente, asegúrese de que la fuente de iones está equilibrada con respecto al nuevo ajuste de la temperatura. • Ajuste el valor TEM en incrementos de entre 50 °C y 100 °C hasta alcanzar la mejor señal o relación señal/ruido. Sugerencias de optimización • Utilice la temperatura más alta posible al optimizar compuestos. Una temperatura de 700 °C es común para muchos compuestos. Las temperaturas altas ayudan a mantener limpia la fuente de iones y reducir el ruido de fondo. • Utilice el caudal de Curtain Gas siguiente: • TM (CUR) más alto posible sin disminuir la señal. Esto le ayudará a lo • Evitar la penetración del caudal de Curtain Gas, que puede producir una señal ruidosa. • Evitar la contaminación de la abertura. • Aumentar la relación señal/ruido general. ® Dirigir la pulverización de líquido de la sonda TurboIonSpray lejos de la abertura a fin de: • Evitar la contaminación de la abertura. • Evitar la penetración del caudal de Curtain Gas, que puede crear una señal inestable. • Evitar cortocircuitos debido a la presencia de líquido. Fuente de iones Turbo V™ 20 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Optimización de la fuente de iones • TM Utilizar la menor tensión posible de la fuente IonSpray no solo en la señal. sin perder la señal. Céntrese en la señal/ruido y Optimización de la sonda APCI ¡ADVERTENCIA! Riesgo de radiación, material biológico o sustancias químicas tóxicas. Asegúrese de que el espectrómetro de masas está correctamente ventilado y que la ventilación general del laboratorio sea adecuada. Es necesaria una ventilación adecuada del laboratorio para controlar las emisiones de los disolventes y muestras y para el funcionamiento seguro del espectrómetro de masas. PRECAUCIÓN: Posible daño en el sistema. Si el sistema de LC conectado al espectrómetro ® ® de masas no está controlado por el software Analyst o Analyst TF, no debe dejar desatendido el espectrómetro de masas mientras está en funcionamiento. El sistema de LC puede inundar la fuente de iones cuando el espectrómetro de masas pasa al modo Standby. Consulte Parámetros para la sonda APCI en la página 44 . PRECAUCIÓN: Es más fácil optimizar la señal y la relación señal/ruido con el análisis de inyección de flujo o las inyecciones en la columna. Configuración del sistema 1. Configure la bomba HPLC para suministrar la fase móvil con el caudal necesario. Consulte Tensiones y parámetros de la fuente en la página 43. 2. Conecte la unión de conexión a tierra de la fuente de iones a una bomba, mediante un inyector equipado con un bucle de 5 µl, o a un automuestreador. 3. Si utiliza un automuestreador, configúrelo para realizar múltiples inyecciones. Ejecución del método 1. Iniciar el software Analyst ® ® o Analyst TF. 2. En la barra de navegación, en el modo Tune and Calibrate (Ajuste y calibración), haga doble clic en Manual Tuning (Ajuste manual). 3. Abra un método optimizado con anterioridad, o bien cree un método basado en los compuestos. 4. Si la fuente de iones se ha dejado enfriar, haga lo siguiente. a. Defina el parámetro Temperature (TEM) en 450. b. Deje que la fuente de iones se caliente durante 30 minutos. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 21 de 53 Optimización de la fuente de iones La fase de 30 minutos de calentamiento evita que los vapores de los disolventes se condensen en la sonda fría. 5. Inicie la adquisición. 6. Inicie el flujo y la inyección de muestras. Configuración de las condiciones iniciales 1. En la pestaña Source/Gas (Fuente/Gas) del Tune Method Editor (Editor del método de ajuste), escriba 30 en el campo Ion Source Gas 1 (GS1) [Gas de fuente de iones 1 (GS1)]. 2. En el campo Curtain Gas (CUR) , escriba el valor adecuado para el espectrómetro de masas. Tabla 3-3 Valores del parámetro CUR Espectrómetro de masas Valor inicial Sistemas 3200, 3500, 4000 y 4500 20 Sistemas 5000 y 5500 25 Sistemas 6500 30 ® TripleTOF De 20 a 25, en función del caudal 3. Escriba 1 en el campo Nebulizer Current (NC) [Corriente nebulizante (NC)]. Optimización de Gas 1 y Curtain Gas TM Flow (Caudal) 1. Ajuste GS1 en incrementos de cinco hasta alcanzar la mejor señal o relación señal/ruido. Nota: Para evitar la contaminación, utilice el valor de CUR más alto posible sin sacrificar la sensibilidad. No configure CUR por debajo de 20. Esto ayuda a evitar la penetración del flujo de Curtain Gas, que puede producir una señal ruidosa, a evitar la contaminación de la abertura y aumentar la relación señal/ruido general. 2. Aumente CUR hasta que la señal comience a disminuir. Ajuste de la posición de la aguja de descarga de la corona ¡ADVERTENCIA! Peligro de descarga eléctrica. Siga este procedimiento para evitar el contacto con las altas tensiones aplicadas a la aguja de descarga de corona, la placa de chapa y los calentadores. Fuente de iones Turbo V™ 22 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Optimización de la fuente de iones Cuando utilice la sonda APCI, asegúrese de que la aguja de descarga de la corona esté apuntando hacia la abertura. Materiales necesarios • Destornillador de punta fija aislado 1. Utilice un destornillador de punta plana aislado para girar el tornillo de ajuste de la aguja de descarga de corona de la parte superior de la aguja. 2. Mire a través de la ventana de vidrio para asegurarse de que la aguja está alineada con la punta que se dirige hacia la abertura. 3. Guarde el método optimizado como nuevo método. Optimización de la posición de la sonda APCI Asegúrese de que la abertura de la placa de chapa no presente disolvente ni gotas de disolvente en ningún momento. La posición de la boquilla pulverizadora afecta a la sensibilidad y la estabilidad de la señal. Ajuste la sensibilidad de la sonda únicamente con pequeños incrementos. En el caso de caudales más bajos, coloque la sonda más cerca de la abertura. En el caso de caudales más altos, coloque la sonda más alejada de la abertura. Figura 3-1 Posición de la boquilla pulverizadora Elemento Descripción 1 Aguja de descarga de la corona 2 Placa de chapa 3 Sonda APCI Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 23 de 53 Optimización de la fuente de iones 1. Utilice los ajustes anteriores de horizontalidad y verticalidad del micrómetro o ajústelos a 5 mm como posición de partida inicial. Nota: Para evitar reducir el rendimiento del espectrómetro de masas, no pulverice directamente en la abertura. 2. Utilice el FIA o un conector en forma de T para infusión para inyectar un caudal elevado de muestra. 3. Supervise la señal en el software. 4. Utilice el micrómetro horizontal para ajustar la sonda con pequeños incrementos hasta alcanzar la mejor señal o relación señal/ruido. 