B4212 G40 E0501

(837)

Dade ® Innovin ®

Intended Use

For use in prothrombin time (PT) determinations and prothrombin time-based assays in citrated human plasma.

Summary and Explanation

Dade ® Innovin ® Reagent is prepared from purified recombinant human tissue factor produced in E. coli, combined with synthetic phospholipids (thromboplastin) 1 , calcium, buffers and stabilizers. The reagent initiates clotting via the extrinsic and common pathways in a global screening test, the prothrombin time

(PT). Dade ® Innovin ® Reagent has three major applications based upon the PT 2 :

1. as a rapid screening test to detect single or combined deficiencies of the extrinsic coagulation system indicative of hereditary and acquired coagulation disorders, liver disease or vitamin K deficiency;

2. as a sensitive monitoring test for oral anticoagulant therapy; and

3. as an assay for specific coagulation factors.

Additionally, various photo-optical coagulation analyzers are able to derive the fibrinogen value from the determination of the prothrombin time.

Dade ® Innovin ® Reagent is manufactured using recombinant human tissue factor and synthetic phospholipids which do not contain any other clotting factors such as prothrombin, F VII and F X. Therefore, it is highly sensitive to factor deficiencies and oral anticoagulant-treated patient plasma samples. The sensitivity of Dade ® Innovin ® Reagent is very similar to the WHO human brain reference thromboplastin

® Innovin ® Reagent is insensitive to therapeutic levels of heparin. The high sensitivity of Dade

3 .

Dade

Innovin in monitoring oral anticoagulant therapy 3

®

® Reagent to coagulation factors and its insensitivity to therapeutic heparin make it beneficial mildly pathological range.

. In addition, its high sensitivity (i.e. the responsiveness of the reagent to moderately depleted factor activity) allows differentiation of abnormal plasmas, even in the

Principle of the Method

The coagulation cascade is activated by incubating plasma with the optimal amount of thromboplastin and calcium; the clotting time is then measured.

Reagents

Materials provided

10 x l 4 mL, [REF] B4212-40

10 x l 10 mL, [REF] B4212-50

12 x l 20 mL, [REF] B4212-100

Composition

Dade ® Innovin ® Reagent: Lyophilized reagent consisting of recombinant human tissue factor and synthetic phospholipids (thromboplastin), calcium ions, a heparin-neutralizing compound, buffers and stabilizers (bovine serum albumin).

Warnings and Precautions

For in-vitro diagnostic use.

Reagent Preparation

Reconstitute a vial of lyophilized Dade volume stated on the vial label. Store at +2 to +8 °C.

To ensure complete reconstitution, thoroughly mix the contents of the vial immediately after adding the water. If left to stand, Dade ®

®

Innovin

Innovin

®

® Reagent with distilled or deionized water using the

Reagent should be re-mixed before use in order to ensure a homogeneous solution. Continuous mixing is not necessary.

Note: Do not use water that contains preservatives.

Storage and Stability

Store at +2 to +8 °C. At this temperature, the unopened reagent can be used until its expiry date (see vial label).

Stability after reconstitution: +2 to +8 °C

+15 to +25 °C

10 days (closed vial)

5 days (closed vial)

+37 °C 24 hours (closed vial)

Information about on-board stability is specified in the Reference Guides (Application Sheets) for the different coagulation analyzers.

Do not freeze!

Signs of expiry: Absence of vacuum when opening the vial; reagent is difficult to reconstitute; results are not reproducible.

Materials required but not provided

Control Plasma N or Dade

Control Plasma P, Dade ®

® Ci-Trol

Ci-Trol

® Level 1

® Level 2 or Dade ® Ci-Trol ® Level 3

PT-Multi Calibrator* (Refer to the Instructions for Use for details on use.)

Standard Human Plasma or fresh normal plasma 4 for determining the mean normal PT (MNPT)**

Sodium citrate solution (0.11 mol/L or 0.13 mol/L / 3.2 % or 3.8 %) for blood collection

Distilled or deionized water without preservatives

Plastic tubes

Plastic transfer pipettes

Pipettes for precise measurement of 20.0 mL, 10.0 mL, 1.0 mL, 0.50 mL, 0.20 mL and 0.10 mL

Coagulation analyzer

Equipment

Dade ® Innovin ® Reagent can be used manually or on automated coagulation analyzers. Siemens Healthcare Diagnostics provides Reference Guides (Application Sheets) for several coagulation analyzers.

The Reference Guides (Application Sheets) contain analyzer/assay specific handling and performance information which may differ from that provided in these Instructions for Use. In this case, the information contained in the Reference Guides (Application Sheets) supersedes the information in these Instructions for Use. Please also consult the instruction manual of the instrument manufacturer!

Specimen Collection and Preparation

Mix nine parts of freshly collected patient blood with one part of 0.11 or 0.13 mol/L (3.2 % or 3.8 %) sodium citrate solution. An evacuated tube system or syringe may be used.

Centrifuge the blood specimen at 1500 x g for no less than 15 minutes at room temperature.

Store in an unopened tube at room temperature. Do not store on ice or at +2 to +8 °C as cold activation of F VII may alter results. Plasma should be tested within 24 hours of blood collection. Samples should not stand at +37 °C for more than 5 minutes. If the patient is on both heparin and coumarin-based anticoagulant therapy, the results may vary with time of storage.

Please refer to CLSI document H21-A5 5 for detailed information on sample preparation and storage.

Procedure

Manual Testing:

Prewarm Dade ® Innovin ® Reagent to +37 °C.

Pipet into coagulation tubes as follows:

Plasma

Control

Incubate tubes and samples for 1 - 2 minutes

(max. 5 minutes) at +37 °C

Add prewarmed Dade ® Innovin ® Reagent

Test Sample

0.1 mL

-

0.2 mL

Control

-

0.1 mL

0.2 mL

Start stopwatch simultaneously with addition of Dade ® Innovin ® Reagent. Observe time of clot formation.

Internal Quality Control

Normal range:

Pathological range:

Dade

Dade

® Ci-Trol

® Ci-Trol

® Level 1 or Control Plasma N

® Level 2, Dade ® Ci-Trol ® Level 3 or Control Plasma P

Two levels of quality control material (normal and pathological range) must be measured at start of the test run, with each calibration, upon reagent vial changes and at least every eight hours on each day of testing.

The control material should be prepared and processed in the same manner as the samples.

A range of allowable variation should be established for controls in each laboratory. New control ranges should be established for each lot of reagent or control material. This range is usually based on ± 2.5 standard deviations (SD) from the control mean.

If the control values are outside of the confidence interval, check the coagulation analyzer, controls and reagents. Do not release patient results until the cause of deviation has been identified and corrected.

Results

Currently, various methods are used for reporting PT results. ISI (International Sensitivity Index) values for Dade ® Innovin ® Reagent are provided for the particular reagent/instrument combination; these enable the results to be reported in INR (International Normalized Ratio) 4 . Computation and use of the INR are described below. The INR system is the preferred method for reporting results for oral anticoagulated patient specimens. Alternatively, the patient’s PT (in seconds) together with the reference range (in seconds) can be used to report results.

Example: patient result of 18 seconds; reference range 9.7 - 12.3 seconds.

Determination of INR (International Normalized Ratio)

Values using Dade ® Innovin ® Reagent

International PT (Prothrombin Time) Standardization for Oral Anticoagulant Therapy Monitoring

1. According to the joint recommendations of the World Health Organization (WHO) tional Committee on Thrombosis and Haemostasis, the PT results for patients on oral anticoagulants lant therapy.

The INR is determined 4 according to the following equation:

4 and the Internashould be reported as INR values. Reported INR results are independent of the reagents and methods used, and are specifically intended for assessing patients stabilized on long-term oral anticoagu-

INR = R ISI , where R = ——————————

ISI is the International Sensitivity Index of the reagent/instrument combination.

The ISI values for Siemens thromboplastin reagents are determined in accordance with WHO recommendations.

2. Methods of INR calculation: a. Calculators with exponential functions:

These instructions refer specifically to the Texas Instruments TI-55 II calculator. Other calculators, e.g. Hewlett-Packard models, may require different key stroke sequences. Consult the calculator reference manual and check example problems against the Conversion Table to assure mastery of conversion procedures.

Enter Patient PT in seconds, press ”÷”, enter MNPT**, press ”=”. The display will now show R, the

Patient Ratio. Now press the ”y

Press

Example: 24

÷

11.0 x ” key, then enter the specific ISI value of the thromboplastin/instrument combination used and press ”=”. The result displayed is the patient’s INR value.

= y x

1.1

=

Notes patient PT divided by

MNPT** patient ratio (display shows 2.1818) exponential function key

example ISI value result: INR (display shows 2.3588)

Report as INR = 2.4

b. Conversion Table:

First, calculate the patient PT/MNPT** ratio, R. The INR value can then be read from the enclosed

INR Conversion Table by looking in the column under the appropriate ISI value, in the row that corresponds to the patient’s PT ratio (R).

c. Automatic:

INR values can be computed automatically by various coagulometers. For details, consult the relevant instruction manual. Specific coagulation analyzer protocols are available from Siemens on request.

Derived Fibrinogen

Using Dade ® Innovin ers or Sysmex ®

® Reagent and the appropriate assay on Siemens photometric coagulation analyz-

coagulation analyzers, the fibrinogen concentration may be derived by analyzing the change in optical signal during prothrombin time determinations, using a derived fibrinogen calibration curve. This calibration curve (master curve) is provided by Siemens in the lot-dependent Table of Assigned Values.

Limitations of the Procedure

There are no other clotting factors in recombinant human tissue factor. Factor assay curves using Dade

Innovin

®

® Reagent may therefore give longer clotting times at the lowest levels of the deficient factor than with other reagents. This may result in clotting times greater than 100 seconds for low factor levels in factor assay curves.

Siemens has validated use of these reagents on various analyzers to optimize product performance and meet product specifications. User defined modifications are not supported by Siemens as they may affect performance of the system and assay results. It is the responsibility of the user to validate modifications to these instructions or use of the reagents on analyzers other than those included in Siemens Application

Sheets or these instructions for use.

Results of this test should always be interpreted in conjunction with the patient’s medical history, clinical presentation and other findings.

Interfering Substances

Many commonly administered drugs may affect the results obtained in prothrombin time testing 4 . This should be kept in mind especially when unusual or unexpected abnormal results are obtained. Unexpected abnormal results should be followed by additional coagulation studies to determine the source of the abnormality.

Turbidity of lipemic samples, e.g. with parenteral feeding, may preclude accuracy in the derived fibrinogen determination.

Dade ® Innovin ® Reagent is insensitive to concentrations of unfractionated heparin up to approximately

2.0 units per mL. The heparin sensitivity study was conducted using spiked normal pooled plasma and the sensitivity to heparin was defined by the concentration of heparin in the specimen that prolonged the

PT results exceeding the upper limit of the reference range.

Inhibitors such as lupus anticoagulant may interfere with the prothrombin time and result for example in

INRs that do not reflect the exact degree of anticoagulation therapeutic dose result in prolonged prothrombin times 7,8 .

6 . Hirudin or other direct thrombin inhibitors in

Expected Values

Values for healthy individuals vary from laboratory to laboratory depending on the technique used.

Therefore, each laboratory should establish its own reference intervals based on the procedure and coagulation analyzers used.

In a study with ostensibly healthy subjects (n = 138), the following reference interval (5 th to 95 th percentile) was determined:

Sysmex ® CA-7000 system: Central 90 % reference interval: 10.4 to 12.4 seconds

Derived fibrinogen 9 : 1.8 - 3.5 g/L

Therapeutic Ranges

Therapeutic ranges for INR may vary depending on the indication of oral anticoagulant therapy 10 .

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Specific Performance Characteristics

Precision

Precision of prothrombin time results is generally limited by the method used. Therefore, within a single lot, the reagent should yield results which are reproducible within the quality control of the laboratory.

The precision of Dade ® Innovin ® Reagent on the Sysmex ® CA-6000 system was estimated with quality control material from a total of six (6) separate runs over three (3) testing days (two runs per day) and four (4) replicates per control level, per run with the following results:

Assay

Prothrombin Time

Derived Fibrinogen

Control Level

1

2

1

2 n

24

24

24

24

Mean

12.4 s

33.0 s

2.37 g/L

3.37 g/L

Coefficient of Variation

Within Run Run to Run

1.3 %

0.7 %

4.0 %

4.1 %

2.0 %

3.4 %

2.8 %

3.0 %

Total

2.4 %

3.5 %

4.9 %

5.1 %

Bibliography

1. Spicer EK, Horton R, Bloem L, et al. Isolation of cDNA clones coding for human tissue factor:

Primary structure of the protein and cDNA. Proc Natl Acad Sci USA. 1987; 84:5148-52.

2. Quick AJ. Hemorrhagic diseases and thrombosis. Philadelphia: Lea and Febiger; 1966.

3. Bader R, Mannucci PM, Tripodi A, et al. Multicentric evaluation of a new PT reagent based on recombinant human tissue factor and synthetic phospholipids. Thromb Haemost. 1994;71:292-9.

