PimaTM CD4 Cartridge - Manuel d`utilisation Xn

PimaTM CD4 Cartridge - Manuel d`utilisation Xn
Prélèvement d’échantillon
505
7,05
Mises en garde
2
Matériel supplémentaire requis
9,54
PI-PIMA-01-03-F
Cartridge Guide
0,996
1,01
0,997
5
9 – 391
0,98
0,997
Date de révision: 14-Dec-2011
8
Alere Technologies GmbH Löbstedter Str. 103–105 D-07749 Jena Allemagne www.pimatest.com
Europe: +44 161 483 9032
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Afrique: +27 21 5315 999
Asie Pacifique: +61 7 3363 7166
Amérique latine: +57 2 6618916, +57 2 6618797
la.techsupport@alere.com
Indes: +91 11 45089400
AlereTM et PimaTM sont des marques déposées des
sociétés du groupe Alere.
© 2010 Alere. Tous droits réservés.
Pour l’assistance technique, contacter le distributeur local ou appeler l’un des numéros indiqués ci-après:
Avertissement: les cartouches Pima CD4 renferment
de petites quantités de préparations à base de cellules
sanguines humaines. Ces préparations cellulaires
ont été testées comme non-réactives aux anticorps
suivants : Anti-HCV, Anti-HIV1 et 2, HBsAg, Anti-HBc
(IgG, IgM), Syphilis, AK irrégulier, HCV- et HIV-PCR.
Un risque d’infection résiduel minime subsiste.
Indication
267
1,02
4 – 402
Le Pima CD4 est un test automatisé d’analyse
sanguine des défenses immunitaires par
imagerie destiné à la mesure quantitative in
vitro rapide des lymphocytes T CD3+/CD4+
(lymphocytes T-auxiliaires) dans le sang total
veineux ou capillaire. Le Pima CD4 détermine le
comptage absolu de cellules CD3+/CD4+ et est
conçu afin de surveiller en continu le comptage
absolu des lymphocytes CD4 chez les patients
atteints d’une immunodéficience.
Le Pima CD4 test est conçu pour un usage
diagnostique in vitro.
7
Linéarité
La linéarité a été évaluée en testant les dilutions
progressives de 5 échantillons couvrant la
plage clinique représentative des cellules
T-auxiliaires dans le sang total. La méthode
Réactivité croisée
L’anticorps CD4 réagit avec les monocytes
ainsi qu’avec les lymphocytes T auxiliaires/
inducteurs.5,6 L’anticorps CD3 réagit avec tous
les lymphocytes T matures. 7,8
1
Échantillon Moyenne (cellules/µl) % CV moyen
Reproductibilité lot à lot
10 aliquotes de 2 échantillons de sang total en
dessous et au-dessus du seuil de
350 cellules/µL ont été évaluées à l’aide de 3
lots de Pima CD4 cartridge différents.
La reproductibilité lot à lot est illustrée dans le
tableau suivant:
4 – 690
4
Introduction
 
3
La concentration en lymphocytes T-auxiliaires
est un indicateur de l’immunité du patient et on
sait que le comptage absolu de lymphocytes
T-auxiliaires décroît chez les patients
immunodéficients. L’évolution des nombres
absolus de lymphocytes T-auxiliaires est un
élément essentiel pour déterminer l’état initial
des défenses immunitaires, comme pour suivre
le cours de l’immunodéficience et contrôler la
réponse au traitement.1,2
7.0
 
0,995
Principe du test
47
0.508
1,000
0,99
lumière sur deux longueurs d’onde différentes
(colorant 1 et colorant 2). L’un des anticorps
est un anticorps monoclonal CD3 anti-humain
conjugué au colorant 1. Le deuxième anticorps
est un anticorps monoclonal CD4 anti-humain
conjugué au colorant 2. Après un temps
d’incubation donné, l’échantillon coloré est
transféré dans le canal de détection de la
cartouche. Le Pima Analyser est doté d’une fibre
optique à fluorescence multicolore miniaturisée.
Les signaux de fluorescence sont détectés par
une caméra intégrée et analysés au moyen des
algorithmes du logiciel propriétaire embarqué
sur l’ordinateur incorporé. Les lymphocytes T
auxiliaires présentent à la fois des antigènes de
surface CD3 et CD4 et émettent donc un signal
lumineux aux longueurs d’ondes spécifiques
aux deux conjugués anticorps-colorant.