5. Utilice el micrómetro vertical para ajustar la sonda en pequeños incrementos hasta alcanzar la mejor señal o relación señal/ruido. Después de optimizar la sonda ya solo necesitará pequeños ajustes. Si ha quitado la sonda, o si cambia la composición del analito, el caudal o el disolvente, repita el procedimiento de optimización después de la instalación. Optimización de la corriente nebulizante La fuente de iones está controlada por corriente y no por tensión. Seleccione la corriente adecuada para el método de adquisición, independientemente de la posición seleccionada de la fuente de iones. • Comience con un valor para Nebulizer Current (NC) de 1 y aumente hasta alcanzar la mejor señal o relación señal/ruido. La NC aplicada a la aguja de descarga de corona suele optimizarse entre 1 µA y 5 µA en modo positivo. Si no se observan cambios en la señal cuando aumenta la corriente, entonces deje la corriente en el valor más bajo que ofrezca la mejor señal o relación señal/ruido. Optimización de la temperatura de la sonda APCI ¡ADVERTENCIA! Riesgo de radiación, material biológico o sustancias químicas tóxicas. Asegúrese de que el espectrómetro de masas está correctamente ventilado y que la ventilación general del laboratorio sea adecuada. Es necesaria una ventilación adecuada del laboratorio para controlar las emisiones de los disolventes y muestras y para el funcionamiento seguro del espectrómetro de masas. La cantidad y el tipo de disolvente afectan a la temperatura óptima de la sonda APCI. A caudales mayores, aumenta la temperatura óptima. • Ajuste el valor TEM en incrementos de entre 50 °C y 100 °C hasta alcanzar la mejor señal o relación señal/ruido. Fuente de iones Turbo V™ 24 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Mantenimiento de la fuente de iones 4 Las siguientes advertencias se aplican a todos los procedimientos de mantenimiento que se describen en este capítulo. ¡ADVERTENCIA! Peligro de superficies calientes. Espere un mínimo de 30 minutos para que la fuente de iones se enfríe antes de iniciar cualquier procedimiento de mantenimiento. Las superficies de la fuente de iones y los componentes de la interfase de vacío se calientan durante su funcionamiento. ¡ADVERTENCIA! Peligro de incendio y sustancias químicas tóxicas. Mantenga los disolventes inflamables lejos de las llamas y las chispas, y utilícelos solo en campanas extractoras de humos químicos ventilados o en cabinas de seguridad. ¡ADVERTENCIA! Riesgo de toxicidad química. Utilice equipo de protección individual, incluidos una bata de laboratorio, guantes y gafas de seguridad, para evitar la exposición de la piel o los ojos a los disolventes. ¡ADVERTENCIA! Peligro de radiación, material biológico o sustancias químicas tóxicas. En caso de derrame de sustancias químicas, revise las hojas de datos de seguridad para conocer las instrucciones específicas. Detenga el derrame o la fuga solo si es seguro hacerlo. Utilice el equipo de protección individual adecuado y toallas absorbente para contener el derrame y deséchelo según lo dispuesto por las normas locales. ¡ADVERTENCIA! Peligro de descarga eléctrica. Evite el contacto con las altas tensiones aplicadas a la fuente de iones durante el funcionamiento. Ponga el sistema en el modo de espera antes de ajustar el tubo de muestra u otros equipos cerca de la fuente de iones. Esta sección contiene procedimientos generales de mantenimiento para la fuente de iones. Para determinar la frecuencia con la que se debe limpiar la fuente de iones o realizar un mantenimiento preventivo, tenga en cuenta lo siguiente: • Compuestos probados • Limpieza de los métodos de preparación • Cantidad de tiempo que una sonda inactiva contiene una muestra • Tiempo de ejecución del sistema general Estos factores pueden provocar cambios en el rendimiento de la fuente de iones, lo que indica que se requiere un mantenimiento. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 25 de 53 Mantenimiento de la fuente de iones Asegúrese de que la fuente de iones instalada esté totalmente sellada respecto al espectrómetro de masas y no haya signos de fugas de gas. Realice inspecciones de mantenimiento general para garantizar que el funcionamiento del sistema es seguro. Limpie los componentes de la fuente de iones con regularidad para mantenerla en buen estado de funcionamiento. PRECAUCIÓN: Posible daño en el sistema. Utilice solo el método de limpieza recomendado a fin de evitar dañar los equipos. Materiales necesarios • Llave de boca de 0,25 pulgadas • Llave hexagonal de 0,14 pulgadas (se suministra llave en forma de L) • Llave hexagonal de 5 mm • Llave hexagonal de 2,5 mm • Destornillador Phillips • Destornillador de punta plana • Metanol de grado MS • Agua desionizada de grado HPLC • Gafas de seguridad • Máscara y filtro de respiración • Guantes no empolvados (se recomienda que sean de neopreno) • Bata de laboratorio Limpieza de las sondas Enjuague periódicamente la fuente de iones, independientemente del tipo de compuestos muestreado. Hágalo ® ® mediante la configuración de un método en el software Analyst o Analyst TF específicamente para realizar una operación de enjuague. 1. Cambie a una fase móvil que sea 1:1 de agua:acetonitrilo, o bien 1:1 de agua:metanol. 2. Ajuste la posición de la sonda de modo que quede lo más lejos posible del orificio. 3. En el software, haga lo siguiente. a. Ajuste Temperature (TEM) [Temperatura (TEM)] entre500 y 600. b. Ajuste Ion Source Gas (GS1) [Gas de fuente de iones (GS1)] y Ion Source Gas 2 (GS2) [Gas de fuente de iones 2 (GS2)] al menos a 40. c. Configure Curtain Gas (CUR) con el valor más alto posible. d. Espere hasta que se alcance el punto de ajuste de temperatura TEM. 4. Inyecte fase móvil por el tubo y la sonda a 1 ml/min durante 10-15 minutos. Fuente de iones Turbo V™ 26 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Mantenimiento de la fuente de iones 5. Asegúrese de que la sonda y el tubo de muestra queden perfectamente enjuagados. Extracción de la fuente de iones Nota: (sistemas 3500, 4500, 5500, 6500 y 6600) Hay un flujo de 5,3 l/min de nitrógeno adicional cuando se apaga el espectrómetro de masas o cuando se retira la fuente de iones del sistema. Para minimizar el consumo de gas nitrógeno y para mantener limpio el espectrómetro de masas cuando no se esté utilizando, deje instalada la fuente de iones en el espectrómetro y el sistema encendido. La fuente de iones se puede extraer fácil y rápidamente sin necesidad de herramientas. Extraiga siempre la fuente de iones del espectrómetro de masas antes de realizar cualquier operación de mantenimiento en la fuente de iones o de intercambiar sondas. 1. Detenga todas las exploraciones en curso. 2. Apague la corriente de muestra. 3. Escriba 0 en el campo Temperature (TEM) (Temperatura), si se están utilizando los calentadores. 