4. Poller L. The Prothrombin Time. WHO/LAB/98.3. 1998.

5. CLSI. Collection, Transport, and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation Assays and Molecular Hemostasis Assays. Approved Guideline - Fifth Edition. CLSI document H21-A5 [ISBN 1-56238-657-3]. CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2008.

6. Tripodi A, Chantarangkul V, Clerici M, et al. Laboratory control of oral anticoagulant treatment by the INR system in patients with the antiphospholipid syndrome and lupus anticoagulant. Results of a collaborative study involving nine commercial thromoplastins. Br J Haematol. 2001;115:672-8.

7. Tobu M, Iqbal O, Messmore HL, et al. Influence of different anticoagulant agents on fibrinopeptide

A generation. Clin Appl Thromb Hemost. 2003;9:273-92.

8. Fenyvesi T, Joerg I, Harenberg J. Influence of Lepirudin, Argatroban, and Melagatran on prothrombin time and additional effect of oral anticoagulation. Clin Chem. 2002;48:1791-4.

9. Wagner C, Dati F. Fibrinogen. In: Thomas L, ed. Clinical Laboratory Diagnostics. Frankfurt: TH-

Books Verlagsgesellschaft, 1998: 609-12.

10. Hirsh J, Dalen JE, Anderson DR, et al. Oral anticoagulants: Mechanism of action, clinical effectiveness, and optimal therapeutic range. Chest. 2001;119:8S-21S.

* Not available in the USA

** The mean normal PT is defined as the mean value of the normal range. It must be determined specifically for each thromboplastin lot using the method used to analyze the patient samples and, where appropriate, using the coagulometer used for the analysis.

Ci-Trol, Dade and Innovin are trademarks of Siemens Healthcare Diagnostics.

Sysmex is a registered trademark of SYSMEX CORPORATION.

Purchase of Dade ® Innovin ® provides the purchaser with a limited license to use the purchased Dade ®

Innovin ® covered by U.S. Patent Nos. 5,625,036; 7,084,251 and 7,049,131 in accordance with the Instructions for Use set forth herein.

USA Distributor: Siemens Healthcare Diagnostics Inc.

Newark, DE 19714 U.S.A.

Edition May 2008

Dade ® Innovin ®

Anwendungsgebiet

Für die Bestimmung der Thromboplastinzeit (TPZ) und für darauf basierende Tests in humanem Citratplasma.

Diagnostische Bedeutung

Dade ® Innovin ® Reagenz ist ein in E. coli produzierter, gereinigter rekombinanter humaner Gewebefaktor, kombiniert mit synthetischen Phospholipiden (Thromboplastin) 1 , Calcium, Puffer und Stabilisatoren. Das

Reagenz induziert die Gerinnselbildung über den exogenen Aktivierungsweg und die gemeinsame

Endstrecke in einem globalen Screening-Test, der Bestimmung der Thromboplastinzeit (TPZ). Dade ®

Innovin ® Reagenz wird für drei auf der TPZ 2 basierende Hauptanwendungen genutzt:

1. als rascher Screening-Test zum Nachweis einzelner oder kombinierter Mängel extrinsischer

Gerinnungsmechanismen, durch den angeborene oder erworbene Gerinnungsstörungen,

Lebererkrankungen oder Vitamin K-Mangel erkannt werden können;

2. als empfindlicher Test zum Monitoring von oralen Antikoagulanzientherapien und

3. zur Bestimmung der exogenen Gerinnungsfaktoren.

Verschiedene photo-optische Gerinnungsmessgeräte sind zusätzlich in der Lage, den Fibrinogenwert während der Bestimmung der Thromboplastinzeit abzuleiten.

Dade ® Innovin ® Reagenz wird aus rekombinantem humanem Gewebefaktor und synthetischen

Phospholipiden hergestellt, die keinerlei andere Gerinnungsfaktoren, wie z. B. Prothrombin, F VII oder F X enthalten. Daher ist es hochsensibel gegenüber Plasmen mit Mangel an Gerinnungsfaktoren und solchen von Patienten unter oraler Antikoagulanzientherapie. Die Empfindlichkeit von Dade kommt dem WHO-Referenzthromboplastin aus Humanhirn sehr nahe 3

Innovin ® Reagenz gegenüber therapeutischen Heparinkonzentrationen unempfindlich ist. Aufgrund der im therapeutischen Bereich ist Dade ® Innovin

® Innovin ® Reagenz

. Hinzu kommt, dass Dade ® hohen Empfindlichkeit gegenüber Gerinnungsfaktoren und der Unempfindlichkeit gegenüber Heparin

Antikoagulanzientherapien geeignet geringgradig pathologisch sind.

3

® Reagenz besonders gut für die Überwachung oraler

. Durch die hohe Empfindlichkeit (d. h. die Reaktion des Reagenzes auf mäßig verringerte Gerinnungsfaktorenaktivität) können sogar Plasmaproben erkannt werden, die nur

Prinzip der Methode

Durch Inkubation von Plasma mit der optimalen Menge an Thromboplastin und Calcium wird der

Gerinnungsvorgang ausgelöst, die Zeit bis zur Bildung des Fibringerinnsels wird gemessen.

Reagenzien

Inhalt der Handelspackungen

10 x l 4 ml, [REF] B4212-40

10 x l 10 ml, [REF] B4212-50

12 x l 20 ml, [REF] B4212-100

Zusammensetzung

Dade ® Innovin ® Reagenz: Lyophilisat aus rekombinantem humanem Gewebefaktor und synthetischen

Phospholipiden (Thromboplastin), Calciumionen, einer Heparin-neutralisierenden Verbindung, Puffer und Stabilisatoren (Rinderserumalbumin).

Warnungen und Vorsichtsmaßnahmen

Nur zur in-vitro diagnostischen Anwendung.

Vorbereitung der Reagenzien

Ein Fläschchen Dade ® Innovin ® Reagenz Lyophilisat mit destilliertem oder entionisiertem Wasser entsprechend der Mengenangabe auf dem Fläschchenetikett auflösen. Bei +2 bis +8 °C lagern.

Zur vollständigen Auflösung den Fläschcheninhalt sofort nach der Zugabe des Wassers gut mischen. Wird das Fläschchen stehengelassen, sollte Dade ® Innovin ® Reagenz vor der Anwendung erneut gemischt werden, um eine homogene Lösung zu erhalten. Kontinuierliches Mischen ist nicht erforderlich.

Hinweis: Kein Wasser mit Konservierungsstoffen verwenden.

Haltbarkeit und Lagerungsbedingungen

Bei +2 bis +8 °C lagern. Bei dieser Temperatur bleibt das Reagenz ungeöffnet bis zum Verfallsdatum haltbar (siehe Fläschchenetikett).

Stabilität nach Rekonstitution: +2 bis +8 °C

+15 bis +25 °C

+37 °C

10 Tage (geschlossene Flasche)

5 Tage (geschlossene Flasche)

24 Stunden (geschlossene Flasche)

B4212 G40 E0501 (837) 2

Die Angaben zur Stabilität auf dem Gerät sind in den Referenzhandbüchern (Applikationsvorschriften) für die einzelnen Gerinnungsmessgeräte aufgeführt.

Nicht einfrieren!

Hinweis auf Verfall: fehlendes Vakuum beim Öffnen des Fläschchens; Reagenz läßt sich nur schwer lösen; es lassen sich keine reproduzierbaren Werte erreichen.

Zusätzlich benötigte Materialien

Kontroll-Plasma N oder Dade

Kontroll-Plasma P, Dade ®

® Ci-Trol ®

Ci-Trol ®

Level 1

Level 2 oder Dade ® Ci-Trol ® Level 3

PT-Multi Calibrator* (Einzelheiten zum Gebrauch entnehmen Sie bitte der Gebrauchsanweisung.)

Standard Human-Plasma oder frisches Normalplasma 4 zur Bestimmung der MNPT**

Natriumcitrat-Lösung (0,11 mol/l oder 0,13 mol/l bzw. 3,2 %ig oder 3,8 %ig) für die Blutentnahme

Destilliertes oder entionisiertes Wasser ohne Konservierungsstoffe

Kunststoffröhrchen

Kunststoffpipetten für den Probentransfer

Pipetten für das genaue Abmessen von 20,0 ml, 10,0 ml, 1,0 ml, 0,50 ml, 0,20 ml und 0,10 ml

Gerinnungsmessgerät

Geräte

Dade ® Innovin ® Reagenz kann manuell oder an automatischen Gerinnungsmessgeräten verwendet werden.

Siemens Healthcare Diagnostics stellt für verschiedene Gerinnungsmessgeräte Referenzhandbücher

(Applikationsvorschriften) zur Verfügung. Diese enthalten geräte-/ testspezifische Informationen zur

Abarbeitung und zu Leistungsdaten, die von den Informationen in dieser Gebrauchsanweisung abweichen können. In diesem Fall ersetzen die Informationen in den Referenzhandbüchern (Applikationsvorschriften) die Informationen in dieser Gebrauchsanweisung. Bitte auch die Bedienungsanleitung des Geräteherstellers beachten!

Probenabnahme und -vorbereitung

Neun Teile frisch abgenommenes Patientenblut mit einem Teil Natriumcitrat-Lösung (0,11 mol/l oder

0,13 mol/l bzw. 3,2 %ig oder 3,8 %ig) mischen. Es können Blutentnahmesysteme mit evakuierten

Gefäßen oder die Abnahme in der Spritzentechnik angewandt werden.

Die Blutprobe soll bei 1500 x g für nicht weniger als 15 Minuten bei Raumtemperatur zentrifugiert werden.

Im ungeöffneten Abnahmeröhrchen bei Raumtemperatur lagern. Nicht auf Eis oder bei +2 bis +8 °C lagern, da eine Kälteaktivierung von F VII die Ergebnisse verändern könnte. Das Patientenplasma sollte innerhalb von 24 Stunden nach der Blutabnahme analysiert werden. Bei +37 °C dürfen die

Proben nicht länger als 5 Minuten stehen bleiben. Bei Patienten mit Heparin und Coumarin basierter

Antikoagulanzientherapie können die Ergebnisse in Abhängigkeit von der Standzeit variieren.

Genaue Angaben zur Probenentnahme und -lagerung entnehmen Sie bitte dem CLSI-Document H21-A5 5 .

Testdurchführung

Manuelle Durchführung:

Dade ® Innovin ® Reagenz auf +37 °C vorwärmen.

In die Kunststoffröhrchen wie folgt pipettieren:

Plasma

Kontrolle

Proben in den Röhrchen 1 bis 2 Minuten (max. 5 Minuten) bei +37 °C inkubieren

Vorgewärmtes Dade ® Innovin ® Reagenz rasch zugeben

Testprobe

0,1 ml

-

Kontrolle

-

0,1 ml

0,2 ml 0,2 ml

Bei Zugabe von Dade ® zu messen.

Innovin ® Reagenz ist die Stoppuhr starten, um die Zeit bis zur Gerinnselbildung

Interne Qualitätskontrolle

Normalbereich:

Pathologischer Bereich:

Dade ®

Dade ®

Ci-Trol

Ci-Trol

®

®

Level 1 oder Kontroll-Plasma N

Level 2, Dade ® Ci-Trol ® Level 3 oder Kontroll-Plasma P

Bei jedem Wechsel der Reagenzflaschen, zu Beginn eines Testlaufes, nach jeder Kalibration und mindestens alle 8 Stunden an jedem Testtag müssen zwei Kontrollen (eine im Normalbereich und eine im pathologischen Bereich) gemessen werden. Das Kontrollmaterial sollte wie zu untersuchende Proben behandelt werden.

Jedes Labor sollte seinen eigenen Vertrauensbereich für die Kontrollen ermitteln. Bei jeder neuen Reagenzien- oder Kontrollencharge sollten neue Kontrollbereiche definiert werden. Diese betragen in der Regel

± 2,5 Standardabweichungen (SD) vom mittleren Kontrollwert.

Liegen die Kontrollwerte außerhalb des Vertrauensbereichs, sollten das Gerinnungsmessgerät, die

Kontrollen und die Reagenzien überprüft werden.

Die Ergebnisse der Patientenproben dürfen nicht freigegeben werden, bevor der Grund der Abweichung eruiert und korrigiert wurde.

Auswertung

Zur Darstellung von TPZ-Werten finden derzeit verschiedene Methoden Anwendung. Für Dade

Reagenz

® Innovin ® gibt es einen chargen- und gerätespezifischen "International Sensitivity Index" -Wert (ISI), der die Angabe der Patientenwerte als "International Normalized Ratio" (INR) ermöglicht 4 . Berechnung und

Anwendung der INR sind unten beschrieben. Die Angabe in INR wird bevorzugt zur Dokumentation von

Ergebnissen für oral-antikoagulierte Patientenproben eingesetzt. Alternativ kann die Patienten-TPZ (in

Sekunden) zusammen mit dem Referenzbereich (in Sekunden) zur Ergebnismitteilung genutzt werden.

Beispiel: Patientenergebnis 18 Sekunden; Referenzbereich 9,7 - 12,3 Sekunden.