Ce procédé permet de différencier
spécifiquement les lymphocytes T auxiliaires
des autres types de cellules sanguines qui ne
présentent qu’un seul des deux antigènes de
surface. Le Pima Analyser affiche les résultats
en cellules/µL. Les résultats sont également
stockés dans une archive intégrée et sont
assignés à un numéro d’échantillon (saisi par
l’opérateur dans le Pima Analyser), avec la
date/l’heure de réalisation du test. L’opérateur
peut récupérer et télécharger les données à tout
moment après le test. Une imprimante externe
Pima Printer peut être branchée sur le port USB
du Pima Analyser pour imprimer les résultats
du test.
35
Prélèvement par ponction veineuse de
sang total4
1.Effectuer un prélèvement aseptique
par ponction veineuse dans un tube de
prélèvement sanguin EDTA
(acide éthylènediaminetétracétique) stérile.
2.Retourner le tube de prélèvement
8 à 10 fois.
3.Stocker à température ambiante (18–28°C).
L’échantillon doit être analysé dans les
Contrôle qualité et
acceptabilité des résultats
Fonctions intégrées de contrôle qualité
La Pima CD4 test cartridge intègre des fonctions
de contrôle pour vérifier le fonctionnement de
l’Analyser et du réactif.
En outre, lorsqu’on insère la cartouche
dans le Pima Analyser, le système effectue
automatiquement les vérifications suivantes:
36 heures qui suivent le prélèvement.
• Date d’expiration: Le code-barres linéaire
4.Avant de prendre un échantillon pour le tester,
inscrit sur la Pima CD4 test cartridge contient
retourner le tube de prélèvement 10 à 15
la date d’expiration, que le Pima Analyser
fois pour que l’échantillon soit correctement
vérifie avant l’analyse.
mélangé.
Si la cartouche a passé la date d’expiration,
5.Utiliser une pipette volumétrique ou de
l’analyse ne démarre pas et la cartouche est
transfert pour appliquer l’échantillon
rejetée. Si le Pima Analyser ne parvient pas à
sanguin dans le Sample Collector de la
lire le code-barres, l’opérateur peut saisir le
Pima CD4 test cartridge.
code numérique manuellement. Ce code est
6.Suivre les instructions à partir du point 8 de
imprimé sur la pochette de la cartouche, sous
la section précédente.
le code-barres linéaire.
• Volume de l’échantillon: Le Pima Analyser
vérifie si la quantité d’échantillon, chargée
Procédure du test
dans la Pima CD4 test cartridge, est
1.Insérer l’échantillon dans la Pima CD4 test
suffisante. Si cette quantité est insuffisante,
cartridge (pour plus de détails, voir la partie
l’analyse ne démarre pas et la cartouche
Prélèvement d’échantillon).
est éjectée.
2.Sélectionner «Run Test» sur le
• Validation du réactif: La stabilité des
Pima Analyser.
réactifs est validée pour chaque Pima CD4
3.Insérer la Pima CD4 test cartridge dans
test cartridge grâce à un contrôle intégré du
le Pima Analyser dans le sens indiqué
réactif. Si les résultats de ce contrôle sont en
par la flèche sur la cartouche. Suivre les
dehors des limites définies à la fabrication,
instructions à l’écran ou se reporter au
l’Analyser affiche un message d’erreur.
manuel d’utilisation du Pima Analyser pour
• Fonctionnement de l’instrument: la fonction
plus de détails sur la procédure d’analyse.
de contrôle fluorescent sur la Pima CD4 test
4.Retirer la Pima CD4 test cartridge lorsque
cartridge est analysée pour vérifier le bon
l’Analyser vous y invite et lire le résultat.
fonctionnement du Pima Analyser.
Résultats
Les résultats sont calculés automatiquement
par le Pima Analyser. Le comptage absolu
de lymphocytes T auxiliaires s’affiche sur la
première des quatre fenêtres de résultats
de l’Analyser. L’opérateur a la possibilité
d’imprimer un résultat sur le Pima Printer
externe. Pour plus d’informations, se reporter
au manuel d’utilisation du Pima Analyser.
Si les résultats du contrôle se situent en
dehors des limites définies à la fabrication,
l’Analyser affiche un message d’erreur.
