ATB® G-

ATB® G-
REF 14 019
08672C - FR - 2003/04
ATB® G-
IVD
Antibiogramme pour les entérobactéries
INTRODUCTION ET OBJET DU TEST
La galerie ATB G- permet de déterminer la sensibilité aux
antibiotiques des entérobactéries en milieu semi-solide
dans des conditions très proches des techniques de
référence de dilution en gélose ou de micro-dilution (selon
les recommandations du CASFM ou NCCLS).
PRINCIPE
La galerie ATB G- comporte 16 paires de cupules. La
première, sans antibiotique, sert de témoin de croissance.
Les 14 suivantes contiennent des antibiotiques à une
seule ou deux concentrations (c et C). La dernière paire
n’est pas utilisée.
La bactérie à tester est mise en suspension puis
transférée dans le milieu de culture et inoculée dans la
galerie. Après incubation, la lecture de la croissance se
fait soit visuellement, soit avec l'automate ATB ou mini
API ®. Le résultat obtenu permet de catégoriser la souche
Sensible, Intermédiaire ou Résistante.
PRESENTATION (Coffret pour 25 antibiogrammes) :
- 25 galeries ATB G- en emballage individuel
avec déshydratant
- 25 couvercles d'incubation
- 1 notice
COMPOSITION DE LA GALERIE
La composition de la galerie ATB G- est mentionnée dans
le tableau « Contrôle de Qualité » de cette notice.
NOTE : La cupules TSU contiennent de la Thymidine
Phosphorylase d’origine animale.
REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON
FOURNIS
Réactifs et instruments
- API® Suspension Medium (Réf. 70 700 ou 70 640 ou
20 150) ou
API® NaCl 0,85 % Medium (Réf. 20 070 ou 20 040 ou
20 230)
[en fonction de la galerie d'identification utilisée]
- ATB Medium (Réf. 14 960)
- McFarland Standard (Réf. 70 900) ou DENSIMAT
(Réf. 99 234) ou Densitomètre ATB
- Pipette Electronique ATB (consulter bioMérieux) ou
Inoculateur ATB et Embouts (Réf. 15 710)
- Automate ATB ou mini API ® avec logiciel (consulter
bioMérieux)
Matériel
- Oeses calibrées de 10µl ou pipette
- Protège-ampoules
- Portoir pour ampoules
- Equipement général de laboratoire de bactériologie
PRECAUTIONS D'UTILISATION
• Pour diagnostic in vitro uniquement.
• Pour usage professionnel uniquement.
• Ce coffret contient des composants d'origine animale. La
maîtrise de l'origine et/ou de l'état sanitaire des animaux
ne pouvant garantir de façon absolue que ces produits ne
contiennent aucun agent pathogène transmissible, il est
recommandé de les manipuler avec les précautions
d'usage relatives aux produits potentiellement infectieux
(ne pas ingérer; ne pas inhaler).
• Les prélèvements, cultures bactériennes et produits
ensemencés
doivent
être
considérés
comme
potentiellement infectieux et doivent être manipulés de
façon appropriée. Les techniques aseptiques et les
précautions usuelles de manipulation pour le groupe
bactérien étudié doivent être respectées tout au long de
la manipulation ; se référer à "NCCLS M29-A, Protection
of Laboratory Workers from Instrument Biohazards and
Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids,
and Tissue; Approved Guideline - December 1997".
Pour informations complémentaires sur les précautions
de manipulation, se référer à "Biosafety in
Microbiological and Biomedical Laboratories, HHS
Publication No. (CDC) 93-8395, 3rd Edition (May
1993)," ou à la réglementation en vigueur dans le pays
d'utilisation.
• Ne pas utiliser les réactifs après la date de péremption.
• Avant utilisation, s'assurer de l'intégrité de l'emballage
des galeries.
• Ne pas utiliser de galeries ayant subi une altération physique : cupule déformée, sachet déshydratant ouvert, …
• Les performances présentées sont obtenues avec la
méthodologie indiquée dans cette notice. Toute déviation de méthodologie peut altérer les résultats.