Bestimmung der INR (International Normalized Ratio)

Werte für Dade ® Innovin ® Reagenz

Internationale TPZ (Thromboplastinzeit) Standardisierung für das Monitoring oraler Antikoagulanzientherapien

1. Gemäß den gemeinsamen Empfehlungen der World Health Organization (WHO)

International Committee on Thrombosis and Haemostasis sollten TPZ-Werte für Patienten unter oraler die mit einer langfristigen oralen Antikoagulanzientherapie stabil eingestellt sind.

Die INR wird mit der folgenden Gleichung bestimmt 4 :

4 und des

Antikoagulanzientherapie als INR-Werte angegeben werden. INR-Werte sind von den verwendeten

Reagenzien und Methoden unabhängig und speziell für die Befundung von Patienten vorgesehen,

INR = R ISI

Patienten-TPZ

, wobei R = ——————————

MNPT**

ISI ist der International Sensitivity Index der Reagenzien-/Gerätekombination.

Die ISI-Werte für Siemens Thromboplastin Reagenzien werden entsprechend den WHO-

Empfehlungen ermittelt.

2. Methoden zur Berechnung der INR: a. Rechner mit Exponentialfunktion:

Diese Hinweise gelten speziell für den Rechner TI-55 II von Texas Instruments. Bei anderen

Rechnern, wie Hewlett-Packard-Modellen, kann die Eingabe abweichen. Hinweise finden Sie in der Bedienungsanleitung des Rechners. Überprüfen Sie die Rechenbeispiele anhand der

Umrechnungstabelle, um Rechenfehler zu erkennen.

Geben Sie die Patienten-TPZ in Sekunden ein, und drücken Sie ”÷”. Geben Sie nun die MNPT** ein, und drücken Sie anschließend ”=”. In der Anzeige erscheint R, die Patienten-Ratio. Drücken Sie nun die

Taste „y x “, geben Sie den spezifischen ISI-Wert der verwendeten Thromboplastin-/Gerätekombination ein und drücken ”=”. Das angezeigte Ergebnis ist der INR-Wert der Patientenprobe.

Eingabe

Beispiel: 24

÷

11,0

= y x

1,1

= b. Umrechnungstabelle:

Erläuterung

Patienten TPZ geteilt durch

MNPT**

Patienten-Ratio (in der Anzeige erscheint 2,1818)

Taste für die Exponentialfunktion

Beispiel-ISI-Wert

Ergebnis: INR (in der Anzeige erscheint 2,3588) als INR 2,4 ausgeben

Berechnen Sie zunächst die TPZ-Ratio, R, indem Sie die Patienten-TPZ durch die MNPT** teilen. Den INR-Wert finden Sie in der beiliegenden Umrechnungstabelle in der Spalte unter dem entsprechenden ISI-Wert und in der Zeile, die der Patienten-TPZ-Ratio (R) entspricht.

c. Automatisch:

INR-Werte können von verschiedenen Gerinnungsmessgeräten automatisch berechnet werden.

Hinweise hierzu sind in der Bedienungsanleitung zum Gerät enthalten. Spezifische Protokolle für

Gerinnungsmessgeräte sind auf Anfrage von Siemens erhältlich.

Abgeleiteter Fibrinogenwert

Bei Verwendung eines geeigneten Tests zusammen mit photo-optisch messenden Siemens

Gerinnungsmessgeräten und Sysmex ® Gerinnungsmessgeräten kann mit diesem Reagenz auch die Fibrinogenkonzentration durch Analyse der Veränderung im optischen Signal während der

Thromboplastinzeit-Bestimmung abgeleitet werden. Dazu muss die Masterkurve für abgeleitetes

Fibrinogen aus der chargenabhängigen Wertetabelle als Kalibrationskurve eingegeben werden.

Einschränkungen der Testdurchführung

Bei Verwendung von Dade ® Innovin ® Reagenz können sich bei der Bestimmung der exogenen Faktoren für die niedrigste Aktivität des Mangelfaktors längere Gerinnungszeiten als bei anderen Reagenzien ergeben, da in rekombinantem humanen Gewebefaktor keine zusätzlichen Gerinnungsfaktoren enthalten sind. So kann die Gerinnungszeit für eine niedrige Faktoraktivität mehr als 100 Sekunden betragen.

Siemens hat den Einsatz dieser Reagenzien auf verschiedenen Analysengeräten auf optimale

Produktleistung und Einhaltung der Produktspezifikationen überprüft. Vom Benutzer vorgenommene

Änderungen werden von Siemens nicht unterstützt, da sie die Leistung des Systems und die

Testergebnisse beeinflussen können. Es liegt in der Verantwortung des Benutzers, Änderungen an diesen

Anleitungen oder die Verwendung dieser Reagenzien auf anderen als in den Applikationsvorschriften von Siemens oder diesen Gebrauchsanweisungen genannten Analysengeräten zu validieren.

Resultate dieses Tests sollten stets in Verbindung mit der Vorgeschichte des Patienten, dem klinischen

Bild und anderen Untersuchungsergebnissen interpretiert werden.

Störfaktoren

Die Thromboplastinzeit kann durch eine Vielzahl häufig verschriebener Medikamente beeinflusst werden 4 , ein Umstand, der insbesondere beim Auftreten von unerwartet abnormalen Werten in Betracht gezogen werden sollte. Bei unerwartet abnormalen Werten muss gegebenenfalls die Ursache durch weitere Gerinnungstests gesucht werden.

Durch die Trübung lipämischer Proben, z. B. bei künstlicher Ernährung, kann die Richtigkeit der abgeleiteten Fibrinogenbestimmung beeinträchtigt werden.

Dade ® Innovin ® Reagenz ist gegen unfraktionierte Heparinkonzentrationen bis zu 2,0 Einheiten/ ml unempfindlich.

Die Heparin-Sensitivitätsstudie wurde mit aufgestocktem Normalplasmapool durchgeführt. Die Heparinsensitivität definiert sich durch die Konzentration an Heparin in der Probe, die zu einer Verlängerung über den Referenzbereich hinaus führt.

Inhibitoren wie Lupus Antikoagulans können die Thromboplastinzeit beeinflussen und beispielsweise zu

INR Werten führen, die nicht das genaue Maß der Antikoagulation wiedergeben 6 .

Therapeutische Dosen von Hirudin oder anderen direkten Thrombin-Inhibitoren führen zu verlängerten

Gerinnungszeiten 7,8 .

Referenzbereiche

Die Werte gesunder Personen variieren von Labor zu Labor in Abhängigkeit von der angewendeten

Methode. Daher sollte jedes Labor auf der Grundlage des verwendeten Verfahrens und

Gerinnungsmessgerätes eigene Referenzbereiche ermitteln.

In einer Studie mit offensichtlich gesunden Personen (n = 138) wurde der folgende Referenzbereich

(5.- 95. Perzentile) ermittelt:

Sysmex ® CA-7000 System:

Abgeleitetes Fibrinogen 9 :

Zentraler 90 %-Referenzbereich: 10,4 - 12,4 Sekunden.

1,8 - 3,5 g/l

Therapeutische Bereiche

Die therapeutischen Bereiche für die INR können in Abhängigkeit von der jeweiligen Indikation einer oralen Antikoagulanzientherapie variieren 10 .

Leistungsmerkmale des Tests

Präzision

Die Präzision von Thromboplastinzeit-Werten ist im allgemeinen von der verwendeten Methode abhängig. Mit Reagenzien einer Charge sollten Ergebnisse erzielt werden, die innerhalb der

Qualitätskontrollgrenzen des Labors reproduzierbar sind.

Die Präzision von Dade ® Innovin ® Reagenz am Sysmex ® CA-6000 System wurde mit

Qualitätskontrollmaterial bei insgesamt 6 Testläufen an 3 Tagen (2 Testungen pro Tag) und 4-fach

Bestimmungen pro Kontrolle bestimmt. Pro Testung wurden die folgenden Ergebnisse erzielt:

Bestimmung

Thromboplastinzeit abgeleitetes

Fibrinogen

Kontrolle

1

2

1

2

24

24

24

24 n Mittelwert

12,4 s

33,0 s

2,37 g/l

3,37 g/l

Variationskoeffizient

Intra-Assay

1,3 %

0,7 %

4,0 %

4,1 %

Inter-Assay

2,0 %

3,4 %

2,8 %

3,0 %

Gesamt

2,4 %

3,5 %

4,9 %

5,1 %

Literatur

Siehe englische Gebrauchsanweisung.

* nicht in den USA erhältlich

** Die mittlere normale TPZ oder MNPT (= Mean Normal Pathrombin Time) ist definiert als Mittelwert des Normalbereichs. Sie muss speziell für jede Thromboplastincharge mit der für die Analyse von Patientenproben verwendeten Methode bzw. dem dafür eingesetzten Gerinnungsmessgerät bestimmt werden.

Ci-Trol, Dade und Innovin sind Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics.

Sysmex ist ein eingetragenes Warenzeichen von SYSMEX CORPORATION.

Mit dem Erwerb des durch die U.S. Patente Nr. 5,625,036, 7,084,251 und 7,049,131 geschützten Dade

Innovin

®

® erhält der Käufer das eingeschränkte Recht, dieses Produkt gemäß dieser Gebrauchsanweisung zu verwenden.

Ausgabe Mai 2008

Dade ® Innovin ®

Domaine d’utilisation

Pour la mesure du Temps de Quick (TQ - ou Temps de Thromboplastine, TP), ainsi que les autres tests basés sur cette mesure, dans le plasma citraté humain.

Intérêt diagnostique

Le réactif Dade ® Innovin ® est un facteur tissulaire humain recombinant purifié, préparé à partir d’ E. Coli, et additionné de phospholipides synthétiques (thromboplastine) 1 , de calcium, de tampon et de stabilisateurs. Le réactif induit la formation d’un caillot par les voies d’activation exogène et commune selon un test de dépistage global, la mesure du Temps de Quick (TQ). Le réactif Dade indications basées sur le TQ 2

® Innovin ® a trois principales

:

1. comme test de dépistage rapide, en vue de mettre en évidence un ou plusieurs déficits du système exogène de la coagulation, témoins de troubles de la coagulation congénitaux ou acquis, de maladies hépatiques ou d’un déficit en vitamine K;

2. comme test sensible permettant un suivi des traitements aux anticoagulants oraux, et

3. pour le dosage des facteurs exogènes de la coagulation.

Différents appareils de coagulation photo-optiques permettent en plus d’obtenir la valeur du fibrinogène dérivé pendant la mesure du temps de Quick.

® Innovin Le réactif Dade ® est préparé à partir de facteur tissulaire humain recombinant et de phospholipides synthétiques, qui ne contiennent aucun des autres facteurs de la coagulation, comme par ex. la prothrombine, le F VII ou le F X. Ceci explique sa grande sensibilité aux plasmas exempts de facteurs de la coagulation ainsi qu’aux plasmas de patients sous anticoagulants oraux. La sensibilité du réactif

® Innovin Dade ® est très proche de celle de la thromboplastine de référence de l’OMS, obtenue à partir de cerveau humain 3 . De plus, le réactif Dade ® Innovin ® est insensible aux concentrations thérapeutiques d’héparine. Du fait de sa grande sensibilité aux facteurs de la coagulation et de son absence de sensibilité à l’héparine dans le domaine thérapeutique, le réactif Dade la surveillance des traitements aux anticoagulants oraux plasmas qui ne sont que faiblement pathologiques.

3

® Innovin ® est particulièrement adapté à

. Sa grande sensibilité, c’est-à-dire sa capacité

à réagir à des activités de facteurs de la coagulation faiblement diminuées, permet même de révéler des

Principe de la méthode

L’incubation d’un plasma avec une quantité optimale de thromboplastine et de calcium déclenche le processus de coagulation. Le temps qui s’écoule jusqu’à la formation d’un caillot de fibrine est mesuré.

Réactifs

Contenu des conditionnements

10 x l 4 ml, [REF] B4212-40

10 x l 10 ml, [REF] B4212-50

12 x l 20 ml, [REF] B4212-100

Composition

Dade ® Innovin ® Réactif : lyophilisat de facteur tissulaire humain, de phospholipides synthétiques

(thromboplastine), d’ions calcium, d’un neutralisateur d’héparine, de tampon et de stabilisateurs (albumine sérique bovine).

Mises en garde et précaution d’emploi

Réservé à un usage de diagnostic in vitro.

Préparation du réactif

Reconstituer le contenu d’un flacon de Dade ® Innovin ® Réactif lyophilisé avec de l’eau distillée ou désionisée, selon le volume indiqué sur l’étiquette du flacon. Conserver à +2/+8 °C.

Bien mélanger immédiatement après l’addition de l’eau pour aider à l’homogénéisation complète. Si on n’utilise pas la solution immédiatement, agiter de nouveau le flacon juste avant emploi. Il est inutile de l’agiter en permanence.

Remarque : ne pas utiliser d’eau contenant des conservateurs.

Stabilité et conditions de conversation

Température de conservation : +2/+8 °C. A cette température et conservé dans son flacon non ouvert, le réactif reste stable jusqu’à la date de péremption (cf. étiquette du flacon).