Plusieurs autres vérifications sont effectuées
au cours de l’analyse. Si les résultats d’une
des vérifications posent un problème, le Pima
Analyser affiche un message d’erreur. Pour le
détail des messages d’erreur, se reporter au
manuel d’utilisation du Pima Analyser.
Cartridge Guide
5
Valeur p
Test de McNemar bilatéral (3 sur 9):
1,00
4 – 1.507
Contenu de l’emballage et
stockage
41
Les caractéristiques de performance du
Pima CD4 test ont été établies par des tests
menés par Clondiag GmbH (aujourd’hui Alere
Technologies GmbH) à Jena, en Allemagne et
sur des sites cliniques externes en Afrique et
en Allemagne.
1. Pattanapanyasat K and Thakar MR.
CD4+T cell count as a tool to monitor HIV
progression & anti-retroviral therapy.
Indian J Med Res 2005; 121 : 539-49.
2. R
achlis AR and Zarowny DP. Guidelines
for antiretroviral therapy for HIV infection.
Canadian HIV Trials Network Antiretroviral
Working Group. CMAJ 1998; 158 : 496-505.
3. Clinical and Laboratory Standards Institute.
Procedures and Devices for the Collection
of Diagnostic Capillary Blood Specimens;
Approved Standard-6th Edition H04-A6
Vol.28 No 25.
4. Clinical and Laboratory Standards Institute.
Procedures for the Collection of Diagnostic
Blood Specimens by Venipuncture; Approved
Standard-6th Edition H03-A6 Vol.27 No 26.
5. HCDM (former HLDA VIII) Meeting May (2006),
Quebec, Canada; WS Code M241.
6. M
illan J, Cerny J, Horejsi V, Alonso MA (1999).
CD4 segregates into specific detergentresistant T-cell membrane microdomains.
Tissue Antigens. Jan; 53(1) : 33-40.2.
7. K napp, W., B. Dorken, et al. Eds. (1989),
Leucocyte Typing IV: White Cell Differentiation
Antigens Oxford University Press. New York.
8. M
c Michael, A.J., P.C.L. Beverly, et al. eds.
(1987). Leucocyte Typing III: White Cell
Differentiation Antigens. Oxford University
Press. New York.
3 – 2.168
2
Matériel fourni
90 580
83
• Pima Analyser
!
NE PAS utiliser de gants talqués ou de main nue.
• Pipette volumétrique ou de transfert
!Laisser la cartouche atteindre la température
(pour les échantillons de sang veineux
ambiante avant d’ouvrir la pochette en aluminium.
uniquement)
!
NE PAS ouvrir la pochette en aluminium avant le
• L ancettes stériles*
moment du test.
(pour les échantillons de sang capillaire)
!Sortir la cartouche de la pochette en aluminium
* recommandation : Safety-Lancet Super, Sarstedt,
avec soin, sans toucher le couvercle du canal de
Allemagne.
En cas d’utilisation d’autres lancettes, se reporter
détection.
aux instructions spécifiques données par le
!
NE PAS utiliser les cartouches ayant été
fabricant.
mouillées.
• tampons imbibés d’alcool
! NE PAS utiliser les cartouches dont la pochette
• tampons secs
en aluminium est endommagée.
• pansements
!
NE PAS utiliser les cartouches après la date
de péremption imprimée sur l’étiquette de la
Pima CD4 Test Cartridge
pochette.
La Pima CD4 test cartridge est constituée
!
NE PAS retirer le Sample Collector avant que la
d’une structure solide en plastique noir, d’un
fenêtre de contrôle ne soit remplie de sang.
capuchon en plastique orange 1 , d’un
! NE PAS tenter de séparer le bouchon en plastique
Sample Collector où appliquer l’échantillon
orange de la base de la cartouche.
sanguin 2 , d’une fenêtre de contrôle pour
vérifier que le volume d’échantillon est suffisant ! NE PAS fermer le capuchon en plastique orange
avant que la cartouche ne soit remplie de sang.
3 , d’un canal de détection avec un couvercle
! NE PAS toucher le couvercle transparent du canal
transparent 4 , d’un tube en silicone situé
de détection. Tout dommage sur le couvercle du
à l’arrière pour permettre un mouvement du
canal de détection peut entraîner un message
liquide dans la cartouche et d’un cache arrière
d’erreur.
orange (non représentés sur l’image).
