indications réactif protocole performance références - Sigma

indications réactif protocole performance références - Sigma
COLORANT DE WRIGHT
Pour le Geometric Data
Hemastainer et le Hematrak
REMARQUES :
1. En cas d’utilisation du Geometric Data Hematrak, consulter le manuel d’utilisation du
fabricant.
2. Utiliser un tampon phosphate de pH 6,6 si les lames doivent être lues avec le
Geometric Data Hematrak. Si les lames doivent être lues avec un microscope optique
normal, utiliser un tampon phosphate de pH 7,2.
3. Couvrir la station 1 et la station 2 lorsque celles-ci ne sont pas utilisées.
4. Pour obtenir une bonne performance, ne pas couvrir la station 3.
5. Sigma-Aldrich a obtenu des résultats satisfaisants avec ce programme de coloration.
Les temps de coloration peuvent être ajustés en fonction des préférences de chacun
et des conditions environnementales.
6. Si les lames ne peuvent pas être colorées immédiatement, il est possible de les
fixer dans du méthanol pendant 1 minute et de les faire sécher. Les colorer le plus
rapidement possible.
7. Des lames de contrôle positif doivent être incluses dans chaque essai.
8. Les données obtenues par cette procédure permettent uniquement de faciliter le
diagnostic et doivent être révisées conjointement à d’autres tests ou informations sur
les diagnostics cliniques.
(Protocole N° WSGD-128)
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INDICATIONS
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La solution du colorant de Wright est destinée à être utilisée pour la coloration
des frottis sanguins ou de moelle osseuse. Les solutions sont destinées à un « usage
diagnostique in vitro ».
Le colorant de Wright, référence N° WSGD-128, est un colorant de Romanowsky
modifié utilisé pour colorer de manière différentielle les divers éléments cellulaires composant
le sang. Lorsque les frottis sanguins sont traités comme décrit ci-dessous, le noyau et le
cytoplasme des globules blancs prennent une coloration bleue ou rose caractéristique. Les
colorants purifiés dans les formulations ACCUSTAIN® du colorant de Wright éliminent toute
coloration non systématique et donnent des réponses chromogènes reproductibles d’un lot
à l’autre. Le colorant de Wright, référence N° WSGD-128, est utilisé avec des automates de
coloration par lot comme le Hemastainer® fourni par Geometric Data.
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PROTOCOLE :
RÉACTIF
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Station
1
2
3
4
5
COLORANT DE WRIGHT, référence N° WSGD128-4L
Colorant de Wright, 0,14 % p/v, et stabilisants dans du méthanol.
MATÉRIELS SPÉCIFIQUES REQUIS MAIS NON FOURNIS :
TAMPON PHOSPHATE, référence N° P3288
Un mélange de phosphate de sodium et de phosphate de potassium, 0,0083 mol/l, pH 7,2.
TAMPON PHOSPHATE, référence N° P8165
Un mélange de phosphate de sodium et de phosphate de potassium, 0,034 mol/l, pH 6,6.
MÉTHANOL, absolu, sans acétone, référence N° M1775
PROCÉDURE DE COLORATION PAR LOT
AVEC LE HEMASTAINER
Réactif
Méthanol
Colorant de Wright/Méthanol
Colorant de Wright/Tampon phosphate
Eau déionisée/Tampon phosphate
Tampon phosphate
Temps
15 à 30 secondes
2,0 minutes
5,0 minutes
20 secondes
1,0 minute
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PERFORMANCE
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Microscope / Lames / Lamelles de protection / Geometric Data Hemastainer et
accessoires / Geometric Data Hematrak et accessoires
Les noyaux présentent diverses nuances de violet. La coloration cytoplasmique
présente diverses colorations de bleu à rose clair. De fins granules rougeâtres à lilas
peuvent être présents dans le cytoplasme de certains types de cellules. Le cytoplasme
des basophiles montre des granules bleu foncé à noir. Le cytoplasme des éosinophiles
présente des granules orange. Les globules rouges doivent être de couleur rose à orange.1
Si les résultats observés sont différents des résultats escomptés, contacter le service
technique Sigma-Aldrich pour obtenir de l’aide.
CONSERVATION ET STABILITÉ :
Conserver la solution du colorant de Wright à température ambiante (18–26 °C).
Conserver le récipient bien fermé. L’étiquette du réactif porte une date de péremption.