4. Deje que la fuente de iones se enfríe durante un mínimo de 30 minutos. 5. Desconecte el tubo de muestra de la unión a tierra. 6. Gire los dos pestillos de la fuente hacia arriba, hasta la posición de las 12 en punto, para liberar la fuente de iones. 7. Separe suavemente la fuente de iones de la interfaz de vacío. 8. Coloque la fuente de iones sobre una superficie limpia y segura. Extracción de la sonda Procedimientos de condiciones previas • Extracción de la fuente de iones en la página 27 ¡ADVERTENCIA! Peligro de descarga eléctrica. Asegúrese de que la fuente de iones está totalmente desconectada del espectrómetro de masas antes de continuar. La sonda se puede extraer fácil y rápidamente sin necesidad de herramientas. Extraiga siempre la fuente de iones del espectrómetro de masas antes de cambiar las sondas o de realizar el mantenimiento de la sonda. 1. Afloje la tuerca del tubo de muestra y luego desconecte el tubo de muestra de la sonda. 2. Afloje el anillo de retención de latón que sujeta la sonda a la envoltura de la fuente de iones. 3. Tire suavemente de la sonda hacia arriba y sáquela de la carcasa de la fuente de la torre. Nota: No permita que la punta de la sonda entre en contacto con nada al sacarla o guardarla. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 27 de 53 Mantenimiento de la fuente de iones 4. Coloque la sonda en una superficie limpia y segura. Limpieza del tubo del electrodo Procedimientos de condiciones previas • Extracción de la fuente de iones en la página 27 • Extracción de la sonda en la página 27 ¡ADVERTENCIA! Peligro de descarga eléctrica. Asegúrese de que la fuente de iones está totalmente desconectada del espectrómetro de masas antes de continuar. ¡ADVERTENCIA! Peligro de perforación. Tenga cuidado al manipular el tubo del electrodo. La punta del tubo del electrodo es muy afilada. La sonda contiene un tubo de electrodo. Limpie periódicamente el tubo del electrodo o cuando observe un descenso en el rendimiento. Este procedimiento se aplica a ambas sondas. Utilice este procedimiento para extraer el tubo del electrodo a fin de limpiarlo. Si no se puede limpiar el tubo del electrodo, utilice este procedimiento para reemplazarlo. 1. Extraiga la tuerca de ajuste del electrodo. 2. Sosteniendo la sonda con la punta hacia abajo, de forma que el resorte permanezca dentro de la sonda, retire de la misma la unión PEEK y el tubo del electrodo acoplado. Figura 4-1 Sonda, vista ampliada Elemento Descripción 1 Tuerca de ajuste del electrodo 2 Tuerca de retención de 1/4 de pulgada Fuente de iones Turbo V™ 28 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Mantenimiento de la fuente de iones Elemento Descripción 3 Resorte 4 Anillo de retención de bronce 5 Tubo del pulverizador 6 Punta del electrodo 7 Tubo del electrodo 8 Unión PEEK 3. Utilice la llave de boca de 1/4 de pulgada para extraer la tuerca de retención que sostiene el tubo del electrodo en la unión PEEK. 4. Extraiga el tubo del electrodo de la tuerca de retención. 5. Limpie el tubo del electrodo con una solución de metanol y agua al 1:1 sumergiendo el tubo en un baño ultrasónico. Montaje de los componentes de la sonda ¡ADVERTENCIA! Peligro de perforación. Tenga cuidado al manipular el tubo del electrodo. La punta del tubo del electrodo es muy afilada. Cuando el tubo del electrodo esté limpio o lo haya reemplazado por una pieza nueva, monte los componentes de la sonda. 1. Introduzca el tubo del electrodo en la tuerca de retención y, a continuación, en la unión PEEK. Asegúrese de que el tubo del electrodo esté introducido hasta el final en la unión PEEK. Si existe un hueco entre el tubo del electrodo y su emplazamiento dentro de la unión, puede producirse un volumen muerto. 2. Apriete la tuerca de retención. No fuerce la tuerca de retención ni la apriete excesivamente, ya que el tubo podría presentar fugas. 3. Asegúrese de que el resorte esté aún dentro de la sonda y, a continuación, apriete la tuerca de ajuste del electrodo. 4. Alinee el tubo del electrodo con la abertura estrecha del tubo del pulverizador e introduzca la unión PEEK y el tubo del electrodo adherido en la sonda. Tenga cuidado de no doblar el tubo del electrodo. 5. Introduzca la sonda en la caja de la fuente, con cuidado de que la punta de la sonda no entre en contacto con ninguna parte de la caja de la fuente de iones. 6. Empuje hacia abajo el anillo de retención de latón para acoplar su rosca con la rosca de la caja de la fuente de iones y, seguidamente, apriete el anillo. 7. Inserte un trozo de 30 cm del tubo PEEK rojo en la tuerca del tubo de muestra. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 29 de 53 Mantenimiento de la fuente de iones 8. Instale la tuerca del tubo de muestra en el conector de la parte superior de la sonda y, a continuación, apriete la tuerca del tubo de muestra con las manos tanto como sea posible. 9. Instale la fuente de iones en el espectrómetro de masas. Consulte la Instalación de la fuente de iones en la página 12. 10. Ajuste la extensión de la punta del electrodo. Consulte la Ajuste de la extensión de la punta del electrodo en la página 30. Ajuste de la extensión de la punta del electrodo ¡ADVERTENCIA! Peligro de radiación, material biológico o sustancias químicas tóxicas. Asegúrese de que el electrodo sobresalga más allá de la punta de la sonda a fin de evitar que escapen vapores peligrosos de la fuente. El electrodo no debe estar embutido dentro de la sonda. ¡ADVERTENCIA! Peligro de perforación. Tenga cuidado al manipular el tubo del electrodo. La punta del tubo del electrodo es muy afilada. Ajuste la extensión de la punta del electrodo para obtener un mejor rendimiento. El valor óptimo depende de los compuestos. La distancia a la que se extiende la punta del electrodo afecta a la forma del cono de pulverización y la forma del cono de pulverización afecta a la sensibilidad del espectrómetro de masas. • Ajuste la tapa de ajuste del electrodo negra en la parte superior de la sonda para extender o replegar la punta del electrodo. La punta del electrodo debe sobresalir entre 0,5 mm y 1 mm del extremo de la sonda. Figura 4-2 Ajuste de la extensión de la punta del electrodo Fuente de iones Turbo V™ 30 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Mantenimiento de la fuente de iones Elemento Descripción 1 Sonda 2 Electrodo Sustitución de la aguja de descarga de la corona Procedimientos de condiciones previas • Extracción de la fuente de iones en la página 27 • Extracción de la sonda en la página 27 ¡ADVERTENCIA! Peligro de descarga eléctrica. Asegúrese de que la fuente de iones está totalmente desconectada del espectrómetro de masas antes de continuar. ¡ADVERTENCIA! Peligro de punción. Manipule con cuidado la aguja. La punta de la aguja está muy afilada. La punta de la aguja de descarga de corona puede oxidarse tanto que es posible que sea necesario separarla cortándola de la aguja. Si ocurre esto, reemplace toda la aguja de descarga de corona. 