Stabilité après reconstitution : +2/+8 °C

+15/+25 °C

10 jours (flacon fermé)

5 jours (flacon fermé)

+37 °C 24 heures (flacon fermé)

Les données de stabilité sur les appareils de coagulation sont indiquées dans les manuels de référence

(protocoles d’adaptation) des différents appareils de coagulation.

Ne pas congeler le réactif !

Indices que le réactif est périmé : absence de vide à l’ouverture du flacon ; difficulté à dissoudre le lyophilisat ; impossibilité à obtenir des valeurs reproductibles.

Autres matériel et réactifs nécessaires

Plasma de contrôle N ou Dade

Plasma de contrôle P, Dade ®

® Ci-Trol

Ci-Trol ®

® Niveau 1

Niveau 2 ou Dade ® Ci-Trol ® Niveau 3

PT-Multi Calibrator* (Pour obtenir des informations détaillées sur l’utilisation, consulter la notice d’utilisation).

Plasma standard humain ou plasma normal frais 4 pour déterminer le MNPT**

Solution citrate de sodium (0,11 mol/l ou 0,13 mol/l, ou à 3,2 % ou 3,8 %) pour les prélèvements sanguins

Eau distillée ou désionisée sans conservateurs

Tubes en plastique

Pipettes en plastique pour le transfert des échantillons

Pipettes pour la mesure exacte de 20,0 ml, 10,0 ml, 1,0 ml, 0,50 ml, 0,20 ml et 0,10 ml

Appareil de coagulation

Appareils

Le réactif Dade ® Innovin ® peut être utilisé manuellement ou sur des appareils automatiques de coagulation.

Siemens Healthcare Diagnostics propose des manuels de référence (protocoles d’adaptation) pour différents appareils de coagulation. Ces manuels contiennent des informations sur la réalisation des tests et leurs caractéristiques, spécifiques aux tests et à l’appareil. Ces informations peuvent différer de celles indiquées dans cette notice d’emploi. Dans ce cas, utiliser les données du manuel de référence (protocoles d’adaptation) et non celles de cette notice d’emploi. Respecter les instructions d’emploi du fabricant de l’appareil !

Prélèvement et préparation des échantillons à tester

Mélanger neuf parts de sang de patient fraîchement prélevé avec une part de solution de citrate de sodium à 0,11 ou 0,13 mol/l (3,2 % ou 3,8 %). Il est possible d’utiliser un système de tubes de prélèvement ou une seringue.

Centrifuger l’échantillon sanguin à 1500 x g pendant au moins 15 minutes à température ambiante.

Conserver à température ambiante dans le tube fermé. Ne pas conserver sur de la glace ni entre + 2

à + 8 °C car l’activation du facteur VII par le froid peut fausser les résultats. Le plasma doit être testé dans les 24 heures suivant le prélèvement sanguin. Ne pas conserver les échantillons à + 37 °C pendant plus de 5 minutes. Si le patient suit un traitement anticoagulant par héparine et coumarine, les résultats peuvent varier en fonction de la durée de conservation.

Consulter le document CLSI H21-A5 des échantillons.

5 pour connaître le détail de la préparation et de la conservation

Réalisation du test

Réalisation manuelle :

Préchauffer le réactif Dade ® Innovin ® à +37 °C.

Distribuer dans des tubes à essai en plastique selon le protocole suivant :

Plasma

Contrôle

Laisser incuber les échantillons dans des tubes pendant 1

à 2 minutes (max. 5 minutes) à +37 °C.

Ajouter rapidement le réactif Dade ® Innovin ® préchauffé

Echantillon à tester

0,1 ml

-

0,2 ml

Contrôle

-

0,1 ml

0,2 ml

Déclencher le chronomètre au moment de l’addition du réactif Dade ® s’écoule jusqu’à la formation du caillot.

Innovin ® , et mesurer le temps qui

Contrôle de qualité interne

Domaine normal : Dade

Domaine thérapeutique : Dade

® Ci-Trol

® Ci-Trol

®

®

Niveau 1 ou Plasma de contrôle N

Niveau 2, Dade ® Ci-Trol ® Niveau 3 ou Plasma de contrôle P

A chaque changement de flacon de réactif, au début de chaque test, après chaque calibration et au moins toutes les 8 heures sur une même journée de travail, tester deux contrôles (un dans le domaine normal et un dans le domaine thérapeutique).

Traiter les contrôles comme des échantillons de patients.

Chaque laboratoire doit déterminer son propre domaine de confiance pour les contrôles. Définir un nouveau domaine à chaque changement de lot de réactif ou de contrôle. Le domaine de confiance correspond généralement à ± 2,5 déviation standard (DS) par rapport à la valeur moyenne du contrôle.

Si les valeurs des contrôles sortent du domaine de confiance, vérifier l’appareil de coagulation, les contrôles ainsi que les réactifs. Ne pas valider les valeurs obtenues pour l'échantillon de patient tant que l’origine d’une valeur aberrante n’a pas été identifiée et corrigée.

Exploitation des résultats

Le rendu des résultats de TQ se fait selon différentes méthodes. Pour le réactif Dade permet de rendre les résultats des patients en INR («International Normalized Ratio») 4

® Innovin ® , il est donné une valeur ISI («International Sensitivity Index»), qui varie selon les lots et les appareils, et qui

. Pour le calcul et l’utilisation des valeurs INR, cf. ci-dessous. Il est recommandé d’utiliser des INR pour la documentation des résultats obtenus chez les patients sous anticoagulants oraux. Comme alternative, on peut également rendre les résultats de patients sous forme de TQ (en secondes), accompagnés du domaine de référence (en secondes).

Exemple : résultat du patient : 18 secondes ; domaine de référence : 9,7 - 12,3 secondes.

Détermination de l’INR (International Normalized Ratio)

Valeurs pour Dade

et du Comité

International pour la Thrombose et l’Hémostase, les valeurs de TQ pour les patients sous anticoagu-

INR = R

® Innovin

ISI

® Réactif

Standardisation internationale du TQ (Temps de Quick) pour le suivi des traitements aux anticoagulants oraux

1. Selon les recommandations générales de l’Organisation Mondiale de la Santé (OMS) aux anticoagulants oraux à long terme.

L’INR est calculé selon la formule suivante 4 :

TQ du patient

, sachant que R = —————————————

MNPT**

4 lants oraux devraient être rendus en INR. Les INR sont indépendants des réactifs et des méthodes utilisés, et particulièrement adaptés au rendu des résultats de patients stabilisés par un traitement

B4212 G40 E0501 (837) 3

ISI est l’index de sensibilité international pour la combinaison réactif/appareil.

Les valeurs ISI pour les réactifs de thromboplastine de Siemens sont déterminées selon les recommandations de l’OMS.

2. Méthodes pour le calcul de l’INR :

a. à l’aide d’une calculatrice avec fonction exponentielle :

Ces indications sont spécialement prévues pour la calculatrice TI-55 II de Texas Instruments.

Avec d’autres calculatrices, comme les Hewlett-Packard, la saisie peut varier. Se reporter aux instructions de la calculatrice utilisée. Tester les exemples de calcul à l’aide de la table de conversion, afin de détecter les erreurs de calcul.

Entrer le TQ du patient en secondes et appuyer sur « ÷ ». Entrer ensuite le MNPT**, puis appuyer sur « = ». L’écran affiche R, le ratio du patient. Appuyer ensuite sur la touche « y résultat affiché est l’INR de l’échantillon de patient.

Saisie x », entrer la valeur ISI spécifique de la combinaison thromboplastine/appareil utilisée, et appuyer sur « = ». Le

Exemple: 24

÷

11,0

= y x

1,1

Signification

TQ patient divisé par

MNPT** ratio du patient (affichage à l’écran : 2,1818) touche de fonction exponentielle

exemple de valeur ISI résultat : INR (affichage à l’écran : 2,3588)

Rendre un INR de 2,4

=

b. à l’aide du tableau de conversion :

calculer d’abord le ratio R de TQ, en divisant le TQ du patient par le MNPT**. L’INR correspond à la valeur qui se trouve dans la table de conversion jointe, à l’intersection de la colonne des valeurs

ISI et de la ligne des ratios des TQ patients (R).

c. par méthode automatique :

Les INR sont calculés automatiquement par différents appareils de coagulation. Se reporter au manuel d’utilisation de l’automate utilisé. Des protocoles spécifiques sont envoyés sur demande par Siemens.

Valeurs de fibrinogène dérivé

En utilisant le réactif Dade

Siemens ou Sysmex ®

® Innovin ® et un test approprié sur un appareil de coagulation photo-optique

, on peut également obtenir avec ce réactif la concentration de fibrinogène par analyse de la modification du signal optique pendant la mesure du Temps de Quick. Pour cela, utiliser comme courbe d’étalonnage la courbe-mère indiquée pour le fibrinogène dérivé dans le tableau des valeurs spécifiques à chaque lot.

Limites du test

Le facteur tissulaire humain recombinant ne contenant pas d’autres facteurs de la coagulation, on peut, lors du dosage des facteurs exogènes, obtenir avec le réactif Dade ® Innovin ® des temps de coagulation plus allongés qu’avec d’autres réactifs à la plus faible activité du facteur déficient. C’est ainsi que le temps de coagulation pour l’activité la plus faible peut être supérieure à 100 secondes.

Siemens a validé l’utilisation de ces réactifs sur plusieurs analyseurs afin d’optimiser les performances du produit et répondre à ses spécifications. Les modifications apportées par l’utilisateur ne sont pas sous la responsabilité de Siemens dans la mesure où elles peuvent affecter les performances du système et les résultats des dosages. Il est de la responsabilité de l’utilisateur de valider toutes modifications apportées à ces instructions ou à l’utilisation des réactifs sur les analyseurs autres que ceux mentionnés dans les protocoles d’application Siemens ou dans la présente notice d’utilisation.

Les résultats de ce test doivent toujours être interprétés en rapport avec les antécédents médicaux du patient, les signes cliniques et autres constatations.

Facteurs d’interférence

Le Temps de Quick peut être influencé par un grand nombre de médicaments fréquemment prescrits 4 , phénomène dont il faut tenir compte, surtout lorsqu’on obtient des valeurs anormales inattendues. Dans ce cas-là, en chercher la cause en effectuant d’autres tests de coagulation.

La turbidité des échantillons lipémiques, par ex. en cas d’alimentation artificielle, peut avoir une influence sur la détermination du fibrinogène dérivé.

Le réactif Dade ® Innovin ® est insensible aux concentrations d’héparine non fractionnée, jusqu’à 2,0 unités/ml. L’étude de sensibilité à l’héparine a été effectuée sur un pool de plasmas normaux enrichi. La sensibilité à l’héparine se définit par le concentration d’héparine entraînant un allongement du temps au-delà du domaine de référence.

Les inhibiteurs tels que les lupus anticoagulants peuvent interférer avec le taux de prothrombine et donner lieu par exemple à des INR qui ne reflètent pas le niveau exact d'anticoagulant gement des temps de coagulation 7,8 .

6 .

Des doses thérapeutiques d’Hirudin ou d’un autre inhibiteur direct de la thrombine entraînent un allon-

Domaines de référence

Les valeurs obtenues sur des sujets sains varient d’un laboratoire à l’autre selon la méthode utilisée.

Aussi chaque laboratoire doit-il déterminer ses propres domaines de référence en se basant sur la technique et l’appareil de coagulation qu’il utilise.

Une étude portant sur des sujets apparemment sains (n = 138) a déterminé les domaines de référence suivants (5 ème - 95

Système Sysmex ®

ème

Fibrinogène dérivé

percentiles) :

CA-7000 : domaine de référence central de 90 % : 10,4 - 12,4 secondes

9 : 1,8 - 3,5 g/l

Domaines thérapeutiques

Les domaines thérapeutiques pour l’INR peuvent varier selon l’indication des traitements aux anticoagulants oraux 10 .

Caractéristiques du test

Précision

La précision des valeurs de Temps de Quick dépend généralement de la méthode utilisée. En utilisant des réactifs d’un même lot, on doit obtenir des résultats qui sont reproductibles à l’intérieur du domaine de contrôle de qualité défini par le laboratoire.

La précision du réactif Dade ® Innovin ® sur le système Sysmex ® CA-6000 a été déterminée à l’aide de préparations de contrôle de qualité, testés en 6 séries au total sur 3 jours (2 tests par jour), chaque contrôle étant testé 4 fois. Les résultats suivants ont été obtenus :

Dosage

Temps de Quick

Fibrinogène dérivé

Contrôle

1

2

1

2 n

24

24

24

24

Valeur moyenne

12,4 s

33,0 s

2,37 g/l

3,37 g/l

Coefficient de variation répétabilité reproductibilité

1,3 %

0,7 %

4,0 %

4,1 %

2,0 %

3,4 %

2,8 %

3,0 % total

2,4 %

3,5 %

4,9 %

5,1 %

Littérature

Cf. notice d’emploi en anglais.

