Caractéristiques techniques et mode d’emploi
Vivaspin 500 µl et 2 ml
À usage in vitro uniquement
85032-539-17
85032-539-17
Vivaspin 500 µl et 2 ml – Introduction
Conditions de stockage|Durée de vie
Les colonnes à centrifuger d’ultrafiltration
Vivaspin doivent être stockées à température ambiante. Les appareils doivent être utilisés avant la date d’expiration figurant sur l’emballage.
Introduction
Les concentrateurs Vivaspin sont des dispo sitifs d’ultrafiltration jetables destinés à la concentration des échantillons biologiques.
Le Vivaspin 500 convient aux volumes d’échantillons de 100 à 500 µl et le Vivaspin
2 aux volumes d’échantillons de 2 ml maximum. Le Vivaspin 2 s’utilise sur des rotors mobiles ou à angle fixe pouvant accueillir des tubes centrifugeurs de 15 ml.
La membrane verticale et la chambre de
filtration à canal étroit brevetés (US 5 647
990) minimisent le colmatage de la mem brane et permettent des vitesses de centrifu gations élevées, même avec des solutions très chargées en particules.
Le Vivaspin 500 s’utilise sur des rotors à angle fixe pouvant accueillir des tubes
centrifugeurs de 2,2 ml.
Vivaspin 2
Le système Vivaspin 2 a été spécialement conçu avec une surface interne et une sur face de membrane faibles afin de permettre une récupération maximale de solutions très diluées.
Une autre caractéristique du Vivaspin 2 est qu’il est possible de récupérer le concentré soit par pipettage direct dans la chambre de rétention de sécurité placée au fond du dis positif soit dans le bouchon de récupération après centrifugation inverse. Le bouchon peut également être fermé pour stockage de l’échantillon.
Différentes membranes
Outre la disponibilité d’une membrane en polyéthersulfone (PES) permettant un flux important et recommandé pour la plupart des solutions, le Vivaspin 2 peut être proposé avec une membrane en triacétate de
cellulose (CTA) et Hydrosart
®
.
La membrane en CTA est particulièrement recommandée lorsqu’un taux de récupéra tion important dans le filtrat est nécessaire.
La membrane Hydrosart
®
est une membrane
à base de cellulose stabilisée qui a été optimisée pour l’industrie biotechnologique.
La membrane Hydrosart
®
est un polymère stable qui supporte une vaste plage de pH.
L’Hydrosart
®
est également extrêmement hydrophile, empêchant ainsi la fixation des protéines, ce qui la rend pratiquement non colmatante et permet un flux important.
Hydrosart
®
est disponible avec un seuil de coupure de 5, 10 et 30 kilo Dalton (kDa).
Le comportement de la membrane est forte ment dépendant des caractéristiques de la solution à traiter. Sartorius Stedim Biotech recommande aux utilisateurs de tester diffé rentes membranes afin d’optimiser les per formances du dispositif et de son utilisation.
Équipement nécessaire
1. Centrifugeuse avec rotor mobile ou à angle fixe (minimum 25°).
Dispositif
Vivaspin 500
Vivaspin 2
Support requis
2,2 ml/11 mm d
15 ml/17 mm d
2. Des pipettes Pasteur pour le dépôt et le retrait de l’échantillon. Pour une récupéra tion maximale, des embouts fins pour
chargement des gels sont recommandés.
2 |
Fonctionnement
1. Sélectionnez la membrane la plus adé quate pour votre échantillon. Pour une récu pération maximale, sélectionnez une cou pure de membrane inférieure d’au moins 50
% à la taille moléculaire de l’espère donnée.
2. Remplissez le concentrateur jusqu’aux volumes maximum indiqués dans le tableau
1. (Vérifiez que le bouchon à vis est bien fermé.)
3. Insérez l’ensemble du concentrateur dans la centrifugeuse (en cas d’utilisation de rotors à angle fixe, la face imprimée doit
être orientée vers le haut | l’extérieur).
4. Effectuez la centrifugation aux vitesses recommandées dans le tableau 2, en prenant soin de ne pas dépasser la force g maximale variable selon le type de membrane et la coupure de la membrane.
5. Dès que la concentration souhaitée est atteinte (voir les tableaux 3a et 3b pour connaître les durées de centrifugation), retirez l’ensemble et récupérez l’échantillon au fond de la poche de concentrés à l’aide d’une pipette. Le tube à filtrat peut être fermé à des fins de stockage.
Retrait du corps Vivaspin 2 du tube de
filtrat
Le fourreau (vu depuis l’extrémité) est ovale dans la coupe transversale. Le tube est arrondi dans la coupe transversale pour un meilleur ajustement. Pour retirer le tube du fourreau, vous devez le pincer pour qu’il prenne une forme ovale avant de l’enlever par un mouvement de rotation.