1. Gire la fuente de iones para se pueda acceder al lado abierto. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 31 de 53 Mantenimiento de la fuente de iones Figura 4-3 Aguja de descarga de corona Elemento Descripción 1 Chimenea de escape 2 Manguito cerámico 3 Punta de la aguja de descarga de la corona 2. Mientras sostiene la punta de la aguja de descarga de la corona entre el dedo índice y el pulgar de una mano y la aguja de descarga de la corona con la otra mano, gire la punta de la aguja de descarga de la corona en sentido contrario al de las agujas del reloj para aflojar y extraer con cuidado la punta. 3. Tire hacia abajo y con cuidado de la aguja de descarga de la corona a través de la chimenea de escape para extraerla. 4. Introduzca la nueva aguja a través de la chimenea de escape en el manguito cerámico hasta donde le sea posible. 5. Sosteniendo una nueva punta entre el dedo índice y el pulgar de una mano y la aguja de descarga de la corona con la otra mano, gire la punta de la aguja de descarga de la corona en el sentido de las agujas del reloj para instalar la punta. Fuente de iones Turbo V™ 32 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Mantenimiento de la fuente de iones 6. Inserte la sonda y, a continuación, instale la fuente de iones en el espectrómetro de masas. Consulte la Instalación de la fuente de iones en la página 12. Sustitución del tubo de muestra ¡ADVERTENCIA! Peligro de descarga eléctrica. Evite el contacto con las altas tensiones aplicadas a la fuente de iones durante el funcionamiento. Ponga el sistema en el modo de espera antes de ajustar el tubo de muestra u otros equipos cerca de la fuente de iones. Utilice el siguiente procedimiento para reemplazar el tubo de muestra si presenta un bloqueo. 1. Detenga el flujo de muestra y asegúrese de que todo el gas restante se ha eliminado a través del sistema de escape de la fuente. Consulte la Extracción de la fuente de iones en la página 27. 2. Desconecte el tubo de muestra de la sonda y la unión a tierra. 3. Reemplace el tubo de muestra con un tubo de la misma longitud que el anterior. 4. Instale la fuente de iones. Consulte la Instalación de la fuente de iones en la página 12. 5. Inicie el flujo de muestra Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 33 de 53 Consejos de solución de problemas Síntoma Posible causa ® ® El software Analyst o Analyst La sonda no está instalada. TF informa de que el espectrómetro de masas está en estado Fault (Fallo). La sonda no está conectada firmemente. 5 Acción correctiva Instale la sonda. Consulte Instalación de la sonda en la página 13. a. Extraiga la sonda. Consulte Extracción de la sonda en la página 27. b. Instale la sonda asegurándose de que el anillo de retención de latón quede bien apretado. Consulte Instalación de la sonda en la página 13. El software Analyst o Analyst TF El fusible F3 está fundido. indica que se está utilizando la sonda APCI, pero está instalada la ® sonda TurboIonSpray . Póngase en contacto con un representante del servicio técnico. La pulverización no es uniforme. El electrodo está bloqueado. Limpie o reemplace el electrodo. Consulte Limpieza del tubo del electrodo en la página 28. La sensibilidad no es adecuada. Los componentes de la interfaz (extremo delantero) están sucios. Limpie los componentes de la interfaz e instale la fuente de iones. En la región del analizador están presentes vapor del disolvente y otros compuestos desconocidos. Optimice el flujo de Curtain Gas™. Consulte Optimización de la fuente de iones en la página 15. El espectrómetro de masas no ha superado las pruebas de instalación. Realice pruebas de instalación en el espectrómetro de masas con la fuente predeterminada. La solución de prueba no se ha preparado correctamente. a. Confirme que las soluciones de prueba se han preparado correctamente. Durante la prueba, la fuente de iones no cumple las especificaciones. b. Si no es posible resolver el problema, póngase en contacto con el representante del servicio técnico. Fuente de iones Turbo V™ 34 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Consejos de solución de problemas Síntoma Posible causa Acción correctiva El ruido de fondo es alto. La temperatura (TEM) es demasiado Optimice la temperatura. alta. El caudal de gas del calentador (GS2) es demasiado alto. Optimice el flujo de gas del calentador. La fuente de iones está contaminada. • Limpie o reemplace los componentes de la fuente de iones. Consulte Mantenimiento de la fuente de iones en la página 25. • Acondicione la fuente y el extremo delantero: a. Mueva la sonda APCI o TIS a la posición más alejada de la abertura (vertical y horizontalmente). b. Asegúrese de que el calentador de la interfaz está encendido. c. Infunda o inyecte 50:50 de metanol:agua con un caudal de bomba de 1 mL/min. d. En el software Analyst o Analyst TF, ajuste TEM a 650, GS1 a 60 y GS2 a 60. e. Ajuste el flujo Curtain Gas a 45 o 50. f. El rendimiento de la fuente de iones La sonda no está optimizada. ha disminuido. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Ejecútelo durante dos horas como mínimo o preferiblemente por la noche para obtener resultados óptimus. ® Consulte TurboIonSpray Optimización de la sonda en la página 16 o Optimización de la sonda APCI en la página 21 . Fuente de iones Turbo V™ 35 de 53 Consejos de solución de problemas Síntoma Posible causa Acción correctiva La muestra no se había preparado Confirme que la muestra estaba correctamente o se ha degradado. preparada correctamente. Hay una fuga en los conectores de • entrada de muestras. • Se producen arcos o chispas. Fuente de iones Turbo V™ 36 de 53 Compruebe que los conectores estén apretados y reemplácelos si las fugas continúan. No apriete los adaptadores demasiado. Instale y optimice una fuente de iones alternativa. Si el problema no se soluciona, póngase en contacto con un representante del servicio técnico. La posición de la aguja de descarga Gire la aguja de descarga de la de la corona no es correcta. corona hacia la placa de chapa y retírela de la corriente de gas del calentador. Consulte Ajuste de la posición de la aguja de descarga de la corona en la página 22. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Principios de funcionamiento. Fuente de iones A ® Modo TurboIonSpray La sonda TurboIonSpray utiliza dos calentadores turbo para inyectar nitrógeno caliente, seco y de UHP (ultra alta pureza). La sonda se coloca en el centro entre los calentadores turbo, que están colocados en un ángulo TM de 45 grados a cada lado de la sonda. La combinación de IonSpray efluentes de y el gas seco caliente procedente los calentadores turbo se proyecta a un ángulo de 90 grados a la abertura en la placa de chapa. Solo los compuestos que se ionizan en el disolvente líquido se pueden generar como iones de fase gaseosa en la fuente. La eficiencia y el índice de generación de iones dependen de las energías de solvatación de los iones específicos. Los iones con energías de solvatación más baja son más proclives a evaporarse que los iones con energías de solvatación más elevada. La interacción entre IonSpray y los calentadores turbo ayuda a centrar la corriente y aumenta el índice de evaporación de gotas, lo que da lugar a un aumento de la señal de iones. El gas caliente aumenta la eficiencia de la evaporación de iones, lo que da lugar a una mayor sensibilidad y a la capacidad de manejar caudales de muestras líquidas mayores. Un flujo de alta velocidad de gas del nebulizador comparte gotas de la corriente de muestra líquida en la entrada de IonSpray. Mediante la alta tensión variable aplicada al pulverizador, la fuente de iones aplica una carga neta a cada gota. Esta carga facilita la dispersión de las gotas. Los iones de una sola polaridad son, de manera preferente, atraídos por la alta tensión a las gotas cuando se separan de la corriente líquida. No obstante, esta separación es incompleta y cada gota contiene muchos iones de ambas polaridades. En cada gota predominan iones de una determinada polaridad y la diferencia entre el número de iones cargados positivamente o negativamente da lugar a la carga neta. Solo el exceso de iones de la polaridad predominante estará disponible para la evaporación de iones y solo una fracción de estos llega a evaporarse. La polaridad y concentración del exceso de iones depende de la magnitud y la polaridad del potencial de alta tensión que se aplique a la punta del pulverizador. Por ejemplo, cuando una muestra contiene arginina en una solución de acetonitrilo y agua y se aplica un potencial positivo al pulverizador, el exceso de iones positivos será H+ y arginina MH+. La sonda puede generar iones con carga múltiple a partir de compuestos que tienen múltiples centros de carga, tales como los péptidos y los oligonucleótidos. Esto resulta útil cuando se observan especies de elevado peso molecular, donde las múltiples cargas producen iones con una relación masa/carga (m/z) dentro del rango de masa del espectrómetro de masas. Esto permite determinaciones de peso molecular normal de los compuestos en el rango de kiloDalton (kDa). Como se muestra en la Figura A-1, cada gota cargada contiene disolvente e iones positivos y negativos, pero con iones de una polaridad predominante. Como medio conductor, el exceso de cargas se encuentra en la superficie de la gota. A medida que el disolvente se evapora, el campo eléctrico de la superficie de la gota aumenta debido a que disminuye el radio de la gota. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 37 de 53 Principios de funcionamiento. Fuente de iones Figura A-1 Evaporación de iones Elemento Descripción 1 La gota contiene iones de ambas polaridades, pero una de ellas predomina. 2 A medida que el disolvente se evapora, el campo eléctrico aumenta y los iones se desplazan a la superficie. 3 Con un determinado valor de campo crítico, los iones se desprenden de las gotas. 4 Los residuos no volátiles permanecen como partículas secas. Si la gota contiene un exceso de iones y se evapora suficiente disolvente de la gota, se alcanza un campo crítico en el que los iones se desprenden de la superficie. Al final todo el disolvente se evaporará de la gota, dejando una partícula seca formada por componentes no volátiles de la solución de muestra. Debido a que se desconocen las energías de solvatación de la mayoría de las moléculas orgánicas, resulta difícil predecir las sensibilidades de un determinado ión orgánico para la evaporación de iones. La importancia de la energía de solvatación es evidente debido a que los surfactantes que se concentran en la superficie de un líquido se pueden detectar con mucha sensibilidad. Modo APCI La base para las antiguas incompatibilidades a la hora de vincular la cromatografía líquida con la espectrometría de masas surgió a partir de las dificultades para convertir moléculas relativamente poco volátiles en solución líquida en un gas molecular sin inducir una descomposición excesiva. El proceso de la sonda APCI, que consiste en una nebulización sutil de la muestra en pequeñas gotas finamente dispersadas en un tubo cerámico calentado, genera una rápida vaporización de la muestra de forma que las moléculas de esta no se descompongan. Figura A-2 se muestra el flujo de reacción del proceso de la ionización química a presión atmosférica (APCI) + para iones positivos reactivos (los hidratos de protón, H3O [H2O]n). Fuente de iones Turbo V™ 38 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Principios de funcionamiento. Fuente de iones Figura A-2 Diagrama de flujo de la reacción APCI + + + + Los iones primarios principales N2 , O2 , H2O y NO están formados por el impacto de los electrones creados + en la corona en los principales componentes neutros del aire. Aunque NO no es normalmente un componente principal del aire limpio, la concentración de esta especie en la fuente se ha mejorado debido a reacciones neutras iniciadas por la descarga de la corona. Las muestras que introducen a través de la sonda APCI se pulverizan, con ayuda de un gas nebulizante, en el tubo cerámico caliente. Dentro del tubo, las gotas finamente dispersadas de la muestra y el disolvente Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 39 de 53 Principios de funcionamiento. Fuente de iones experimentan una rápida vaporización con una descomposición térmica mínima. La sutil vaporización conserva la identidad molecular de la muestra. Las moléculas gaseosas del disolvente y la muestra se desplazan a la envoltura de la fuente de iones, donde la ionización mediante APCI se induce a través de una aguja de descarga de la corona conectada al extremo del tubo cerámico. Las moléculas de la muestra se ionizan al colisionar con los iones de reactivo creados por la ionización de las moléculas de disolvente de fase móvil. Como se muestra en la Figura A-3, las moléculas del disolvente vaporizadas se ionizan para producir los iones de reactivo [X+H]+ en el modo positivo y [X-H]– en el modo negativo. Son estos iones de reactivo los que producen los iones estables de la muestra al colisionar con las moléculas de la muestra. Figura A-3 Ionización química a presión atmosférica Elemento Descripción 1 Muestra 2 Los iones primarios se crean en las proximidades