* non disponible aux USA

** Le MNPT (= Mean Normal Prothrombin Time) est défini comme la valeur moyenne du domaine normal. Il doit être spécialement déterminé pour chaque lot de thromboplastine, selon la méthode ou l’appareil de coagulation utilisé pour l’analyse des échantillons de patients.

Ci-Trol, Dade et Innovin sont des marques commerciales de Siemens Healthcare Diagnostics.

Sysmex est une marque commerciale de SYSMEX CORPORATION.

Dade tant Dade ®

Dade

®

®

Innovin

Innovin

®

®

est protégé par les brevets américains n° 5,625,036, 7,084,251 et 7,049,131. En ache-

Innovin ® , l’acquéreur obtient une licence d’utilisation limitée lui donnant le droit d’utiliser le kit

acheté conformément à cette notice d’utilisation.

Dade ® Innovin ®

Settore d'impiego

Da utilizzare per le determinazioni del tempo di protrombina (PT) e per i dosaggi basati sul tempo di protrombina su plasma umano citratato.

Significato diagnostico

Il Reagente Dade ® Innovin ® viene preparato da fattore tissutale umano ricombinante purificato prodotto in E. coli, con aggiunta di fosfolipidi sintetici (tromboplastina) 1 , calcio, tamponi e stabilizzanti. Il reagente avvia la coagulazione attraverso le vie intrinseca e comune in un test di screening globale, il tempo di protrombina (PT). Il Reagente Dade ® Innovin ® ha tre principali applicazioni basate sul PT 2 :

1. come test di screening rapido per rilevare carenze singole o combinate del sistema estrinseco della coagulazione, indicative di disordini ereditari e acquisiti della coagulazione, patologie epatiche o carenza di vitamina K;

2. come test di monitoraggio sensibile per la terapia anticoagulante orale; e

3. come dosaggio per specifici fattori della coagulazione.

Inoltre, numerosi analizzatori per coagulazione fotoottici sono in grado di derivare il valore del fibrinogeno dalla determinazione del tempo di protrombina.

Il Reagente Dade ® Innovin ® viene prodotto utilizzando fattore tissutale umano ricombinante e fosfolipidi sintetici che non contengono nessun altro fattore della coagulazione come protrombina, F VII e F X. Pertanto, è altamente sensibile alle carenze di fattori e ai campioni di pazienti trattati con anticoagulanti orali.

La sensibilità del Reagente Dade ® Innovin umano dell’OMS. Il Reagente Dade

® è molto simile alla tromboplastina

® Innovin

3 di riferimento da cervello sensibilità del Reagente Dade ® Innovin ®

® non è sensibile all’eparina a livelli terapeutici. L’elevata

ai fattori della coagulazione e la sua insensibilità all’eparina a dosi terapeutiche lo rendono adatto per il monitoraggio della terapia anticoagulante orale 3 . Inoltre, la sua elevata sensibilità (la reattività del reagente a diminuzione moderata dell’attività dei fattori) consente la differenziazione dei plasmi anormale, anche nell’intervallo moderatamente patologico.

Principio del Metodo

La cascata coagulativa viene attivata incubando il plasma con la quantità ottimale di tromboplastina e calcio; viene poi misurato il tempo di coagulazione.

Reagenti

Contenuto della confezione

10 x l 4 mL, [REF] B4212-40

10 x l 10 mL, [REF] B4212-50

12 x l 20 mL, [REF] B4212-100

Composizione

Reagente Dade ® Innovin ® : Reagente liofilizzato composto da fattore tissutale umano ricombinante e fosfolipidi sintetici (tromboplastina), ioni calcio, un componente neutralizzante l’eparina, tamponi e stabilizzanti (sieroalbumina bovina).

Avvertenze e precauzioni

Per uso diagnostico in-vitro.

Preparazione dei Reagenti

Ricostituire un flacone di Reagente Dade ® Innovin ® con acqua distillata o deionizzata utilizzando il volume indicato sull’etichetta del flacone. Conservare da +2 a +8 °C.

Per garantire la completa ricostituzione, mescolare bene il contenuto del flacone immediatamente dopo aver aggiunto l’acqua. Se lasciato a riposo, il Reagente Dade ® Innovin ® dovrebbe essere rimescolato prima dell’uso per assicurare l’omogeneità della soluzione. Non occorre la miscelazione continua.

Nota: Non utilizzare acqua contenente conservanti.

Conservazione e Stabilità

Conservare da +2 a +8 °C. A questa temperatura, il reagente non aperto può essere utilizzato fino alla data di scadenza (vedere etichetta del flacone).

Stabilità dopo ricostituzione: da +2 a +8 °C da +15 a +25 °C

10 giorni (flacone chiuso)

5 giorni (flacone chiuso) a +37 °C 24 ore (flacone chiuso)

Le informazioni sulla stabilità on-board per i diversi analizzatori per coagulazione sono indicate nelle

Reference Guides (Protocolli Applicativi).

Non congelare!

Indici di scadenza: Assenza di vuoto all’apertura del flacone; difficoltà di ricostituzione del reagente; risultati non riproducibili.

Materiali necessario ma non fornito

Control Plasma N oppure Dade

Control Plasma P, Dade ®

®

Ci-Trol

Ci-Trol

®

® Level 1

Level 2 oppure Dade ® Ci-Trol ® Level 3

PT-Multi Calibrator* (per maggiori informazioni sull’uso, consultare le Istruzioni d'uso)

Standard Human Plasma oppure plasma normale fresco 4 per determinare il PT medio normale

(MNPT)**

Soluzione di sodio citrato (0,11 mol/L oppure 0,13 mol/L / 3,2 % oppure 3,8 %) per il prelievo del sangue

Acqua distillata o deionizzata senza conservanti

Provette di plastica

Pipette di plastica

Pipette di precisione da 20,0 mL, 10,0 mL, 1,0 mL, 0,50 mL, 0,20 mL e 0,10 mL

Analizzatore per coagulazione

Strumentazione

Il Reagente Dade ® Innovin ® può essere utilizzato manualmente oppure su analizzatori automatici per coagulazione. Siemens Healthcare Diagnostics offre le Reference Guides (Protocolli Applicativi) per numerosi analizzatori per coagulazione. Le Reference Guides (Protocolli Applicativi) riportano utilizzo specifico analizzatore/test e informazioni sulle caratteristiche che possono differire da quelli forniti nelle presenti Istruzioni per l’Uso. In questo caso, l’informazione contenuta nelle Reference Guides (Protocolli

Applicativi) sostituisce le informazioni delle presenti Istruzioni per l’Uso. Consultare il manuale di istruzioni del produttore dello strumento!

Raccolta e preparazione dei campioni

Mescolare 9 parti di sangue fresco del paziente con 1 parte di soluzione di citrato di sodio da 0,11 o

0,13 mol/L (3,2 % o 3,8 %). È possibile utilizzare un sistema con provetta sottovuoto o una siringa.

Centrifugare il campione di sangue a 1500 x g per almeno 15 minuti a temperatura ambiente.

Conservare in una provetta chiusa a temperatura ambiente. Non conservare in ghiaccio oppure a temperature tra +2 e +8 °C poiché l'attivazione del fattore VII dovuta al freddo può alterare i risultati.

Testare il plasma entro 24 ore dalla raccolta del campione. I campioni non devono restare a una temperatura di +37 °C per più di 5 minuti. Se il paziente sta seguendo una terapia sia con eparina che anticoagulante cumarinico, i risultati potrebbero variare in funzione del tempo di conservazione.

Per maggiori informazioni sulla preparazione e conservazione del campione, consultare il documento

CLSI H21-A5 5 .

Edition Mai 2008

B4212 G40 E0501 (837)

B4212 G40 E0501 (837) 4

B4212 G40 E0501 (837)

Esecuzione del test

Esecuzione Manuale:

Preriscaldare il Reagente Dade ® Innovin ® a +37 °C.

Pipettare in provette da coagulazione come segue:

Plasma

Controllo

Incubare provette e campioni per 1 - 2 minuti (max. 5 minuti) a +37 °C

Aggiungere Reagente Dade ® Innovin ® preriscaldato

Campione in esame

0,1 mL

-

0,2 mL

Controllo

-

0,1 mL

0,2 mL

Avviare il cronometro simultaneamente all’aggiunta del Reagente Dade ® formazione del coagulo.

Innovin ® . Rilevare il tempo di

Controllo di Qualità Interno

Intervallo normale:

Intervallo patologico:

Dade

Dade

®

®

Ci-Trol

Ci-Trol

®

®

Level 1 oppure Control Plasma N

Level 2, Dade ® Ci-Trol ® Level 3 or Control Plasma P

Due livelli di materiale di controllo di qualità (intervallo normale e patologico) devono essere analizzati all’avvio di ogni ciclo operativo, con ogni calibrazione, al cambio del flacone di reagente e almeno ogni otto ore per ogni giorno di lavoro.

Il materiale di controllo deve essere preparato e analizzato allo stesso modo dei campioni.

Ogni laboratorio dovrebbe definire un intervallo di variazione accettabile per i controlli. Nuovi intervalli di controllo dovrebbero essere definiti per ogni lotto di reagente o di materiale di controllo. Tale intervallo è generalmente basato su ± 2,5 deviazioni standard (DS) dal valore medio del controllo.

Se i valori di controllo sono al di fuori dell’intervallo di accettabilità, controllare l’analizzatore per coagulazione, i controlli ed i reagenti. Non refertare i risultati dei pazienti finché non sia stata individuata e corretta la causa di tale deviazione.

Calcolo dei risultati

Attualmente, vari metodi sono utilizzati per refertare i risultati PT. I valori di ISI (International Sensitivity

Index) per il Reagente Dade ® Innovin ® vengono forniti per la specifica combinazione reagente/strumento; questo permette di refertare i risultati in INR (International Normalized Ratio) 4 . Calcolo e utilizzo dell’INR sono descritti di seguito. Il sistema INR è il metodo preferenziale per refertare i risultati dei campioni di pazienti in terapia anticoagulante orale. In alternativa, è possibile utilizzare il PT dei pazienti (in secondi) insieme con l’intervallo di riferimento (in secondi) per refertare i risultati.

Esempio: risultato del paziente 18 secondi; intervallo di riferimento 9,7 - 12,3 secondi.

Determinazione dell’INR (International Normalized Ratio)

Valori utilizzando il Reagente Dade ® Innovin ®

Standardizzazione Internazionale del PT (Tempo di Protrombina) per il Monitoraggio della Terapia Anticoagulante Orale

1. Secondo le raccomandazioni congiunte dell’Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS) 4 e dell’International Committee on Thrombosis and Haemostasis, i risultati del PT per pazienti in terapia anticoagulante orale dovrebbero essere refertati come valori INR. I risultati refertati in INR sono indipendenti dai reagenti e dai metodi utilizzati, e sono specificamente destinati a valutare pazienti stabilizzati in terapia anticoagulante orale a lungo termine.

L’INR viene determinato 4 in base alla seguente formula:

INR = R ISI

PT medio normale**

ISI è l’International Sensitivity Index della combinazione reagente/strumento.

I valori di ISI per le tromboplastine Siemens vengono determinati secondo le raccomandazioni dell’OMS.

2. Metodi di calcolo dell’INR:

a. Calcolatori con funzioni esponenziali:

Queste istruzioni si riferiscono specificamente al calcolatore Texas Instruments TI-55 II. Altri calcolatori, es. i modelli Hewlett-Packard, possono richiedere sequenze diverse di impiego dei tasti.

Consultare il manuale del calcolatore e verificare gli esempi rispetto alla Tabella di Conversione per garantire l’adeguatezza delle procedure di conversione.

Digitare il PT del paziente in secondi, premere ”÷”, digitare lo MNPT**, premere ”=”. Il display mostra ora R, il Rapporto Paziente. Premere ora il tasto ”y di INR del paziente.

Premere x ”, quindi digitare il valore di ISI specifico della combinazione tromboplastina/strumento in uso e premere ”=”. Il risultato indicato è il valore

Esempio: 24

÷

11,0

= y x

1,1

Note

PT paziente diviso per

MNPT** rapporto paziente (il display mostra 2,1818) tasto della funzione esponenziale

esempio valore ISI risultato: INR (il display mostra 2,3588)

Refertare come INR = 2,4

=

b. Tabella di Conversione:

Prima, calcolare il rapporto PT paziente/MNPT**, R. Il valore INR può poi essere letto nell’allegata

Tabella di Conversione INR guardando nella colonna dell’adeguato valore di ISI, alla riga corrispondente al rapporto del PT paziente (R).

c. Automatico:

I valori INR possono essere calcolati automaticamente da numerosi coagulometri. Per i dettagli, consultare il relativo manuale di istruzioni. I protocolli per analizzatori per coagulazione specifici sono disponibili a richiesta presso Siemens.

Fibrinogeno Derivato

Utilizzando il Reagente Dade ® Innovin ® e l’adeguato test sugli analizzatori fotometrici per coagulazione Siemens oppure sugli analizzatori per coagulazione Sysmex ® , la concentrazione di fibrinogeno può essere derivata analizzando la variazione del segnale ottico durante le determinazioni del tempo di protrombina, utilizzando una curva di calibrazione per il fibrinogeno derivato. Tale curva di calibrazione

(master curve) viene fornita da Siemens nella tabella lotto-dipendente dei valori dichiarati.