Appuyer ici
Appuyer ici
Tube Fourreau
| 3
Centrifugation inversée avec Vivaspin 2
Selon la préférence de l’utilisateur ou le besoin de stockage de l’échantillon, le concentré peut être récupéré par centrifuga tion inverse dans le bouchon de récupération
(lorsque un rotor à angle fixe est utilisé, la face imprimée du dispositif doit être orientée vers le haut|l’extérieur). Dans cette procé dure, le tube de filtrat doit être enlevé, le bouchon de récupération inséré dans le tube du filtrat puis le concentrateur retourné. Le système complet doit être centrifugé jusqu’à
3 000 g pendant 2 minutes. Le bouchon de récupération contenant le concentré peut être fermé à des fins de stockage.
Dessalage|Changement de tampon
1. Concentrez l’échantillon jusqu’au niveau souhaité.
2. Videz le réservoir de filtrat.
3. Remplissez à nouveau le concentrateur
à l’aide d’un solvant adéquat.
4. Concentrez à nouveau l’échantillon et répétez le processus jusqu’à ce que la réduc tion de la concentration de microsolutés contaminants soit suffisante. Habituelle ment, trois cycles de lavage vont permettre de réduire de 99 % la teneur en sels initiale.
Centrifugation inversée avec
Vivaspin 2
Position avec la face imprimée vers le haut|l’extérieur
Corps du concentrateur
Bouchon de récupération du concentré
Tube de filtrat
Filtrat
Concentré
Le tube à filtrat peut être fermé
à des fins de stockage.
Équipement nécessaire
Centrifugeuse
Type de rotor
Angle minimal du rotor
Cavité du rotor
Récupération du concentré
Type de pipette
Recommandation
Vivaspin 500 Vivaspin 2
À angle fixe
40°
Mobile ou à angle fixe
25°
Pour des tubes inférieurs Pour des tubes inférieurs coniques de 2,2 ml (11 mm) coniques de 15 ml (17 mm)
À volume fixe ou variable À volume fixe ou variable
Embout fin pour chargement des gels
Embout fin pour chargement des gels
4 |
Caractéristiques techniques
Tableau 1 : Caractéristiques techniques
Vivaspin 500
Capacité du concentrateur
Rotor mobile
Rotor à angle fixe
Ne pas utiliser
500 µl
Dimensions
Longueur totale
Largeur
Zonre active de la membrane
50 mm
11 mm
0,5 cm 2
<5 µl Volume mort, membrane et support
Volume à butée fixe* :
Matériaux de construction
Corps
Cuve de filtrat
Capuchon du concentrateur
Membrane
5 µl
Polycarbonate
Polypropylène
Polycarbonate
Polyéthersulfone
Vivaspin 2
3 ml
2 ml
126 mm
17 mm
1,2 cm 2
<10 µl
8 µl
Polycarbonate
Polycarbonate
Polycarbonate
PES, CTA, HY
Tableau 2 : Vitesse de centrifugation recommandée (xg)
Dispositif Vivaspin 500
Membrane
3–50 000 PES
À angle fixe
15 000
>100 000 PES
5–20 000 CTA
Hydrosart ®
15 000
–
–
Vivaspin 2
À angle fixe Mobile
12 000
9 000
4 000
4 000
8 000
8 000
4 000
4 000
* Volume à butée fixe comme dessiné dans l’outil de fraisage. Ce volume peut varier selon l’échantillon, la concentration de l’échantillon, la température de fonctionnement et le rotor de la centrifugeuse.
| 5
Conseils d’utilisation
1. Débit
La vitesse de filtration varie selon plusieurs paramètres, tels que la coupure de mem brane, la porosité, la concentration de l’échantillon, la viscosité, la force centrifuge et la température. Il faut s’attendre à des durées de rotation beaucoup plus longues pour des solutions initiales de plus de 5 % de solides. À une température de fonctionne ment de 4°C, les débits sont environ
1,5 fois plus lents qu’à 25°C. Les solutions visqueuses, comme la glycérine à 50 %, prendront jusqu’à 5 fois plus de temps pour se concentrer que les échantillons dans des solutions tampons.
2. Rinçage préalable
Les membranes fixées sur les concentrateurs
Vivaspin contiennent des traces de glycérine et d’acide de sodium. Si ces dernièrent affec tent l’analyse, elles peuvent être éliminées par rinçage en remplissant le dispositif concentrateur avec une solution tampon ou de l’eau désionisée et en la faisant traverser par la membrane par centrifugation. Elimi nez alors filtrat et concentré avant de traiter l’échantillon. Si vous ne souhaitez pas utili ser immédiatement le dispositif prérincé, conservezle au réfrigérateur, la surface de la membrane recouverte de tampon ou d’eau.