de la aguja de descarga de la corona 3 La ionización genera predominantemente iones de disolvente 4 Los iones de reactivo reaccionan con las moléculas de la muestra formando agrupamientos 5 Placa de chapa 6 Interfaz x = moléculas del disolvente; M = moléculas de la muestra Las moléculas de la muestra se ionizan mediante un proceso de transferencia de protones en el modo positivo y mediante la transferencia de electrones o la transferencia de protones en el modo negativo. La energía del proceso de ionización de APCI está dominada por la colisión debido a la presión atmosférica relativamente alta de la fuente de API. Fuente de iones Turbo V™ 40 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Principios de funcionamiento. Fuente de iones En aplicaciones de fase inversa, los iones de reactivo constan de moléculas de disolvente protonadas en el modo positivo e iones de oxígeno solvatados en el modo negativo. Con una termodinámica favorable, la adición de modificadores altera la composición de los iones de reactivo. Por ejemplo, la adición de modificadores – o tampones de acetato pueden convertir el ión acetato [CH3COO] en el reactivo primario en el modo negativo. + Los modificadores de amonio pueden convertir el amoniaco protonado [NH4] en el reactivo primario en el modo positivo. Mediante colisiones se consigue mantener una distribución equilibrada de ciertos iones (por ejemplo, iones agrupados de agua protonada). La posibilidad de una fragmentación prematura de los iones de la muestra en la fuente de iones es reducida debido a la moderada influencia de las agrupaciones del disolvente en los iones de reactivo y la presión relativamente alta del gas en la fuente. Como resultado, el proceso de ionización produce principalmente iones de producto moleculares para el análisis de masas en el espectrómetro de masas. Región de ionización de APCI En la Figura A-4 se muestra la ubicación general del reactor ión-molécula de la sonda APCI. Las líneas inclinadas indican un reactor sin paredes. Se crea una corriente de iones de descarga de la corona de encendido automático en el rango del microamperio como resultado del campo eléctrico entre la aguja de descarga y la + +, placa de chapa. Los iones primarios, por ejemplo, N2 y O2 se crean mediante la pérdida de los electrones que se originan en el plasma en las proximidades de la punta de la aguja de descarga. La energía de estos electrones se modera mediante un número de colisiones con moléculas de gas antes de alcanzar una energía donde su sección transversal de ionización efectiva les permite ionizar moléculas neutras con eficacia. Figura A-4 Región de ionización de APCI Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 41 de 53 Principios de funcionamiento. Fuente de iones Elemento Descripción 1 Punta de la aguja de descarga 2 Flujo de muestra 3 Reactor sin paredes 4 Abertura de la placa de chapa 5 Curtain Gas suministro 6 Orificio 7 Placa del orificio 8 Tubo cerámico TM Los iones primarios, a su vez, generan iones intermedios que conducen a la formación de iones de muestra. Los iones de la polaridad seleccionada son arrastrados bajo la influencia del campo eléctrico en la dirección de la placa de chapa y a través de la barrera de gas hacia el analizador de masas. La totalidad del proceso de formación de iones está dominado por la colisión debido a la relativamente alta presión atmosférica de la sonda APCI. Excepto en las proximidades de la punta de la aguja de descarga, donde la fuerza del campo eléctrico es mayor, la energía transmitida a un ión por el campo eléctrico es pequeña en comparación con la energía térmica del ión. Mediante las colisiones se consigue mantener una distribución equitativa de ciertos iones (por ejemplo, iones agrupados de agua protonada). Cualquier exceso de energía que un ión pueda adquirir en el proceso de reacción ión-molécula está termalizado. Mediante la estabilización por colisiones, muchos de los iones producto se corrigen, aunque se produzcan muchas colisiones posteriormente. La formación de iones producto e iones reactivos se rige por condiciones de equilibrio a una presión de funcionamiento (atmosférica) de 760 torr. La sonda APCI funciona como un reactor sin paredes ya que los iones que se desplazan de la fuente a la cámara de vacío y finalmente al detector nunca experimentan colisiones con una pared: solo colisiones con otras moléculas. Los iones también se forman fuera de la fuente de APCI designada, pero no se detectan y finalmente se neutralizan al interactuar con una superficie de pared. La temperatura de la sonda es un factor importante en el funcionamiento de la sonda APCI. Para conservar la identidad molecular, se debe establecer la temperatura con un valor lo bastante elevado como para que garantice una rápida evaporación. A una temperatura de funcionamiento lo bastante elevada, las gotas se vaporizan rápidamente de manera que las moléculas orgánicas se desorben de las gotas con una degradación térmica mínima. Sin embargo, si se establece la temperatura con un valor demasiado bajo, el proceso de evaporación será más lento y la pirolisis o descomposición puede producirse antes de que se complete la vaporización. Si se utiliza la sonda APCI con temperaturas superiores a la temperatura óptima, se puede provocar la descomposición térmica de la muestra. Fuente de iones Turbo V™ 42 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Tensiones y parámetros de la fuente B En función de la fuente de iones que se instale en el espectrómetro de masas, hay disponibles para optimizarla distintos parámetros dependientes de la fuente de iones concreta. ® TurboIonSpray parámetros para la sonda La siguiente tabla muestra las condiciones de funcionamiento recomendadas para la sonda TurboIonSpray TM con tres caudales diferentes. Para cada caudal, el flujo de Curtain Gas debería ser lo más elevado posible. La composición del disolvente empleado para la optimización fue 50:50 de agua:acetonitrilo. Estas condiciones representan un punto de partida desde el que optimizar la sonda Utilizando un proceso iterativo, optimice los parámetros utilizando el análisis de inyección de flujos para obtener la mejor señal o señal/ruido para en compuesto de interés. Tabla B-1 Optimización de parámetros para la sonda TurboIonSpray Parámetros LC flow caudal Valores típicos 200 µL/min 1000 µL/min 5 µl/min a 3000 µl/min Gas 1 (gasdel nebulizador) 20 psi a 40 psi 40 psi a 60 psi 40 psi a 60 psi 0 psi a 90 psi Gas 2 (gas delcalentador) 0 psi 50 psi 50 psi 0 psi a 90 psi Curtain Gas supply 20 psi 20 psi 20 psi 20 psi a 50 psi Temperature* 0 °C a 200 °C 200 °C a 650 °C 400 °C a 750 °C Hasta 750 °C Declustering Potential (DP) Positivo: 70 Positivo: 70 V ** V Negativo -70 V Negativo -70 V Positivo: 70 V Negativo -70 V Positivo: 0 V a 400 V Negativo: -400 V a 0 V Probe vertical micrometer setting 7 a 10 2a5 0a2 0 a 13 Probe vertical micrometer setting 4a6 4a6 4a6 0 a 10 TM 5 µl/min a 50 µl/min Intervalo operativo * Los valores de temperatura óptimos dependen de la composición de la fase móvil y el compuesto (el contenido más acuoso requiere una temperatura mayor). Cero (0) significa que no se aplica temperatura. ** Los valores de DP dependen del compuesto. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 43 de 53 Tensiones y parámetros de la fuente Parámetros para la sonda APCI Tabla B-2 Optimización de parámetros para la sonda APCI Parámetro Valor típico Intervalo operativo LC flow caudal 1000 µL/min 200 µl/min a 2000 µl/min Gas 1 (gas del nebulizador) 30 0 a 90 Curtain Gas supply 20 20 a 50 Temperature* 400 ºC 100 ºC a 750 ºC Nebulizer Current (NC) Positivo: 3 Positivo: 0 a 5 Negativo: -3 Negativo: -5 a 0 Positivo: 60 V Positivo: 0 V a 300 V Negativo: -60 V Negativo: -300 V a 0 V 4 mm Escala de 0 mm a 13 mm TM Declustering Potential (DP) Probe vertical micrometer setting * El valor de la temperatura depende del compuesto. Descripciones de parámetros Tabla B-3 Parámetros dependientes de la fuente de iones Parámetro Descripción ® Ion Source Gas 1 (GS1) Controla el gas nebulizador para las sondas TurboIonSpray y APCI. Consulte Principios de funcionamiento. Fuente de iones en la página 37. Ion Source Gas 2 (GS2) Controla el gas del calentador para la sonda TurboIonSpray. La mejor sensibilidad se obtiene cuando la combinación de la temperatura (TEM) y el caudal del gas del calentador (GS2) provoca que el disolvente de LC alcance un punto en el que esté casi todo vaporizado. Para optimizar GS2, aumente el flujo para obtener la mejor señal o relación señal/ruido si se produce un incremento significativo en el ruido de fondo. Un flujo de gas demasiado elevado puede producir una señal ruidosa o inestable. Consulte Principios de funcionamiento. Fuente de iones en la página 37. Fuente de iones Turbo V™ 44 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Tensiones y parámetros de la fuente Tabla B-3 Parámetros dependientes de la fuente de iones (continuación) Parámetro Curtain Gas (CUR) Descripción TM Controla el flujo de gas hacia la interfaz Curtain Gas . La interfaz Curtain Gas se ubica entre la placa de chapa y el orificio. Evita que el aire ambiente y las gotas de disolvente entren y contaminen la óptica iónica, al tiempo que permite dirigir los iones de muestra a la cámara de vacío mediante los campos eléctricos generados entre la interfaz de vacío y la aguja de pulverización. La contaminación de la óptica de entrada de iones reduce, por tanto, la transmisión Q0, la estabilidad y la sensibilidad, y aumenta el ruido de fondo. Mantenga el flujo de Curtain Gas tan alto como sea posible sin perder sensibilidad. Temperature (TEM) Controla el calor aplicado a la muestra para vaporizarla. La temperatura óptima es la temperatura más baja a la que la muestra se vaporiza completamente. Optimice en incrementos de 50 °C. Temperature (TEM) - Controla la temperatura del gas del calentador en la sonda TurboIonSpray. TurboIonSpray probe La mejor sensibilidad se obtiene cuando la combinación de la temperatura (TEM) y el caudal del gas del calentador (GS2) provoca que el disolvente de LC alcance un punto en el que esté casi todo vaporizado. A medida que el contenido orgánico del disolvente aumenta, debe disminuir la temperatura de sonda óptima. Con disolventes formados al 100 % por metano o acetonitrilo, el rendimiento de la sonda se puede optimizar a un nivel tan bajo como 300 °C. Los disolventes acuosos formados al 100 % por agua con caudales de aproximadamente 1000 µl/min requieren una temperatura de sonda máxima de 750 °C. Si la temperatura se fija demasiado baja, la vaporización será incompleta y se expulsarán gotas grandes y visibles a la envoltura de la fuente de iones. Si se fija una temperatura demasiado elevada, el disolvente se puede vaporizar prematuramente en la punta de la sonda TurboIonSpray, especialmente si la sonda se ha fijado demasiado baja (de 5 mm a 13 mm). Temperature (TEM) - Controla la temperatura de la sonda APCI APCI probe A medida que el contenido orgánico del disolvente aumenta, debe disminuir la temperatura de sonda óptima. Con disolventes formados al 100 % por metano o acetonitrilo, el rendimiento de la sonda se puede optimizar a temperaturas tan bajas como 400 °C en caudales de 1000 µl/min. Los disolventes acuosos formados al 100 % por agua ajustados a flujos de aproximadamente 2000µl/min requieren una temperatura de sonda mínima de 700 °C. Si la temperatura se fija demasiado baja, la vaporización será incompleta y se expulsarán gotas grandes y visibles a la envoltura de la fuente de iones. Si se fija una temperatura demasiado elevada, se produce la degradación térmica de la muestra. Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 45 de 53 Tensiones y parámetros de la fuente Tabla B-3 Parámetros dependientes de la fuente de iones (continuación) Parámetro Descripción Nebulizer Current (NC) Controla la corriente que se aplica a la aguja de descarga de la corona en la sonda APCI. La descarga ioniza moléculas del disolvente que, a su vez, ionizan las moléculas de la muestra. En el caso de la sonda APCI, la corriente aplicada a la aguja de descarga de corona (NC) se suele optimizar en un intervalo amplio (entre 1 mA y 5 mA en modo positivo). Para optimizarla, comience por el valor 1 y aumente hasta alcanzar la mejor señal o relación señal/ruido. Si, al aumentar la corriente, no se observan cambios en la señal, deje la corriente en la configuración más baja que proporcione la mejor sensibilidad (por ejemplo, 2mA). IonSpray Voltage Floating (ISVF) controla la tensión aplicada al pulverizador en la TurboIonSpray sonda, que ioniza la muestra en la fuente de iones. Depende de la polaridad y afecta a la estabilidad de la pulverización y a la sensibilidad. o bien, IonSpray Voltage (IS) Calentador de interfaz (ihe) Este parámetro siempre está activado para los sistemas 3500, 4500, 5500, 6500 y ® TripleTOF . El parámetro ihe enciende y apaga el calentador de la interfaz. Calentar la interfaz ayuda a maximizar la señal de iones y evita la contaminación de la óptica iónica. A menos que el compuesto que esté analizando sea extremadamente frágil, se recomienda al usuario que caliente la interfaz. Posición de la sonda La posición de la sonda puede afectar a la sensibilidad del análisis. Consulte Optimización de la fuente de iones en la página 15 para obtener más información sobre cómo optimizar la posición de la sonda. Composición de los disolventes La concentración estándar