Limitazioni della esecuzione del test

Il fattore tissutale umano ricombinante non contiene altri fattori della coagulazione. Le curve di dosaggio dei fattori utilizzando il Reagente Dade ® Innovin ® possono pertanto mostrare tempi di coagulazione più lunghi ai più bassi livelli di carenza fattoriale rispetto ad altri reagenti. Questo potrebbe tradursi in tempi di coagulazione maggiori di 100 secondi per bassi livelli fattoriali nelle curve di dosaggio dei fattori.

Siemens ha validato l’uso di questi reagenti su vari analizzatori per ottimizzare le prestazioni e rispettare le specifiche dei prodotti. Le modifiche definite dall’utente non sono supportate da Siemens poiché possono influire sulle prestazioni del sistema e sui risultati del test. Pertanto è responsabilità dell’utente validare tutte le modifiche apportate a queste istruzioni, l’uso dei reagenti su analizzatori diversi da quelli inclusi nei fogli di istruzioni o nelle istruzioni d’uso fornite da Siemens.

I risultati di questo test devono essere sempre interpretati alla luce della anamnesi del paziente, della presentazione clinica e valutando contestualmente l’esito di altri accertamenti.

Sostanze Interferenti

Molti farmaci comunemente impiegati possono influenzare i risultati ottenuti dall’analisi del tempo di protrombina 4 . Questo fatto deve essere tenuto presente quando si ottengano risultati anormali insoliti o inattesi. Risultati anormali inattesi dovrebbero essere seguiti da ulteriori studi coagulativi per determinare la causa dell’anormalità.

La torbidità di campioni lipemici, es. in nutrizione parenterale, può ostacolare l’accuratezza della determinazione del fibrinogeno derivato.

® è insensibile all’eparina non frazionata fino a concentrazioni di circa 2,0 unità Il Reagente Dade ® Innovin per mL. Lo studio di sensibilità all’eparina è stato condotto utilizzando pool di plasmi normali addizionati e la sensibilità all’eparina è stata definita dalla concentrazione di eparina nel campione che che ha prolungato i risultati del PT oltre il limite superiore dell’intervallo di riferimento.

Gli inibitori come gli anticoagulanti lupus possono interferire con il tempo di protrombina e produrre ad esempio risultati dell’INR che non riflettono il grado esatto di anticoagulazione 6 . L’irudina o altri inibitori direti della trombina a dosi terapeutiche comportano allungamento dei tempi di protrombina 7,8 .

Valori attesi

I valori per soggetti sani variano da laboratorio a laboratorio secondo la tecnica utilizzata. Quindi, ogni laboratorio dovrebbe definire i propri intervalli di riferimento in base alla procedura e all’analizzatore per coagulazione utilizzati.

B4212 G40 E0501 (837) 5

In uno studio su soggetti visibilmente sani (n = 138), è stato determinato il seguente intervallo di riferimento (dal 5° al 95° percentile):

SIstema Sysmex ® CA-7000: Intervallo di riferimento centrale al 90 %: da 10,4 a 12,4 secondi

Fibrinogeno Derivato 9 : 1,8 - 3,5 g/L

Intervalli Terapeutici

Gli intervalli terapeutici per l’INR possono variare secondo l’indicazione della terapia anticoagulante orale 10 .

Caratteristiche del test

Precisione

La precisione dei risultati del tempo di protrombina è generalmente limitata dal metodo usato. Pertanto, su un lotto singolo, il reagente dovrebbe dare risultati che siano riproducibili nell’ambito del controllo di qualità del laboratorio.

La precisione del Reagente Dade ® Innovin ® sul sistema Sysmex ® CA-6000 è stata valutata con materiale di controllo di qualità su un totale di sei (6) cicli operativi separati nell’arco di tre (3) giorni di lavoro (due cicli al giorno) e con 4 replicati per ogni livello di controllo per ciclo, con i seguenti risultati:

Test

Tempo di Protrombina

Fibrinogeno Derivato

Livello di Controllo

1

2

1

2

24

24

24

24 n Media

12,4 s

33,0 s

2,37 g/L

3,37 g/L

Coefficiente di Variazione

Nel Ciclo Tra Cicli Totale

1,3 %

0,7 %

4,0 %

4,1 %

2,0 %

3,4 %

2,8 %

3,0 %

2,4 %

3,5 %

4,9 %

5,1 %

Bibliografia

Vedi testo inglese.

* Non disponibile negli USA

** Il PT normale medio viene definito come il valore medio dell’intervallo normale. Deve essere determinato specificamente per ogni lotto di tromboplastina utilizzando il metodo impiegato per analizzare i campioni dei pazienti e, se necessario, con il coagulometro utilizzato per le analisi.

Ci-Trol, Dade e Innovin sono marchi di Siemens Healthcare Diagnostics.

Sysmex è un marchio di SYSMEX CORPORATION.

L’acquisto di Dade

Innovin

® Innovin ® comprende una licenza limitata per l’acquirente per l’uso del prodotto Dade

® coperto da brevetto statunitense n. 5,625,036, 7,084,251 e 7,049,131 in conformità alle Istruzio-

® ni per l’uso indicate nel presente documento.

Edizione Maggio 2008

Dade

®

Innovin

®

Campos de aplicación

Para la determinación, en plasmas humanos citratados, del tiempo de protrombina (TP) y para los test basados en éste.

Significado diagnóstico

El reactivo Dade ® Innovin ® es un factor tisular humano recombinante producido en E. Coli, purificado, combinado con fosfolípidos sintéticos (tromboplastina) 1 , calcio, tampón y estabilizadores. El reactivo induce la formación del coagulo sobre las vías de activaciòn exógenas y el tramo final común en un test de chequeo global, la determinación del tiempo de protrombina (TP). El reactivo Dade en tres de las principales aplicaciones basadas en el TP 2

® Innovin ® se utiliza

:

1. como test de chequeo rápido para el reconocimiento de deficiencias aisladas o combinadas en los mecanismos extrínsecos de la coagulación, mediante los cuales se pueden reconocer alteraciones de la coagulación heredadas o adquiridas, enfermedades del hígado o deficiencias de vitamina K;

2. como test sensible para monitorizar las terapias con anticoagulantes orales y

3. para la determinación de los factores exógenos de la coagulación.

Adicionalmente, diversos analizadores de coagulación foto-ópticos pueden proporcionar el valor del

Fibrinógeno derivado a partir de la determinación del Tiempo de Protrombina

El reactivo Dade ® Innovin ® se prepara a partir de factor tisular humano recombinante y fosfolípidos sintéticos, que no contienen ninguno de los otros factores de la coagulación como por ej., protrombina, FVII y FX. Por esta razón es de gran sensibilidad contra plasmas deficientes en factores de la coagulación y plasmas de pacientes bajo una terapia con anticoagulantes orales. La sensibilidad del reactivo Dade ®

Innovin ® es muy similar a la de la tromboplastina de referencia de la OMS obtenida de cerebro humano

Además, el reactivo Dade ® Innovin ® en rangos terapéuticos, el reactivo Dade

3

es insensible a las concentraciones terapéuticas de heparina. De-

. bido a su alta sensibilidad contra los factores de la coagulación y a su insensibilidad contra la heparina

® Innovin ® es especialmente apropiado para el control de las terapias con anticoagulantes orales de plasmas levemente patológicas.

3 . Debido a su alta sensibilidad (esto es, la reacción del reactivo a la actividad moderadamente baja de los factores de la coagulación) se pueden reconocer incluso muestras

Principio del método

Mediante la incubación del plasma con las cantidades optimas de tromboplastina y calcio se desencadena el proceso de coagulación. Se mide el tiempo gastado hasta la formación del coagulo.

Reactivos

Contenido del envase comercial

10 x l 4 ml, [REF] B4212-40

10 x l 10 ml, [REF] B4212-50

12 x l 20 ml, [REF] B4212-100

Composición

Reactivo Dade ® Innovin búmina de suero bovino).

® : Liofilizado de factor tisular humano recombinado y fosfolípidos sintéticos

(Tromboplastina), iones de calcio, una unión neutralizante de heparina, tampón y estabilizadores (al-

Advertencias y medidas de seguridad

Sólo para uso en diagnósticos in-vitro.

Preparación de los reactivos

Disolver un frasco del reactivo Dade ® Innovin ® liofilizado en la cantidad de agua destilada o desionizada indicada en la etiqueta del frasco. Almacenar entre +2 y +8 °C.

Para una completa disolución del contenido del frasco mezclar bien, inmediatamente después de agregar el agua. Si se deja el frasco en reposo, el reactivo Dade ® Innovin ® se debe mezclar de nuevo bien antes de usar, con el fin de obtener una solución homogénea. No es necesario una agitación continua.

Advertencia: No utilizar agua con agentes de conservación.

Estabilidad y almacenaje

Almacenar entre +2 y +8 °C. A esta temperatura y sin abrir, el reactivo permanece estable hasta la fecha de vencimiento (ver la etiqueta del frasco).

Estabilidad después de reconstituido: entre +2 y +8 °C entre +15 y +25 °C a +37 °C

10 días (frasco cerrado)

5 días (frasco cerrado)

24 horas (frasco cerrado)

Los datos sobre la estabilidad en el aparato vienen dados en los manuales de referencia (reglamentos de aplicaciòn) de cada uno de los aparatos de medida de la coagulación.

No congelar!

Advertencia sobre deterioro: falta de vacío al abrir el frasco; el reactivo no se deja disolver fácilmente; no se obtienen datos reproducibles.

Materiales adicionales necesarios

Plasma control N, o Dade

Plasma control P, Dade ®

® Ci-Trol

Ci-Trol ®

® Nivel 1

Nivel 2 o Dade

PT-Multi Calibrador* (Para más detalles sobre el uso, consulte las Instrucciones de utilización.)

Plasma humano estándard o plasma normal 4

® Ci-Trol ® Nivel 3

fresco para la determinación de MNPT**

Solución de citrato de sodio (0,11 mol/l o 0,13 mol/l o bien al 3,2 % o al 3,8 %) para la toma de la sangre

Agua destilada o desionizada sin agentes de conservación

Tubos de plástico

Pipetas de plástico para la trasferencia de las muestras

Pipetas para la medida exacta de 20,0 ml, 10,0 ml, 1,0 ml, 0,50 ml, 0,20 ml y 0,10 ml.

Aparato de medida de la coagulación

Aparatos

El Reactivo Dade ® Innovin ® se puede utilizar en aparatos de medida de la coagulación manuales o automáticos. Siemens Healthcare Diagnostics pone a disposición manuales de referencia (reglamentos de aplicación) para diferentes aparatos de medida de la coagulación. Estos contienen información específica aparato/test para el manejo y el rendimiento, que pueden diferenciarse de la información dada en estas instrucciones de manejo. En este caso, la información contenida en los manuales de referencia (reglamentos de aplicación) reemplaza la información de estas instrucciones de manejo. Por favor consulte el manual de instrucciones del fabricante del aparato!

Extracción y preparación de la muestra

Mezcle nueve partes de sangre recién extraída con una parte de solución de citrato sódico, 0,11 ó

0,13 mol/l (3,2 ó 3,8 %). Puede utilizarse un sistema de tubos con vacío o jeringa.

La muestra de sangre ha de centrifugarse a 1500 x g durante 15 minutos como mínimo a temperatura ambiente.

Almacenar en un tubo cerrado a temperatura ambiente. No almacene en hielo o refrigerado entre +2 y

+8 °C, puesto que la activación del frío puede alterar los resultados del F VII. El plasma debe analizarse dentro de las 24 horas siguientes a la extracción. Las muestras no deben permanecer a +37 °C más de 5 minutos. Si el paciente está siguiendo una terapia con anticoagulantes basada tanto en heparina como en cumarina, los resultados pueden variar con el tiempo de almacenamiento.

Consulte el documento H21-A5 5 del CLSI para obtener información detallada sobre la preparación y el almacenamiento de las muestras.

Procedimiento

Desarrollo manual:

Precalentar el reactivo Dade ® Innovin ® a +37 °C.

Pipetear en un tubo de plástico lo siguiente:

Plasma

Control

Incubar las muestras en los tubos plásticos de 1 a 2 minutos

(máximo 5 minutos), a +37 °C

Agregar rápidamente el reactivo Dade ® Innovin ® precalentado

Muestra del test

0,1 ml

-

0,2 ml

Control

-

0,1 ml

0,2 ml

Al agregar el reactivo Dade ® Innovin ® activar inmediatamente el cronómetro. Medir el tiempo necesario para la formación del coagulo.

Control de calidad interno

Rango normal:

Rango patológico:

Dade ®

Dade ®

Ci-Trol

Ci-Trol

®

®

Nivel 1 o Plasma control N

Nivel 2, Dade ® Ci-Trol ® Nivel 3 o Plasma control P

Los controles se deben usar al comienzo de cada test, para cada cambio de reactivo y por lo menos una vez cada 8 horas durante un análisis (uno en el rango normal y uno en el rango patológico). Los controles deben ser tratados igual que las muestras a investigar.