• L'interprétation et la validation des résultats de
l’antibiogramme doit être faite en tenant compte du
contexte clinique, de l'origine du prélèvement, de
l’identification de la souche, éventuellement des
résultats
de
tests
complémentaires
et
des
recommandations locales en vigueur. L'interprétation et
la validation sont facilitées par le système Expert ATB.
CONDITIONS DE STOCKAGE
Les galeries se conservent à 2-8°C à l'obscurité jusqu'à la
date limite d'utilisation indiquée sur le coffret.
ECHANTILLONS (PRELEVEMENT ET PREPARATION)
La galerie ATB G- ne doit pas être utilisée directement à
partir des prélèvements d'origine clinique ou autres.
Les microorganismes à tester doivent dans un premier
temps être isolés sur un milieu de culture adapté selon les
techniques usuelles de bactériologie.
REACTIFS COMPLEMENTAIRES
- ATB BLSE (Réf. 14 109)
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MODE OPERATOIRE
Préparation de la galerie
• Sortir la galerie de son emballage.
• Noter l’identifiant de la bactérie à tester sur la languette
latérale de la galerie.
Préparation de l'inoculum
• Préparer une suspension bactérienne d'opacité
équivalente à l'étalon 0,5 de McFarland. Comparer au
témoin d'opacité du kit McFarland Standard ou utiliser le
Densitomètre ATB ou le DENSIMAT (se reporter au
manuel d’utilisation).
Deux méthodes :
- culture en bouillon jusqu'à obtention de l'opacité
indiquée ;
- mise en suspension de 1 ou plusieurs colonies (utiliser
préférentiellement des souches fraîchement cultivées)
dans une ampoule d’API® Suspension Medium ou
d’API® NaCl 0,85 % Medium (ouvrir l'ampoule comme
indiqué au paragraphe "Précautions d’utilisation" de la
notice du produit).
Cette suspension doit être utilisée extemporanément.
NOTE : il est recommandé de contrôler la pureté de
l'inoculum et de réisoler dans le cas de cultures mixtes.
• Transférer 10 µl de cette suspension dans ATB Medium
à l'aide d'une oese calibrée ou d'une pipette.
Inoculation de la galerie
• Inoculation MANUELLE :
- Homogénéiser ATB Medium avec la Pipette
Electronique ATB en évitant la formation de bulles.
- Inoculer la galerie en distribuant 135 µl d'ATB Medium
par cupule avec la Pipette Electronique ATB (environ
2 x 105 germes/ml ou 3 x 104 germes/cupule).
• Inoculation AUTOMATIQUE :
Se reporter au manuel d’utilisation de l’inoculateur ATB
• Mettre un couvercle sur la galerie.
• Incuber 18-24 heures à 36 ± 2°C en aérobiose.
LECTURE ET INTERPRETATION
Rechercher dans chaque cupule la présence d'un trouble
(+) par lecture visuelle ou automatique par l’automate
ATB ou mini API ® (se reporter aux manuels d’utilisation).
Pour les antibiotiques testés à deux concentrations :
Aspect des cupules
Résultats
c
C
c
C
clair
trouble
trouble
clair
clair
trouble
–
+
+
–
–
+
La souche est :
S
I
R
SENSIBLE
INTERMEDIAIRE
RESISTANTE
Pour les antibiotiques testés à une seule concentration :
Aspect de la cupule
Résultat
clair
trouble
–
+
La souche est :
S
R
SENSIBLE
RESISTANTE
NOTES :
• Avant d’effectuer la lecture automatique, il est conseillé
d'essuyer les éventuelles gouttelettes sur la partie
centrale de la galerie afin de permettre la
reconnaissance du code de la galerie par le lecteur.
• L'absence de croissance dans une (ou deux) cupule(s)témoin invalide l'antibiogramme qui doit être
recommencé.
• Un résultat c(–)C(+) est un non-sens (N) : répéter le test
avec une nouvelle galerie.
• En lecture visuelle, une croissance limitée à la
périphérie de la cupule doit être lue négative.
• Une galerie dont les cupules sont partiellement
desséchées suite à l'incubation peut induire de faux
résultats. L’antibiogramme doit être recommencé.
