Taq`Ozyme Purple Mix 2 (remplace OZYA003-40)

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Taq’Ozyme Purple Mix 2

40 rxns de 50 µl ou 80 rxns de 25 µl

R

É

F

É

RENCE : OZYA007-40

VOLUME : Taq’Ozyme Purple Mix 2 : 1 x 1 ml

STOCKAGE : -20°C ou +4°C

DURÉE DE VIE : à réception, un an à -20°C ou 3 mois à +4°C

Taq’Ozyme Purple Mix 2 est une nouvelle formulation du Taq’Ozyme Purple Mix. Il fonctionne dans toutes les applications validées avec le Taq’Ozyme

Purple Mix (ex. PCR sur colonies) et permet, de plus, d’amplifi er jusqu’à 5 kb à partir des matrices d’ADN complexes (ex. ADN génomique humain) et/ou riches en GC. Ce nouveau mix PCR inclut du MgCl

2

à concentration optimale et est prêt à l’emploi. Le magnesium demeure néanmoins adjustable au-delà de 1,7 mM.

Migration des colorants en agarose

Gel 0,5-1,5% Gel 2-3%

Marqueur Bleu

Marqueur Rouge

4-10 Kb

1-2 Kb

200-750 pb

125-200 pb

DESCRIPTIF :

Taq’Ozyme Purple Mix 2 est un mélange 2X prêt

à l’emploi. Il facilite l’utilisation et diminue les erreurs de pipettage. Le dépôt des produits de PCR sur gel est direct grâce à la présence de colorants. Deux colorants inertes, un rouge et un bleu sont inclus au mélange permettant un contrôle visuel de la distribution et le suivi de la migration en gel. Ces colorants n’interfèrent pas avec les applications en aval.

DÉFINITI ON DE L’UNI TÉ :

Une unité est défi nie comme la quantité d’enzyme qui incorpore 10 nmoles de dNTP dans un fragment d’ADN en 30 min à 74°C.

PROTOCOLE STANDARD :

Ce protocole est adapté pour une réaction de 50 μl à partir de matrices purifi ées. Les amorces ont préférentiellement une température de fusion (Tm) proche de 60°C.

C’est un point de départ pour les optimisations (voir “Optimisations” dans le Manuel d’Utilisation en ligne).

Après décongélation complète de chaque réactif, bien homogénéiser à l’aide d’un vortex, puis centrifuger brièvement tous les réactifs avant leur utilisation.

1. Les réactifs sont mélangés dans un micro-tube stérile, dans l’ordre suivant :

2. Le mélange réactionnel est vortexé doucement, puis centrifugé brièvement pour rassembler l’échantillon au fond du tube.

3. Programmation du thermocycleur :

Réactif Volume

Conc.

fi nale

Etape Température Temps

Nombre de cycles

Taq’Ozyme

Purple Mix 2

25 μl 1X

Dénaturation initiale

95°C 2 min 1

Dénaturation 95°C 30 sec

Amorce sens

(ex : 20 µM)

0,5 µl 0,2 µM

25-35

Amorce anti-sens

(ex : 20 µM)

Matrice d’ADN

0,5 µl

Plasmide : 10 ng

ADNg : 200 ng

ADNc non dilué § : < 5µl

0,2 µM

< 500 ng/

50 µl

Hybridation

Elongation

Extension fi nale

Stockage

(optionnel)

55°C *

72°C

72°C

4°C

30 sec

1 min §

5 min variable

1

1

Eau stérile redistillée

Volume fi nal q.s.p* 50 µl

50 μl

-

-

§ : aliquot d’un mélange réactionnel de transcription inverse q.s.p* : quantité suffi sante pour

* : ou Tm-5°C sur le Tm le plus bas des deux amorces, si le

Tm des amorces est différent de 60°C

§ : 1 min/Kb pour les amplicons >1 Kb

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PRÉCAUTIONS :

Conserver le mélange réactionnel sur la glace jusqu’au démarrage des cycles de PCR. Ev iter les congélations/

décongélations répétées. Taq’Ozyme Purple Mix 2 n’est pas adapté pour des amplicons de plus 5 kb. Si besoin, voir la section « produits associés »

COMPOSANTS :

1 x 1 ml Taq’Ozyme Purple Mix 2 2X

PRODUITS ASSOCIÉS :

Taq’Ozyme

Taq’Ozyme HS

EmeraldAmp® MAX PCR Master Mix (PCR > 5 Kb)

ExactLadder® Ladder DNA PreMix 100 bp Plus

ExactLadder® Ladder DNA PreMix 2 Log

ExactLadder® DNA PCR PreMix dNTP PreMix - 4 x 10 mM dNTP PreMix - 4 x 25 mM

COMPOSITION 1X :

(NH

4

)

2

SO

4

16 mM ; Tris HCl 50 mM, pH 9,2 ; MgCl

2

Taq 2,5 unités (dans 25 µl de mix) ; traces de colorants rouge et bleu ; stabilisateurs d’enzymes et amplificateurs de PCR.

1,7 mM ; Brij58 0,075% ; dNTP 200 µM ; ADN polymérase

MANUEL D’UTILISATION : www.ozyme.fr/proto-taqpurplemix2

POUR COMMANDER : www.ozyme.fr

OZYME

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10, Avenue Ampère

78180 Montigny-Le-Bretonneux

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Tél : +33 (0) 1 34 60 15 16

Fax : +33 (0) 1 34 60 92 12

NUMÉRO DE FICHE TECHNIQUE :

OZYA007-40-0914

PRODUIT À USAGE DE RECHERCHE

UNIQUEMENT

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