!
NE PAS toucher ni tenter de tirer sur le tube en
silicone. Tout dommage sur le tube peut entraîner
un message d’erreur.
1
!
NE PAS tenter de retirer le cache arrière orange
de la cartouche.
!
NE PAS ouvrir le sachet anti-condensation placé
2
dans la pochette en aluminium.
!Veillez à bien Incinérer ou jeter tout déchet
3
contaminé comme il convient, conformément aux
réglementations nationales, régionales et locales.
!Afin de minimiser les erreurs d’identification
d’échantillon, il faudra marquée chaque cartouche
de l’identité d’échantillon correspondant sur la
zone indiquée sur l’étiquette de la cartouche.
>350
3
Suivre à la lettre la réglementation sur la prévention
des infections pour l‘utilisation de tous échantillons
de sang et matériels relatifs.
11.6
BD positif
4
28
Caractéristiques de
performance
Références bibliographiques
1
Chaque boîte Pima CD4 contient:
• 25 cartouches en pochette individuelle (catalogue n°260100025) ou
100 cartouches en pochette individuelle
(catalogue n°260100100)
19
6
• 1 Manuel d’utilisation Pima™ CD4 cartridge
de la lancette. Ne pas « presser » ou ne pas
appliquer de pression forte répétée sur le
doigt; cela pourrait conduire à une hémolyse
ou à une contamination de l‘échantillon par
le liquide tissulaire. Si nécessaire, on peut
masser légèrement le doigt pour assurer une
bonne circulation sanguine.
6.Essuyer les premières gouttes de sang avec
une compresse ou une gaze (voir illustration
n°16 à 18). Vérifier que la circulation sanguine
est suffisante pour générer des gouttes de
sang assez grosses. Si nécessaire, essuyer
à nouveau le doigt, jusqu’à ce que le sang
s’écoule librement.
7.Laisser le sang s‘écouler librement du doigt
piqué directement sur le Sample Collector en
maintenant la cartouche à un angle de
45 degrés pour le chargement de
l‘échantillon (voir illustrtion n°19). Attendre
que le capillaire du Sample Collector soit
complètement rempli de sang. Puis retirer
la cartouche du doigt et laisser le patient
appliquer une pression directe sur le côté de
la plaie à l‘aide d‘un tampon sec et propre
(voir illustration n°8 et 20).
8.Redresser la cartouche et observer par
la fenêtre de contrôle pour vérifier que
l’échantillon chargé est suffisant (voir
l’illustration n°21). Il y a suffisamment de
sang lorsque le capillaire que l’on voit par la
fenêtre de contrôle est rempli de sang.
9.Pincer l’extrémité du Sample Collector
des échantillons entre le pouce et l’index
et l‘extraire de la cartouche d’un seul
mouvement continu vers le haut
(voir l’illustration n°22).
Jeter dans une poubelle biohazard.
10.Fermer complètement le capuchon en
plastique orange
(voir les illustrations n°23 à 25).
11.Il est recommandé d’insérer la cartouche de
test dans le Pima Analyser immédiatement
(en moins de 5 minutes) après avoir chargé
un échantillon sanguin.
12.A ppliquer un pansement sur le doigt du
patient (voir illustration n°28).
23
% CV
57
Stockage
Stocker de 2 à 30°C
4
59 198
UCI
BD négatif
 
Prélèvement capillaire de sang total 3
(se reporter à l’illustration sur le déroulement)
1.Préparer le patient pour le prélèvement d’un
échantillon capillaire (voir illustration n°4).
Les meilleurs emplacements pour un
prélèvement capillaire sont le 3e et le 4e
doigts de la main non dominante. Ne pas
utiliser le bout du doigt ni le centre de la
pulpe. Éviter le côté du doigt, où on trouve
moins de tissu mou, où se situent les
vaisseaux et les nerfs et où l’os est plus près
de la surface. La peau du 2e doigt (index)
est en général plus épaisse, calleuse. Le 5e
doigt comporte en général moins de tissu
mou qui recouvre l’os. Éviter de piquer un
doigt froid ou cyanosé, gonflé, présentant
une cicatrice ou une éruption cutanée.
Éviter les doigts portant une bague.