Ne laissez PAS la membrane sécher.
3. Stérilisation des membranes en
polyéthersulfone
Les dispositifs Vavispin ne doivent pas être autoclavés car les hautes températures vont augmenter fortement les seuils de coupure des membranes. Pour les stériliser, utilisez une solution d’éthanol à 70 % ou un mélange gazeux stérilisant.
4. Compatibilité chimique
Les concentrateurs Vivaspin sont destinés à
être utilisés avec des fluides biologiques et des solutions aqueuses. Pour obtenir plus d’informations sur la compatibilité chimique, reportezvous au tableau 4.
6 |
Performances
Tableau 3a : Performances Vivaspin 500
Volume initial
Aprotinine 0,25 mg/ml (6 500 MW)
3 000 coupures de membrane PES
BSA 1 mg/ml (66 000 MW)
5 000 coupures de membrane PES
10 000 coupures de membrane PES
30 000 coupures de membrane PES
IgG 0,25 mg/ml (160 000 MW)
30 000 coupures de membrane PES
50 000 coupures de membrane PES
100 000 coupures de membrane PES
15
5
5
10
10
10
Temps [min.] pour concentrer jusqu’à
30x à 20°C
500 µl
30
96 %
96 %
95 %
96 %
96 %
96 %
Concentré récupéré en %
500 µl
96 %
| 7
Tableau 3b : Performances Vivaspin 2
Volume initial
Temps [min.] pour concentrer jusqu’à
30x à 20°C
2 ml
Chaôine d’insuline A 0,1 mg/ml (2 535 MW)
2 000 coupures de membrane Hydrosart ® 35
Aprotinine 0,25 mg/ml (6 500 MW)
3 000 coupures de membrane PES
BSA 1 mg/ml (66 000 MW)
5 000 coupures de membrane PES
50
12
5 000 coupures de membrane CTA 50
5 000 coupures de membrane Hydrosart
®
22
10 000 coupures de membrane PES
10 000 coupures de membrane CTA
8
10
10 000 coupures de membrane Hydrosart
®
12
20 000 coupures de membrane CTA
30 000 coupures de membrane PES
5
8
30 000 coupures de membrane Hydrosart ® 5
IgG 0,25 mg/ml (160 000 MW)
20 000 coupures de membrane CTA
30 000 coupures de membrane PES
50 000 coupures de membrane PES
100 000 coupures de membrane PES
6
10
10
8
Concentré récupéré en %
2 ml
95 %
96 %
98 %
96 %
98 %
98 %
96 %
98 %
96 %
97 %
97 %
97 %
96 %
96 %
95 %
8 |
Compatibilité chimique
Tableau 4 : Compatibilité chimique (temps de contact de 2 heures)
Solutions PES CTA
Plage de pH compatible pH 1–9 pH 4–8
Acide acétique (25 %)
Acétone (10 %)
OK
NO
NO
NO
Acétonitrile (10 %)
Hydroxyde d’ammonium (5 %)
Hydroxyde d’ammonium (saturé)
Benzène (100 %)
NO
?
OK
NO
NO
OK
?
NO nButanol (70 %)
Chloroforme (1 %)
Diméthylformamide (10 %)
Diméthylsulfoxide (5 %)
Éthanol (70 %)
Acétate d’éthyle (100 %)
Formaldéhyde (30 %)
Acide formique (5 %)
?
NO
?
OK
OK
NO
OK
OK
NO
NO
NO
NO
OK
NO
OK
?
Glycérine (70 %)
Guanidine HCI (6 M)
Hydrocarbures, aromatiques
Hydrocarbures, chlorés
Acide chlorhydrique (1,0 M)
Imidazole (300 mM)
Alcool d’isopropyle (70 %)
Acide lactique (5 %)
Mercaptoéthanol (1,0 M)
Méthanol (60 %)
Acide nitrique (10 %)
OK
OK
NO
NO
OK
OK
OK
OK
NO
?
OK
NO
NO
OK
NO
OK
?
NO
NO
NO
?
NO
OK
?
OK
OK
OK
OK
NO
NO
OK
OK
NO
OK
NO
OK
OK
?
NO
NO
NO
NO
OK
?