• Triméthoprime – Sulfaméthoxazole (TSU) :
Considérer comme négatif toute croissance inférieure
au témoin de croissance.
CONTROLE DE QUALITE
Pour vérifier la standardisation de la méthode suivie, des
contrôles de qualité avec la souche test indiquée pour
cette galerie doivent être réalisés (voir tableau Contrôle
de Qualité en fin de notice).
Il est de la responsabilité de l’utilisateur de s’assurer que
le contrôle de qualité est mis en œuvre conformément à la
législation en vigueur.
LIMITES DU TEST
• Un temps d’attente entre les diverses étapes de la
manipulation (de la préparation de l’inoculum à
l’incubation de la galerie) peut affecter les résultats.
• Seules des cultures pures contenant un seul type de
microorganisme doivent être utilisées. Des cultures
mixtes ou contaminées peuvent affecter les résultats.
RESULTATS ATTENDUS
Les profils de résistance des tests antibiotiques variant en
fonction de la zone géographique, les résultats attendus
sont donc directement dépendants de l’écologie
microbienne locale (espèces / mécanismes de
résistance).
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PERFORMANCES
Les performances de la galerie ATB G- ont été
déterminées en utilisant deux souchiers comprenant les
genres bactériens suivants :
- Escherichia
- Cedecea
- Enterobacter
- Hafnia
- Klebsiella
- Citrobacter
- Proteus
- Morganella
- Providencia
- Serratia
- Yersinia
Le premier souchier a permis d’établir le taux de
concordance
des
catégorisations
pour
chaque
antibiotique. Les catégorisations de référence ont été
déterminées à partir des résultats de CMI obtenues avec
la méthode de dilution en gélose, et comparées à celles
établies par la galerie ATB G-. Il y a concordance lorsque
les catégorisations cliniques des deux méthodes sont
identiques.
Le second souchier provenant du Centre National de
Référence des Antibiotiques (Institut Pasteur, Paris
France) a permis de vérifier l’expression des mécanismes
de résistance. Un mécanisme de résistance est exprimé
lorsque les résultats de catégorisation des antibiotiques
marqueurs sont compatibles avec le profil attendu.
Enfin, un résultat est dit reproductible si les 3 résultats de
catégorisation déterminés de manière indépendante sont
identiques.
Taux de concordance
Le taux de concordance de la galerie ATB G- obtenu à
partir de 100 souches est de 93,8 %.
Les taux d’erreurs majeures et d’erreurs très majeures
obtenus avec la galerie ATB G- sont respectivement de
2,4 % et 0,9 %.
Expression des mécanismes de résistance
Indépendamment du système expert, l'étude,
46 souches, a permis de vérifier que les
mécanismes de résistance aux antibiotiques
chez les entérobactéries s'expriment avec
ATB G-.
Reproductibilité
Le taux de reproductibilité global de la galerie ATB G- est
de 93 % (établi avec un minimum de 10 souches par
antibiotique).
ELIMINATION DES DECHETS
Eliminer les réactifs utilisés ou non utilisés ainsi que les
matériels à usage unique contaminés en suivant les
procédures relatives aux produits infectieux ou
potentiellement infectieux.
Il incombe à chaque laboratoire de gérer les déchets et
les effluents qu'il produit selon leur nature et leur
dangerosité, et d'en assurer (ou faire assurer) le
traitement et l'élimination selon les réglementations
applicables.
TABLE DES SYMBOLES
BIBLIOGRAPHIE
CONTROLE DE QUALITE
FICHE DE RESULTATS
bioMérieux® sa
au capital de 11 879 045 €
673 620 399 RCS LYON
portant sur
principaux
rencontrés
la galerie
p.
I
p. II
p. III
p. IV
69280 Marcy-l'Etoile / France
Tél. 33 (0)4 78 87 20 00
Fax 33 (0)4 78 87 20 90
http://www.biomerieux.com
Imprimé en France
Le logo est une marque déposée et protégée qui est la propriété exclusive de bioMérieux sa ou de l’une de ses filiales.
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