2.Réchauffer les doigts si nécessaire (voir
illustration n°5). Demander au patient de
laisser sa main tomber vers le bas pour
accroître la circulation sanguine vers le
doigt.
Remarque : Veillez à ce que le patient soit
toujours assis plus haut que la personne qui
effectue le prélèvement capillaire.
3.Essuyer le bout du doigt choisi avec un
tampon imbibé d’alcool et laisser sécher à
l’air libre (voir l‘illustration n°7).
4.Sortir une Pima CD4 test cartridge de sa
pochette en aluminium et ouvrir entièrement
le bouchon en plastique orange pour
exposer entièrement le Sample Collector.
Ajuster proprement le Sample Collector
si nécessaire (voir illustration page 3).
Conserver la pochette aluminium pour le
cas où l’Analyser ne pourrait pas lire le
code-barres de la cartouche.
5.Utiliser une lancette stérile pour effectuer
une ponction au bord de la pulpe.
Afin d’obtenir un échantillon de sang
représentatif, un flux constant de sang est
absolument nécessaire (voir illustration
n°11 à 15). Si vous utilisez une lancette
automatique, il est essentiel d’appuyer
fermement la lancette sur le doigt et de
maintenir le contact au moment de l‘éjection
0 – 350
95%
LCI
Pima
positif
117
Cartridge Guide
16.6
(cellules/µL) 95%
Pima
négatif
5
2
0.981
3
27
ET
(cellules/µL)
 
25
BD positif
0.906
Sang total capillaire
Les performances de la méthode Pima CD4
sur des échantillons de sang total capillaire
sont comparables à celles observées avec le
sang total veineux. Des échantillons de sang
provenant de 49 patients adultes séropositifs à
VIH ont été recueillis dans deux établissements
de santé en Allemagne. Le sang veineux des
mêmes individus a été soumis à des tests de
référence BD FACSCalibur.
Pour tous les échantillons analysés, la plage
globale de dénombrement allait de 160 à 1181
cellules/µL pour BD FACSCalibur et de 167 à
1011 pour Pima CD4. Par comparaison avec
BD FACSCalibur, l’analyse de régression
présentait une pente (IC de 95%) de 0,85
(0,76 à 0,94) pour une valeur d’interception
(IC de 95%) de 46,42 (-5,92 à 98,76).
Le coefficient de corrélation de Pearson
(IC de 95 %) entre les deux mesures s’élevait à
0,94 (0,89 à 0,97).
Le %CV des mesures du Pima CD4 sur sang
capillaire total était de 10,3.
Remarque: Le résidu blanc visible dans le capillaire EDTA
n’indique PAS un défaut de la cartouche. Il s’agit d’une
conséquence du processus de fabrication normal.
Ce résidu se dissout lorsqu’il entre en contact avec
l’échantillon sanguin.
16
Moyenne
0.972
BD négatif
95 % UCI
Cartridge Guide
20
N
0.888
 
Pima
positif
95 % LCI
2
Cartridge Guide
29 119
dénombrement
Plage de
Équivalence 0.940
Valeur
0.453
Pima
négatif
Equivalence 0.953
Valeur
Equivalence clinique pour un seuil > 200
Cartridge Guide
6
0 – 200
(cellules/µL)
Equivalence clinique
L’équivalence clinique des deux méthodes a été
évaluée à partir d’un seuil diagnostic calculé
à l’aide d’un tableau de contingence à 2x2
entrées. Les résultats obtenus sont illustrés dans
les tableaux ci-dessous pour les deux seuils
diagnostics de 200 cellules/µL et
350 cellules/µL, respectivement. Des écarts entre
les méthodes de chacun des seuils de diagnostic
ont été calculés en utilisant un test de McNemar
et l’écart s’est révélé être insignifiant.
95 % UCI
 
Équivalence clinique pour un seuil > 350
Valeur p
Test de McNemar bilatéral (2 sur 7):
La plage des échantillons analysés s’étendaient
de 12 à 1472 cellules/µL pour le BD FACSCalibur
et de 17 à 1631 pour le Pima CD4.
La pente (95% IC) était de 0,95 (de 0,91 à 0,99)
avec une valeur d’interception (95 % IC) de 24
(de 8,5 à 37). Le coefficient de corrélation de
Pearson (95 % IC) entre deux mesures était de
0,96 (de 0,94 à 0,97).