Cada laboratorio deberá estipular sus propios rangos de confianza para los controles. Para cada nuevo lote de reactivo o de controles se debe definir un nuevo rango de control. Este rango corresponde por lo general a ± 2,5 la desviación estándar (DS) del valor promedio de los controles.

Si los valores de los controles se encuentran por fuera de este rango de confianza, se debe controlar el aparato de medir la coagulación, así como también, los controles y los reactivos. No valide los resultados del paciente hasta haber identificado y corregido la causa de la desviación.

Valoración

Para la presentación de los resultados del TP existen actualmente diferentes métodos. Para el reactivo

Dade ® Innovin ® existe un valor del „International Sensitivity Index“ (ISI) específico del lote y del aparato, el cual permite que los resultados de los pacientes se pueden dar como „International Normalized Ratio“

(INR) 4 . El cálculo y el uso del INR están descritos más adelante. Los datos en INR tienen preferencia para la documentación de los resultados de las muestras de pacientes con anticoagulantes orales.

Como alternativa para la determinación de los resultados, se puede usar el TP del paciente (en segundos) junto con el rango de referencia (en segundos).

Ejemplo: Resultado del paciente 18 segundos; Rango de referencia 9,7 - 12,3 segundos.

Determinación del INR (International Normalized Radio)

Valores para el reactivo Dade ® Innovin ®

Estandarización internacional del TP (tiempo de protrombina) para el monitoreo de terapias con anticoagulantes orales

1. De acuerdo a las recomendaciones comunes de la World Heath Organization (WHO) 4 y del International Commitee on Thrombosis and Haemostasis, los valores de TP de pacientes bajo una terapia con anticoagulantes orales deben darse en valores INR. Los valores INR son dependientes del reactivo y del método utilizado y especialmente previstos para los resultados de pacientes que hayan sido estabilizados con una terapia con anticoagulantes orales a largo plazo.

El INR se va a determinar con la siguiente fórmula 4 :

INR = R ISI ,

TP de los pacientes donde R = —————————————

MNPT**

ISI es el Intenational Sensitivity Index de la combinación Reactivo-/aparato.

El valor ISI para el reactivo de protrombina de Siemens se determina de acuerdo a las recomendaciones de la WHO.

2. Métodos para calcular INR:

a. Calculadora con función exponencial:

Esta información es valida especialmente para la calculadora TI-55 II de Texas Instrument. Para otras calculadoras como los modelos de Hewlett-Packard, pueden variar las ordenes. Mayor información se puede encontrar en el manual de operaciones de la calculadora. Compruebe los ejemplos de cálculos basado en la Tabla de conversión, para poder reconocer los errores del cálculo.

Dé los valores de TP de los pacientes en segundos y oprima „÷“. Dé ahora los MNPT** y oprima al final „=“. En la pantalla aparece R, el radio del paciente, oprima a continuación la tecla „y x “, del valor ISI correspondiente a la combinación protrombina-/aparato usado y oprima „=“. El valor mostrado es el valor INR de la muestra del paciente.

Orden Comentario

TP del paciente Ejemplo: 24

÷

11,0

= y x

1,1

= dividido por

MNPT** radio del paciente(en la pantalla aparece 2,1818) tecla para la función exponencial valor de ISI ejemplo resultado: INR (en la pantalla aparece 2,3588) dar el INR como 2,4

b. Tabla de conversión:

Calcule primero el radio TP, R, dividiendo el TP de los pacientes por el MNTP**. El valor del INR lo encuentra en la Tabla de conversión incluida, en la columna bajo el correspondiente valor de

ISI y en la línea que corresponde al radio TP (R) del paciente.

c. Automático:

Los valores INR pueden ser calculados automáticamente por muchos aparatos de medida de la coagulación. Más información al respecto se encuentra en los manuales de operación de los aparatos. Siemens pone a dispocición protocolos específicos para aparatos de medida de la coagulación.

Valor del fibrinógeno derivado

Usando un test apropiado junto con aparatos foto ópticos de medida de la coagulación de Siemens o aparatos de medida de la coagulación de Sysmex ® , se puede también, con este reactivo, derivar la concentración de fibrinógeno, mediante el análisis de los cambios de la señal óptica durante la determinación del tiempo de tromboplastina. Para esto, se debe usar la curva patrón (Master) para fibrinógeno derivado, tomada de la Tabla de valores del lote, como curva de calibración.

Limitaciones del procedimiento

Al usar el reactivo Dade ® Innovin ® para la determinación de los factores exógenos, se puede presentar para la actividad más baja del factor deficiente tiempos de coagulación mucho más largos que con otros

B4212 G40 E0501 (837) 6 reactivos, ya que en el factor tisular humano recombinante no se encuentra ningún otro factor adicional de la coagulación. Por eso, puede ser que para una actividad baja del factor, el tiempo de coagulación sea de más de 100 segundos.

Siemens ha validado el uso de los reactivos en varios analizadores para optimizar el rendimiento del producto y cumplir con las especificaciones del mismo. Las modificaciones definidas por el usuario no están garantizadas por Siemens dado que pueden afectar al rendimiento del sistema y a los resultados del ensayo. Es responsabilidad del usuario validar las modificaciones realizadas a estas instrucciones o el uso de los reactivos en analizadores distintos a los incluidos en las hojas de aplicaciones de Siemens o en estas instrucciones de uso.

Los resultados de esta prueba deberán interpretarse siempre de acuerdo con la historia clínica del paciente, la sintomatologia clínica y otras observaciones.

Factores alterantes

El tiempo de protrombina puede ser influenciado por un gran número de medicamentos de prescripción frecuente 4 , hecho que se debe tener en cuenta especialmente cuando aparecen valores anormales inesperados. Para valores anormales inesperados, se debe buscar la causa, en caso dado, por medio de otros test de la coagulación.

Debido a la turbidez de las muestras lipémicas la exactitud de la determinación del fibrinógeno derivado puede estar influenciada.

El reactivo Dade ® Innovin ® es insensible a concentraciones de heparina sin fraccionar hasta de 2,0 unidades/ml. El estudio de sensibilidad a la heparina se realizo con un pool de plasma normal amplificado.

La sensibilidad a la heparina se define como la concentración de heparina en la muestra, que conduce a una prolongación más allá del rango de referencia.

Los inhibidores, tales como el anticoagulante lúpico, pueden interferir en el tiempo de protombina y dar lugar, por ejemplo, a INRs que no reflejen el grado exacto de anticoagulación 6 .

Las dosis terapéuticas de hirudina o de otros inhibidores directos de trombina conducen a tiempos de coagulación prolongados 7,8 .

Rangos de referencia

Los valores de personas sanas varían de un laboratorio a otro dependiendo del método utilizado. Cada laboratorio deberá, por lo tanto, determinar su propio rango de referencia basados en la técnica y los instrumentos utilizados.

En un estudio con personas visiblemente sanas (n = 138) se encontró el siguiente rango de referencia

(5. a 95. percentile):

Sistema Sysmex ® CA-7000: central 90 % Rango de referencia: 10,4 - 12,4 segundos.

Fibrinógeno derivado 9 : 1,8 - 3,5 g/l

Rangos terapéuticos

Los rangos terapéuticos para el INR pueden variar dependiendo de la indicación utilizada en una terapéutica con anticoagulantes orales 10 .

Características del test

Precisión

La precisión de los valores de los tiempos de protrombina es, por lo general, dependiente del método utilizado. Con los reactivos de un lote, se deben obtener resultados que sean reproducibles dentro de los límites de control de calidad del laboratorio.

La precisión del reactivo Dade ® Innovin ® en el Sysmex ® CA-6000 se determinó con material de control de calidad, para un total de 6 corridas del test, en 3 días (2 ensayos por día) en determinaciones cuadruples por control. Por ensayo se encontraron los siguientes resultados:

Determinación

Tiempo de Protrombina

Fibrinógeno derivado

Control

1

2

1

2

24

24

24

24 n Valor promedio

12,4 s

33,0 s

2,37 g/l

3,37 g/l

Coeficiente de correlación

Inter assay

1,3 %

0,7 %

4,0 %

4,1 %

Intra assay

2,0 %

3,4 %

2,8 %

3,0 %

Total

2,4 %

3,5 %

4,9 %

5,1 %

Literatura

Ver boletín informativo en inglés.

* No se consigue en USA

** El TP promedio normal o MNPT ( = Mean Normal Pathrombin Time) está definido como el valor promedio del rango normal. Este se debe determinar para cada lote de protrombina usando el método empleado para el análisis de las muestras de pacientes o el aparato de medir la coagulación utilizado para test.

Ci-Trol, Dade y Innovin son marcas comerciales de Siemens Healthcare Diagnostics.

Sysmex es una marca comercial de SYSMEX CORPORATION.

La adquisición de Dade ® Innovin ®

Innovin ® de utilización aquí expuestas.

le otorga al comprador una autorización limitada para utilizar el Dade ®

bajo la Patente EE.UU. N° 5,625,036, 7,084,251 y 7,049,131 de acuerdo con las Instrucciones

Edición Mayo 2008

Dade ® Innovin ®

Campo de aplicação

Para a determinação do tempo de Tromboplastina (TP) e dos testes de plasma humano citratado nele baseados.

Significado diagnóstico

O Reagente Dade ® Innovin ® é um factor de tecido humano purificado e recombinante, produzido em

E.coli, combinado com fosfolípidos sintéticos (Tromboplastina) 1 , cálcio, tampões e estabilizadores. O reagente induz a formação de coágulos através dos pathways exógenos e comuns num teste de Screening global, a determinação do tempo de Tromboplastina (TP) 2 . O Reagente Dade ® Innovin ® é usado em três aplicações:

1. Como teste de Screening rápido para detecção das deficiências individuais ou combinadas dos mecanismos de coagulação extrínsecos, com o qual podem ser detectadas as perturbações de coagulação congénitas ou adquiridas, as doenças hepáticas ou a carência de vitamina K;

2. Como teste sensível para a monitoração das terapias de anticoagulantes orais e

3. Para a determinação dos factores de coagulação exógenos.

Vários coagulómetros foto-ópticos podem proceder, adicionalmente, à derivação do valor de fibrinogénio durante a determinação do tempo de tromboplastina.

® é produzido a partir de factor de tecido humano recombinante e fosfolípidos O Reagente Dade ® Innovin sintéticos, que não contêm qualquer outro tipo de factores de coagulação, tais como a Protrombina, FVII e FX. Por isso, é altamente sensível em relação aos plasmas com deficiência de factores de coagulação e aos plasmas dos pacientes que se encontram sob terapia oral de anticoagulantes. A sensibilidade do

Reagente Dade ®

3

Innovin ® aproxima-se muito da Tromboplastina de referência da WHO, proveniente do

. Acresce que o Reagente Dade ® Innovin ® é insensível às concentrações de heparina cérebro humano terapêuticas. Graças à sua elevada sensibilidade em relação aos factores de coagulação e à insensibilidade em relação à heparina no campo terapêutico, o Reagente Dade indicado para a monitoração das terapias orais de anticoagulantes 3

® Innovin ® está especialmente

. Graças à elevada sensibilidade (ou seja, a reacção do reagente a uma actividade dos factores de coagulação moderadamente reduzida), é mesmo possível detectar amostras de plasma com um reduzido grau patológico.

Princípio metodológico

A reacção de coagulação é desencadeada pela incubação do plasma com a quantidade optimizada de

Tromboplastina e cálcio; o tempo que vai até à formação do coágulo de fibrina é medido.

Reagentes

Conteúdos da embalagens comerciais

10 x l 4 ml, [REF] B4212-40

10 x l 10 ml, [REF] B4212-50

12 x l 20 ml, [REF] B4212-100

Composição

Reagente Dade ® Innovin

(albumina de soro bovino).

® : Liofilizado de factor de tecido humano recombinante e fosfolípidos sintéticos (Tromboplastina), iões de cálcio, composto neutralizador de heparina, tampões e estabilizadores

Advertências e medidas de precaução

Só para uso diagnóstico in-vitro.

Preparação dos reagentes

Diluir um frasquinho de liofilizado de Reagente Dade acordo com a indicação de quantidade do rótulo do frasco. Conservar entre +2 e +8 °C.

Para a diluição total do conteúdo do frasco, misturar bem imediatamente após a adição da água. Se se deixar o frasquinho em repouso, o Reagente Dade ®

® Innovin

Innovin ®

® com água destilada ou desionizada, de

deverá ser misturado de novo antes da utilização, para se obter um solução homogénea. Não é necessário misturar continuadamente.

Nota: Não utilizar água com conservantes.

Estabilidade e condições de conservação

Conservar entre +2 e +8 °C. Não aberto, o reagente mantém-se estável a esta temperatura até à data de validade (vide o rótulo do frasco).

Estabilidade após reconstituição: 10 dias

5 dias entre +2 e +8 °C (frasco fechado) entre +15 e +25 °C (frasco fechado)

24 horas a +37 °C (frasco fechado)

As indicações sobre a estabilidade no aparelho estão mencionadas nos livros de referência (instruções de aplicação) para os diferentes coagulómetros.