NO
HY pH 1–9
OK
NO
| 9
Solutions
Plage de pH compatible
Phénol (1 %)
Tampon de phosphates (1 M)
Glycol polyéthylénique (10 %)
Pyridine (100 %)
Carbonate de sodium (20 %)
Désoxycholate de sodium (5 %)
Dodécylsulfate de sodium (0,1 M)
Hydroxyde de sodium (2,5 M)
Hypochlorite de sodium (200 ppm)
Nitrate de sodium (1,0 %)
Acide sulfamique (5 %)
Tétrahydrofuranne (5 %)
Toluène (1 %)
Acide trifluoroacétique (10 %)
Tween 20 (0,1 %)
Triton X100 (0,1 %)
Urée (8 M)
OK = Acceptable ? = À tester NO = Non recommandé
OK
NO
NO
OK
OK
NO
OK
OK
OK
NO
OK
OK
PES pH 1–9
?
OK
OK
OK
OK
NO
NO
NO
NO
OK
NO
NO
?
?
NO
NO
?
CTA pH 4–8
?
OK
OK
OK
?
OK
OK
OK
?
NO
NO
OK
OK
NO
NO
OK
?
?
?
NO
HY pH 1–9
NO
OK
10 |
Informations de commande
Conseils pour la prise de commande
– Choisissez une membrane avec une porosité au moins 50 % inférieure à celle de la molécule à retenir dans le concentré.
– Choisissez une membrane en polyéther sulfone (PES) pour une concentration plus rapide.
– Choisissez une membrane en triacétate de cellulose (TCA) pour l’élimination de protéines ou la récupération du filtrat.
– Choisissez une membrane Hydrosart d’immunoglobulines (Ig).
®
pour une récupération maximale de fractions
Vivaspin 500 Polyéthersulfone
3 000 coupures de membrane
3 000 coupures de membrane
5 000 MWCO
5 000 MWCO
10 000 MWCO
10 000 MWCO
30 000 MWCO
30 000 MWCO
50 000 MWCO
50 000 MWCO
100 000 MWCO
100 000 MWCO
300 000 MWCO
300 000 MWCO
1 000 000 MWCO
1 000 000 MWCO
0,2 µm
0,2 µm
Pack starter (5 de chaque 5 K, 10 K, 30 K, 50 K, 100 K)
100
25
100
25
100
25
100
25
Conditionnement Réf.
25 VS0191
100
25
VS0192
VS0111
100
25
100
25
VS0112
VS0101
VS0102
VS0121
100
25
100
25
VS0162
VS0171
VS0172
VS01S1
VS0122
VS0131
VS0132
VS0141
VS0142
VS0151
VS0152
VS0161
| 11
Vivaspin 2 Polyéthersulfone
3 000 coupures de membrane
3 000 coupures de membrane
5 000 MWCO
5 000 MWCO
10 000 MWCO
10 000 MWCO
30 000 MWCO
30 000 MWCO
50 000 MWCO
50 000 MWCO
100 000 MWCO
100 000 MWCO
300 000 MWCO
300 000 MWCO
1 000 000 MWCO
1 000 000 MWCO
0,2 µm
100
25
0,2 µm 100
Pack starter (5 de chaque 5 K, 10 K, 30 K, 50 K, 100 K) 25
100
25
100
25
100
25
100
25
Conditionnement Réf.
25 VS0291
100
25
VS0292
VS0211
100
25
100
25
VS0212
VS0201
VS0202
VS0221
VS0262
VS0271
VS0272
VS02S1
VS0222
VS0231
VS0232
VS0241
VS0242
VS0251
VS0252
VS0261
12 |
Vivaspin 2 Triacétate de cellulose
5 000 coupures de membrane
5 000 coupures de membrane
10 000 coupures de membrane
10 000 coupures de membrane
20 000 coupures de membrane
20 000 coupures de membrane
Vivaspin 2 Hydrosart ®
2 000 coupures de membrane
2 000 coupures de membrane
5 000 coupures de membrane
5 000 coupures de membrane
10 000 coupures de membrane
10 000 coupures de membrane
30 000 coupures de membrane
30 000 coupures de membrane
Conditionnement Réf.
25 VS02U1
100
25
VS02U2
VS02V1
100
25
100
VS02V2
VS02X1
VS02X2
Conditionnement Réf.
25 VS02H91
100
25
100
25
VS02H92
VS02H11
VS02H12
VS02H01
100
25
100
VS02H02
VS02H21
VS02H22
| 13
Sartorius Stedim Biotech GmbH
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Biotech GmbH se réserve le droit de modifier sans préavis les technologies, fonctions, caractéristiques techniques et l’aspect du matériel.
Date : janvier 2014,
Sartorius Stedim Biotech GmbH,
Goettingen, Allemagne
Imprimé en Allemagne sur papier blanchi sans chlore. | W
N° de publication : SLU6093f140104
Ver. 01 | 2014