Le système Pima CD4 se compose d’une
Pima CD4 test cartridge jetable et du Pima
Analyser, et permet de déterminer la numération
absolue de lymphocytes T auxiliaires dans le
sang total. La Pima CD4 test cartridge jetable
peut contenir jusqu’à 25 µL d’échantillon
environ et contient les réactifs déshydratés
nécessaires à la réalisation du test. Le Pima
CD4 test s’effectue à l’intérieur de la Pima CD4
test cartridge et aucune partie du Pima Analyser
n’entre en contact avec l’échantillon à aucun
moment du processus de test. Cette disposition
diminue le risque de contamination de l’Analyser
et le transfert d’échantillons d’une mesure à
l’autre. Après l’insertion de la Pima CD4 test
cartridge dans l’Analyser, un mouvement
péristaltique commence par transporter
l’échantillon dans le compartiment d’incubation
où l’échantillon se trouve en interaction avec
des anticorps spécifiques marqués par deux
colorants fluorescents différents émettant une
Cartridge Guide
Précision
La précision du Pima CD4 test pour le
comptage absolu de lymphocytes T auxiliaires
a été évaluée par comparaison avec le système
BD FACSCalibur comme méthode de référence.
On a prélevé des échantillons de sang total
veineux sur 149 adultes séropositifs dans des
établissements sanitaires en Ouganda et on
les analysés avec le Pima CD4 test et avec la
méthode de référence (mesure unique).
Une analyse par régression de Passing-Bablok
a été effectuée sur la première mesure de
comptage cellulaire Pima CD4 par rapport à
la mesure BD FACSCalibur; les résultats sont
illustrés dans le graphique ci-dessous.
Une analyse de différence selon la méthode de
Bland et Altman (Pima CD4 – BD FACSCalibur) a
également été réalisée sur les données.
Le biais moyen (95 % IC) sur l’ensemble des
149 échantillons était de -10 (-22 à 3) cellules/µL.
Analyse de précision des échantillons
cliniques
L’écart-type propre à la méthode et le
pourcentage CV des mesures Pima CD4 ont
été calculés à partir des mesures dupliquées
effectuées sur les 149 échantillons et pour des
sous-ensembles d’échantillons compris dans
les plages de dénombrement cellulaire 0–200,
0 –350 et >350, comme illustré dans le tableau
suivant. La valeur MOYENNE correspond à la
moyenne de toutes les mesures dupliquées
au sein de chaque plage et la valeur ET
correspond à la moyenne quadratique des
écarts-types de toutes les mesures dupliquées
au sein de chaque plage
(pour un intervalle de confiance IC de 95 %).
95 % LCI
1.Les résultats d’un Pima CD4 test doivent
être évalués en contexte avec toutes
les données cliniques et analytiques
disponibles. Dans les cas où les résultats
ne concorderaient pas avec l’évaluation
clinique, il convient d’effectuer les tests
supplémentaires appropriés.
2.Le Pima CD4 test a été évalué avec du sang
total capillaire et veineux associés à l’EDTA
comme anti-coagulant. Le sérum,
le plasma et le sang total associés à
d’autres anti-coagulants n’ont pas été
évalués et ne doivent pas être utilisés.
3.Le comptage absolu de lymphocytes
T-auxiliaires peut différer d’un laboratoire à
l’autre selon les équipements utilisés.
Limites
Français
PimaTM CD4 Cartridge - Manuel d’utilisation
p
2:
l30:
n
Tenir au sec
Limites de température
suffisante pour <n> tests
i`Se reporter au mode d’emploi
hRéférence catalogue
gNuméro de LOT
H Date de péremption
M Fabricant
Y Avertissement
D Ne pas réutiliser
X Contient du matériel en quantité (cellules/µL)
Pima CD4 a été prouvée linéaire de 3 à 2168
cellules/µL. Toutes les données corroborent la
droite de régression linéaire avec une valeur R 2
minimale de 0,99.
Le tableau suivant récapitule les données:
Index des symboles
Échantillon Plage de dénombrement Pente R2
diagnostic in vitro
C Marquage CE
IVD
Dispositif médical de
1
2
3
4
5
Pima™ CD4
25
24
19
18
13
12
7
6
8
14
20
26
9
15
21
27
10
16
22
11
17
23
28
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