Não congelar!

Indício de caducidade: Falta de vácuo ao abrir o frasquinho; só se consegue dissolver o reagente com dificuldade; impossível atingir os valores reprodutíveis.

Outros materiais necessários

Plasma de controlo N ou Dade

Plasma de controlo P ou Dade

®

®

Ci-Trol

Ci-Trol

®

®

Level 1

Level 2 ou Dade ® Ci-Trol ® Level 3

PT-Multi Calibrator* (Consulte as instruções para obter mais informações sobre a utilização.)

Plasma humano standard ou plasma normal fresco 4 para a determinação do MNPT**

Solução de citrato de sódio (0,11 mol/l ou 0,13 mol/l, respectivamente a 3,2 % ou 3,8 %) para a colheita de sangue

Água destilada ou desionizada sem conservantes

Tubinhos de plástico

Pipetas de plástico para a transferência de amostras

Pipetas para a medição exacta de 20,0 ml, 10,0 ml, 1,0 ml, 0,50 ml, 0,20 ml e 0,10 ml

Coagulómetro

Equipamento

O reagente Dade ® Innovin ® pode ser usado manualmente ou em coagulómetros automáticos. A Siemens

Healthcare Diagnostics disponibiliza livros de referência (instruções de aplicação) para os diversos coagulómetros. Estes contêm informações específicas dos aparelhos/testes sobre o processamento e características de performance que podem divergir das informações deste manual de instruções. Neste caso, as informações dos livros de referência substituem as informações constantes neste manual de instruções. Por favor observe o manual de instruções do fabricante do aparelho!

Colheita e preparação de amostras

Misturar nove partes de sangue do doente de uma colheita fresca com uma parte de solução de citrato de sódio 0,11 ou 0,13 mol/l (3,2 % ou 3,8 % respectivamente). Poderá utilizar-se um sistema de tubo de vácuo ou seringa.

Centrifugar a amostra de sangue a 1500 x g durante nunca menos de 15 minutos, à temperatura ambiente.

Conservar num tubo não aberto à temperatura ambiente. Não conservar em gelo nem a +2 - +8 °C porque a activação por frio de F VII pode alterar os resultados. O plasma deve ser testado nas 24 horas seguintes à colheita de sangue. As amostras não devem ficar a uma temperatura de +37 °C durante mais de 5 minutos. Se o doente estiver a fazer uma terapêutica com anticoagulantes baseados em heparina e cumarina, os resultados podem variar com o tempo de conservação.

Consulte o documento CLSI H21-A5 5 das amostras.

para obter mais informações sobre a preparação e conservação

Execução do teste

Execução manual:

Aquecer, previamente, o reagente Dade ® Innovin ® a +37 °C.

Pipetar para os tubinhos de plástico da seguinte maneira:

Plasma

Controlo

Amostra de ensaio

0,1 ml

-

Controlo

-

0,1 ml

Incubar as amostras no tubinho durante 1 a 2 minutos

(5 minutos no máximo) à temperatura de +37 °C .

Adicionar, rapidamente, o reagente Dade ® pré-aquecido

Innovin ® 0,2 ml 0,2 ml

Ao adicionar o reagente Dade ® até à formação do coágulo.

Innovin ® , pôr o cronómetro em marcha para medir o tempo que decorre

Controlo de qualidade interno

Intervalo normal:

Intervalo patológico:

Dade

Dade

®

®

Ci-Trol

Ci-Trol

®

®

Level 1 ou Plasma de Controlo N

Level 2, Dade ® Ci-Trol ® Level 3 ou Plasma de Controlo P

A cada mudança dos frascos de reagente, no início da execução do teste, após cada calibração e no mínimo de 8 em 8 horas em cada dia de teste, deverão ser medidos dois controlos (um no intervalo normal e um no intervalo patológico). O material de controlo deverá ser tratado como as amostras a analisar.

Cada laboratório deverá determinar o seu intervalo de confiança próprio para os controlos. Para cada lote de reagente ou controlo novos, deverão ser definidos intervalos de controlo novos. Normalmente, estes apresentam desvios standard (ds) de ± 2,5 em relação ao valor de controlo médio.

Se os valores de controlo se situarem fora do intervalo de confiança, é necessário controlar o coagulómetro, os controlos e os reagentes. Não comunique os resultados do doente até que a causa do desvio tenha sido identificada e corrigida.

Avaliação dos resultados

Actualmente, utilizam-se vários métodos para a apresentação dos valores do tempo de TP. Para o

Reagente Dade ® Innovin ® existe um valor “International Sensitivity Índex” (ISI), específico para o lote e o aparelho, que possibilita a indicação dos valores de pacientes sob a forma de um “International Normalized Ratio” (INR) 4 .O cálculo e a aplicação do INR estão descritos mais abaixo. A indicação do INR é utilizada, preferencialmente, para documentar os resultados das amostras de pacientes anticoagulados por via oral. Alternativamente, para a determinação do resultado, o tempo de TP de pacientes (em segundos) pode ser usado em conjunto com o intervalo de referência (em segundos).

Exemplo: Resultado do paciente 18 segundos; intervalo de referência 9,7 - 12,3 segundos.

Determinação do INR (International Normalized Ratio)

Valores para o Reagente Dade ® Innovin ®

Estandardização internacional do tempo de TP (tempo de Tromboplastina) para monitoração das terapias orais de anticoagulantes.

1. Em conformidade com as recomendações conjuntas da World Health Organization (WHO) 4 e do

International Committee on Thrombosis and Haemostasis, os valores do tempo de TP de pacientes que se encontrem sob terapia oral de anticoagulantes deverão ser indicados como valores de INR.

Os valores de INR são independentes dos reagentes e métodos usados e estão previstos, especialmente, para o diagnóstico de pacientes estabilizados com uma terapia oral de anticoagulantes a longo prazo.

O INR é determinado de acordo com a seguinte equação 4 :

INR = R ISI , sendo que R = ——————————————

MNPT**

ISI é o International Sensitivity Index da combinação de reagentes/aparelhos.

B4212 G40 E0501 (837) 7

Os valores ISI para os reagentes de Tromboplastina da Siemens são determinados de acordo com as recomendações da WHO.

2. Métodos para o cálculo do INR:

a. Calculadora com função exponencial:

Estas indicações aplicam-se, especialmente, à calculadora TI-55 II da Texas Instruments. Nas outras calculadoras tais como os modelos da Hewlett-Packard, a sequência da introdução pode divergir. As instruções de serviço da calculadora contêm informações. Verifique os exemplos de cálculo através da tabela de conversão para detectar os erros de conversão.

Introduza o tempo de TP do paciente em segundos e prima ”÷”. Introduza agora o MNPT** e prima de seguida ”=”. No visor aparece R, o ratio do paciente. Prima agora a tecla „y tado apresentado é o valor INR da amostra do paciente.

Introdução de dados x “, introduza o valor específico ISI da combinação utilizada de Tromboplastina/Aparelhos e prima ”=”. O resul-

Exemplo: 24

÷

11,0

= x Tecla y

1,1

=

b. Tabela de conversão:

Explicação tempo de TP dividido por

MNPT** ratio do paciente (no visor aparece 2,1818) para a função exponencial

Exemplo de valor ISI resultado: INR (no visor aparece 2,3588) emitido como INR 2,4

Primeiro calcule o ratio R do tempo de TP, dividindo o tempo de TP pelo tempo MNPT**. O valor de INR encontra-se na coluna da tabela de conversão por baixo do respectivo valor de ISI e na linha que corresponde ao ratio (R) do tempo de TP do paciente.

c. Automática:

Os valores de INR podem ser calculados automaticamente por diversos coagulómetros. As informações a este respeito encontram-se no manual de instruções do aparelho. A pedido, a Siemens disponibiliza protocolos específicos para os coagulómetros.

Valor de fibrinogénio derivado

Se for utilizado um teste adequado juntamente com coagulómetros com medição foto-óptica da Siemens e coagulómetros Sysmex ® , com este reagente também se pode proceder à derivação da concentração de fibrinogénio através da análise da alteração do sinal óptico durante a determinação do tempo de

Tromboplastina. Para esse efeito, a curva mestra para o fibrinogénio derivado da tabela de valores em função dos lotes, tem de ser introduzida como curva de calibração.

Limitações à execução do teste

Ao utilizar o Reagente Dade ® Innovin ® na determinação dos factores exógenos da actividade ínfima do factor de deficiência, podem produzir-se tempos de coagulação superiores aos dos outros reagentes, uma vez que o factor de tecido humano recombinante não contém quaisquer outros factores de coagulação. Assim, o tempo de coagulação para uma actividade de factor baixa pode ser superior a 100 segundos.

A Siemens validou a utilização destes reagentes em vários analisadores, com o intuito de optimizar o desempenho do produto e satisfazer as especificações do produto. As modificações definidas pelo utilizador não são suportadas pela Siemens, na medida em que podem afectar o desempenho do sistema e os resultados do ensaio. Constitui responsabilidade do utilizador validar as modificações efectuadas nestas instruções ou em relação ao uso dos reagentes noutros analisadores que não os incluídos nas folhas de instruções de aplicação da Siemens ou nestas instruções de utilização.

Os resultados deste teste devem sempre ser interpretados em conjunto com o histórico médico do doente, estado clínico e outros dados de interesse.

Factores de interferência

O tempo de Tromboplastina pode ser influenciado por uma multiplicidade de medicamentos prescritos frequentemente 4 , circunstância essa que deverá ser tomada em consideração, sobretudo quando se obtêm valores anormais inesperados. No caso de obtenção de valores anormais inesperados, é necessário procurar a causa, realizando outros testes de coagulação.

Devido à turvação das amostras lipémicas, p. ex., em caso de alimentação artificial, a exactidão da determinação do fibrinogénio derivado pode ser afectada.

O reagente Dade ® Innovin ® é insensível às concentrações de heparina não fraccionadas até 2,0 unidades/ml. O estudo da sensibilidade à heparina foi executado com um pool de plasma normal incrementado. A sensibilidade à heparina é definida pela concentração da mesma na amostra que ultrapassa o prolongamento do intervalo de referência.

Inibidores como, por exemplo, anticoagulante lúpico podem interferir com o tempo de protrombina e o resultado, por exemplo, em INRs que não reflecte o grau exacto de anticoagulação 6 .

As doses terapêuticas de hirudina ou outros inibidores directos da Trombina originam tempos de coagulação prolongados 7,8 .

Intervalos de referência

Os valores de indivíduos saudáveis variam de laboratório para laboratório em função do método usado.

Por isso, cada laboratório deverá determinar intervalos de referência próprios, com base no processo e no coagulómetro usados.

Num estudo com pessoas saudáveis (n = 138), foi determinado o seguinte intervalo de referência

(5.- 95. percentil):

Sistema Sysmex ® CA-7000: Central 90 % intervalo de referência: 10,4 - 12,4 segundos.

Fibrinogénio derivado 9 : 1,8 - 3,5 g/l

Intervalos terapêuticos

Os intervalos terapêuticos para o INR podem variar em função da respectiva indicação para uma terapia oral de anticoagulantes 10 .

Características de performance do teste

Precisão

Geralmente, a precisão dos valores do tempo de Tromboplastina depende do método usado. Com os reagentes de um lote podem ser obtidos resultados reproduzíveis dentro dos limites do controlo de qualidade do laboratório.

A precisão do Reagente Dade ® Innovin ® no sistema Sysmex ® CA-6000 foi determinada com material de controlo de qualidade num total de 6 séries de ensaio realizadas durante 3 dias (2 testes por dia) e determinações quádruplas por controlo. Foram obtidos os seguintes resultados por teste:

Determinação

Tempo de tromboplastina

Fibrinogénio derivado

Controlo

1

2

1

2 n

24

24

24

24

Valor médio

12,4 s

33,0 s

2,37 g/l

3,37 g/l

Coeficiente de variação

Inter-Assay Intra-Assay

1,3 %

0,7 %

4,0 %

4,1 %

2,0 %

3,4 %

2,8 %

3,0 %

Total

2,4 %

3,5 %

4,9 %

5,1 %

Bibliografia

Veja o manual de instruções em inglês.

* não está disponível nos EUA

** O tempo médio normal de TP ou MNPT (= Mean Normal Pathrombin Time) é definido como o valor médio do intervalo normal. Tem de ser determinado, especialmente, para cada lote de Tromboplastina com o método usado para a análise das amostras do paciente ou o coagulómetro utilizado para esse fim.

Ci-Trol, Dade e Innovin são marcas comerciais da Siemens Healthcare Diagnostics.

Sysmex é uma marca comercial da SYSMEX CORPORATION.

A compra de Dade ® Innovin ® confere ao comprador uma licença limitada para utilizar a Dade ® Innovin ® adquirida, abrangida pelas patentes norte-americanas n.ºs 5,625,036, 7,084,251 e 7,049,131 de acordo com as instruções aqui apresentadas

Edição Maia 2008

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