del formato de amonio o el acetato de amonio es de 2 mmol/l a 10 mmol/l para iones positivos y de 2 mmol/l a 50 mmol/l para iones negativos. La concentración de ácidos orgánicos es de ® 0,1 % a 0,5 % por volumen para la sonda TurboIonSpray y de 0,1 % a 2,0 % por volumen para la sonda APCI. Los disolventes empleados habitualmente son: • Acetonitrilo • Metanol • Propanol • Agua Los modificadores empleados habitualmente son: Fuente de iones Turbo V™ 46 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Tensiones y parámetros de la fuente • Ácido acético • Ácido fórmico • Formato de amonio • Acetato de amonio Los siguientes modificadores no se utilizan habitualmente porque complican el espectro con sus mezclas de iones y combinaciones de agrupamientos. También pueden suprimir la fuerza de la señal de iones del compuesto objetivo: • Trietilamina (TEA) • Fosfato sódico • Ácido trifluoroacético (TFA) • Dodecilsulfato de sodio Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 47 de 53 C Consumibles y repuestos TM En las siguientes tablas se enumeran las piezas que se pueden solicitar para la fuente de iones Turbo V . Tabla C-1 Consumibles Referencia Descripción Cantidad cm Detalles 016316 TUBO* diámetro exterior de 0,0625 y calibre de 0,005 016325 CONECTOR*PEEK 10-32 y 0,0625 PULG. 016485 TUBO* PEEK con diámetro exterior de 0,0625 y diámetro interior de 0,0025 pulgadas cm Tubo PEEK marrón claro (calibre de 0,0025 pulgadas) 019675 CONECTOR*INSERCIÓN EN FORMA DE T, CALIBRE DE 0,25 1 Inserción en forma de T (calibre de 0,25 mm) 027950 ELECTRODO*N 1 Electrodo APCI 027953 ELECTRODO*T 1 electrodo TurboIonSpray 1 Tubo PEEK rojo (calibre de 0,005 pulgadas) Conector PEEK marrón ® Tabla C-2 Repuestos Referencia Descripción Cantidad Detalles 027947 FRU*KIT AGUJA NEB 1 Aguja de descarga de la corona 027950 FRU*KIT ELECTRODO NEB 1 Juego de electrodos APCI 1003263 FUSIBLE*4 A 250 V 5 X 20 GRAN RETARDO 1 Fusible F3 T4 A 250 V, 5 ×20 mm retardo de tiempo (No se utiliza para ® sistemas TripleTOF ). 027460 OPT*CONJ. NEB 1 Conjunto de la sonda APCI. Consulte la Figura C-3. 027461 OPT*CONJ. TURBO 1 conjunto de sonda TurboIonSpray. Consulte la Figura C-2. Fuente de iones Turbo V™ 48 de 53 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Consumibles y repuestos Figura C-1 Tubo PEEK rojo Figura C-2 Conjunto de sonda TurboIonSpray (referencia 027461) Figura C-3 Conjunto de sonda APCI (referencia 027460) Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 49 de 53 Historial de revisiones Número de documento RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 50 de 53 Descripción del cambio Primera publicación del documento. Fecha Julio de 2014 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Índice instalar la sonda 13 mantenimiento preventivo 25 materiales necesarios, mantenimiento 26 métodos en ejecución 17, 21 optimización 15 sistema de escape de la fuente, descrita 11 su identificación en el software 12 A ajustamiento, punta del electrodo 30 asistencia técnica requisitos C Caudal de Curtain Gas caudal y ruido de fondo 20 circuito detector, fuente de iones 10 componentes fuente de iones 6 sonda APCI 9 sonda TurboIonSpray 8 conexión, tubo de muestra 14 conexiones gas y electricidad, fuente de iones 10 contenido orgánico y temperatura de sonda 17 corriente nebulizante, optimización 24 D descarga de corona, causas de la 20 disolventes composición de 46 E evaporación de iones, descrita 38 extraer fuente de iones 27 F fuente de iones circuito detector de fuente de iones, descrito 10 componentes de 6 conexión del ajuste de muestras 14 conexiones 10 configuración del sistema 17, 21 consejos de optimización 20 extraer 27 instalación, materiales necesarios 12 instalar 14 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A G gas del nebulizador optimización 19 I instalación sondas 13 instalar fuente de iones 14 inyección de corriente de muestra 15 ionización química a presión atmosférica, descrita 40 L limpiar tubo del electrodo 28 limpieza sondas 26 M mantenimiento fuente de iones, preventivo 25 materiales necesarios instalación de la fuente de iones 12 métodos en ejecución 17, 21 O optimización consejos para optimizar la fuente de iones 20 corriente nebulizante 24 fuente de iones 15 Fuente de iones Turbo V™ 51 de 53 Índice gas del nebulizador 19 parámetro GS1 19 parámetro GS2 19 parámetros de gas y caudal de Curtain Gas 22 posición de la sonda APCI 23 sonda TurboIonSpray 16 temperatura del calentador turbo 20 tensiones 20 optimizar posición de la sonda TurboIonSpray 18 temperatura de sonda APCI 24 P Parámetro Curtain Gas definido 45 Parámetro GS1 optimización 19 parámetro GS2 definición 44 Parámetro GS2 optimización 19 Parámetro ihe, definido 46 Parámetro IS, definido 46 Parámetro ISVF, definición 46 Parámetro NC, definido 46 parámetro TEM, definición 45 parámetros configuración de las condiciones iniciales 18, 22 parámetros, optimización 19 sonda APCI 44 parámetros de gas optimización 19, 22 piezas componentes punta del electrodo ajustamiento 30 partes de 31 R reemplazo tubo de muestra 33 retirar sondas de la fuente de iones 27 S sistema de escape de la fuente, descrita 11 software identificación de la fuente de iones 12 Fuente de iones Turbo V™ 52 de 53 Sonda ACPI piezas de la 28 sonda APCI descripción general 8 parámetros 44 región de ionización 42 Sonda APCI colocación 23 componentes 9 configuración del sistema 17, 21 corriente nebulizante, optimización 24 optimización de la temperatura de sonda 24 parámetros de gas y caudal de Curtain Gas, optimización 22 posición de la sonda, optimización 23 principios de funcionamiento 38 sonda TurboIonSpray descripción general 8 parámetros 43 Sonda TurboIonSpray componentes 8 optimización 16 optimizar la posición de la sonda 18 principios de funcionamiento 37 temperatura del calentador turbo, optimización 20 tensiones, optimización 19 sondas caudal y temperatura 17 extraer 27 instalación 13 limpieza 26 optimización de la sonda TurboIonSpray 16 optimización de tensiones 19 parámetros 43 piezas de la sonda APCI 28 selección 7 sonda APCI, descripción general 8 sonda TurboIonSpray, descripción general 8 temperatura de sonda APCI, optimización 24 temperatura del calentador turbo, optimización 20 uso de 5 T temperatura temperatura de sonda APCI, optimización 24 temperatura del calentador turbo, optimización 20 tensiones, optimización 20 TIS Sonda TurboIonSpray Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Índice tubo de muestra bloqueos 33 reemplazo 33 tubo de muestra, conexión 14 tubo de muestra, limpieza 27 tubo del electrodo frecuencia de limpieza 28 limpieza 28 Guía del operador RUO-IDV-05-0940-ES-A Fuente de iones Turbo V™ 53 de 53
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