Remplacer la solution du colorant de Wright de la station 3 si plus de 250 lames sont
colorées chaque jour ou si la coloration des plaquettes sanguines est faible. Changer
également la solution de la station 2 si une coloration faible est observée dans la durée.
Changer les solutions de toutes les stations chaque jour.
Conserver les tampons phosphate et le méthanol à température ambiante (18–26 °C).
Conserver la solution de tampon phosphate à une température comprise entre 2 et 8 °C.
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RÉFÉRENCES
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ALTÉRATION :
Éliminer le colorant de Wright ou le tampon phosphate en cas de développement de
turbidité.
Éliminer la solution du colorant de Wright en cas de formation d’un précipité ou
d’apparition d’un artéfact d’eau dans les globules rouges. Éliminer la solution de tampon
phosphate en cas de turbidité ou d’observation d’une prolifération bactérienne.
1. Hematology: Principles and Procedures, Sixth Edition, Brown AB, Lea & Febiger,
Philadelphia 1993 p101
Sigma-Aldrich, Inc. garantit la conformité de ses produits avec les informations contenues
dans la présente notice et dans les autres notices Sigma-Aldrich. L’utilisateur doit s’assurer
que le(s) produit(s) est/sont adapté(s) à l’utilisation qu’il souhaite en faire. D’autres
conditions générales peuvent s’appliquer. Voir au verso de la facture ou du bordereau de
commande les conditions générales de vente et autres informations.
PRÉPARATION :
Les solutions de tampon phosphate se préparent en diluant le contenu d’un flacon de
tampon phosphate dans 3,8 litres d’eau déionisée.
REMARQUE : Toute variation du pH de l’eau peut avoir un impact non négligeable sur
les performances de ce réactif utilisé avec le Hemastainer. Il est recommandé de confirmer
le pH final du tampon afin de garantir des performances optimales.
Le réactif utilisé dans la station 1 est du méthanol.
Le réactif utilisé dans la station 2 est la solution colorant de Wright/méthanol, qui se
prépare en mélangeant 350 ml de colorant de Wright avec 150 ml de méthanol.
Le réactif utilisé dans la station 3 est la solution colorant de Wright/tampon phosphate,
qui se prépare en mélangeant 100 ml de colorant de Wright avec 400 ml de solution de
tampon phosphate.
Le réactif utilisé dans la station 4 est de l’eau déionisée tamponnée, qui se prépare en
mélangeant 3,8 litres d’eau déionisée avec 200 ml de solution de tampon phosphate.
Le réactif utilisé dans la station 5 est la solution de tampon phosphate.
Protocole N° WSGD-128
Révision précédente : 2010-06
Révision : 2013-02
AR-MED, a division of Quintiles Ltd
Runnymede Malthouse
Off Hummer Road
Egham
Surrey
TW20 9BD
United Kingdom
PRÉCAUTIONS :
Suivre les précautions habituelles observées lors de la manipulation de réactifs de
laboratoire. Éliminer les déchets selon les règlements locaux, départementaux, régionaux
ou nationaux en vigueur. Pour des informations actualisées sur les risques ou la sécurité,
se reporter à la fiche technique du produit.
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PROTOCOLE
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SIGMA-ALDRICH, INC.
3050 Spruce Street, St. Louis, MO 63103 États-Unis +1 314 771 5765
Service technique : en PCV au +1 314 771 5750
ou adresser un email à clintech@sial.com
Pour commander : en PCV au +1 314 771 5750
www.sigma-aldrich.com
PRÉLÈVEMENT DES ÉCHANTILLONS :
Il est recommandé de prélever et de conserver les échantillons conformément au
document M29-A3 du CLSI. Aucune méthode d’analyse actuelle ne garantit totalement
que les échantillons de sang ou de tissus ne transmettent pas d’agents infectieux. Par
conséquent, tous les échantillons de sang ou de tissus doivent être considérés comme
potentiellement infectieux.
On peut utiliser des frottis de sang total frais ou des frottis frais préparés à partir
de sang anticoagulé avec de l’EDTA. Si l’échantillon coloré doit être évalué avec le
système Hematrak, un long frottis mince à bord frangé droit est nécessaire. L’appareil
de préparation de frottis automatique à colonne Miniprep de Geometric Data fournit un
échantillon adéquat. Avant de préparer les frottis, bien mélanger le sang à température
ambiante (18–26 °C).
SIGMA-ALDRICH INTERNATIONAL GmbH
Wassergasse 7
900 St. Gallen
Switzerland
41 71 242 8000
1-FR
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