DIAsource KAPD1288 FSH ELISA Instruction For Use

Below you will find brief information for FSH ELISA KAPD1288. The DIAsource FSH ELISA is an enzyme immunoassay for the quantitative in vitro diagnostic measurement of Follicle Stimulating Hormone (FSH) in serum. FSH levels are elevated after menopause, castration, and in premature ovarian failure. The levels of FSH may be normalized through the administration of estrogens, which demonstrate a negative feedback mechanism. The growth of the seminiferous tubules and maintenance of spermatogenesis in men are regulated by FSH. However, androgens, unlike estrogens, do not lower FSH levels, therefore demonstrating a feedback relationship only with serum LH.

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FSH-ELISA

KAPD1288

DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium

: 150622/1

FSH ELISA

KAPD1288

IN VITRO DIAGNOSTIC USE

DIAsource ImmunoAssays SA - Rue du Bosquet 2, B-1348 Louvain-la-Neuve, Belgium - Tel: +32 10 84 99 11 - Fax : +32 10 84 99 90

1 INTRODUCTION

1.1 Intended Use

The DIAsource FSH ELISA is an enzyme immunoassay for the quantitative in vitro diagnostic measurement of Follicle Stimulating

Hormone (FSH) in serum.

1.2 Summary and Explanation

Follicle-Stimulating Hormone (FSH) and Luteinizing Hormone (LH) are intimately involved in the control of the growth and reproductive activities of the gonadal tissues, which synthesize and secrete male and female sex hormones through a negative feedback relationship (1,2).

FSH is a glycoprotein secreted by the basophil cells of the anterior pituitary. Gonadotropin-releasing hormone (GnRH), produced in the hypothalamus, controls the release of FSH from the anterior pituitary. Like other glycoproteins, such as LH, TSH, and HCG, FSH consists of subunits designated as alpha and beta. Hormones of this type have alpha subunits that are very similar structurally, therefore the biological and immunological properties of each are dependent on the unique beta subunit (3,4,5).

In the female, FSH stimulates the growth and maturation of ovarian follicles by acting directly on the receptors located on the granulosa cells; follicular steroidogenesis is promoted and LH production is stimulated. The LH produced then binds to the theca cells and stimulates steroidogenesis. Increased intraovarian estradiol production occurs as follicular maturation advances, thereupon stimulating increased FSH receptor activity and FSH follicular binding. FSH, LH, and estradiol are therefore intimately related in supporting ovarian recruitment and maturation in women (6,7,9).

FSH levels are elevated after menopause, castration, and in premature ovarian failure. The levels of FSH may be normalized through the administration of estrogens, which demonstrate a negative feedback mechanism. Abnormal relationships between FSH and LH, between FSH and estrogen have been linked to anorexia nervosa and polycystic ovarian disease. Although there are significant exceptions ovarian failure is indicated when random FSH concentrations exceed 40 mIU/mL (8).

The growth of the seminiferous tubules and maintenance of spermatogenesis in men are regulated by FSH. However, androgens, unlike estrogens, do not lower FSH levels, therefore demonstrating a feedback relationship only with serum LH (10,11,12). For reasons not fully understood, azospermic and oligospermic males usually have elevated FSH levels. Tumors of the testes generally depress serum FSH concentrations, but levels of LH are elevated, as determined by radioimmunoassay. It has been postulated that the apparent LH increase may be caused by cross reactivity with hCG-like substances secreted by tumors of the testes (11,12). High levels of FSH in men may be found in primary testicular failure and Klinefelter syndrome. Elevated concentrations are also present in cases of starvation, renal failure, hyperthyroidism, and cirrhosis (1,3).

2 PRINCIPLE OF TEST

The DIAsource FSH ELISA Kit is a solid phase enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based on the sandwich principle. The microtiter wells are coated with a monoclonal antibody directed towards a unique antigenic site on a FSH molecule.

An aliquot of patient sample containing endogenous FSH is incubated in the coated well with enzyme conjugate, which is an anti-FSH monoclonal antibody conjugated with horseradish peroxidase. After incubation the unbound conjugate is washed off.

The amount of bound peroxidase is proportional to the concentration of FSH in the sample.

Having added the substrate solution, the intensity of colour developed is proportional to the concentration of FSH in the patient sample.

3 WARNINGS AND PRECAUTIONS

- This kit is for in vitro diagnostic use only. For professional use only.

All reagents of this test kit which contain human serum or plasma have been tested and confirmed negative for hiv i/ii, hbsag and hcv by fda approved procedures. All reagents, however, should be treated as potential biohazards in use and for disposal.

Before starting the assay, read the instructions completely and carefully. Use the valid version of the package insert provided with the kit. Be sure that everything is understood.

The microplate contains snap-off strips. Unused wells must be stored at 2 °c to 8 °c in the sealed foil pouch and used in the frame provided.

Pipetting of samples and reagents must be done as quickly as possible and in the same sequence for each step.

Use reservoirs only for single reagents. This especially applies to the substrate reservoirs. Using a reservoir for dispensing a substrate solution that had previously been used for the conjugate solution may turn solution colored. Do not pour reagents back into vials as reagent contamination may occur.

Mix the contents of the microplate wells thoroughly to ensure good test results. Do not reuse microwells.

Do not let wells dry during assay; add reagents immediately after completing the rinsing steps.

Allow the reagents to reach room temperature (21°C to 26 °C) before starting the test. Temperature will affect the absorbance readings of the assay. However, values for the patient samples will not be affected.

Never pipet by mouth and avoid contact of reagents and specimens with skin and mucous membranes.

Do not smoke, eat, drink or apply cosmetics in areas where specimens or kit reagents are handled.

Catalogue Nr: KAPD1288 P.I. Number : 1701236/en Revision Nr : 150622/1

- Wear disposable latex gloves when handling specimens and reagents. Microbial contamination of reagents or specimens may give false results.

Handling should be done in accordance with the procedures defined by an appropriate national biohazard safety guideline or regulation.

Do not use reagents beyond expiry date as shown on the kit labels.

All indicated volumes have to be performed according to the protocol. Optimal test results are only obtained when using calibrated pipettes and microtiterplate readers.

Do not mix or use components from kits with different lot numbers. It is advised not to exchange wells of different plates even of the same lot. The kits may have been shipped or stored under different conditions and the binding characteristics of the plates may result slightly different.

Avoid contact with stop solution containing 0.5 m h

2 so

. It may cause skin irritation and burns.

Some reagents contain proclin, bnd and mit as preservatives. In case of contact with eyes or skin, flush immediately with water.

Tmb substrate has an irritant effect on skin and mucosa. In case of possible contact, wash eyes with an abundant volume of water and skin with soap and abundant water. Wash contaminated objects before reusing them. If inhaled, take the person to open air.

Chemicals and prepared or used reagents have to be treated as hazardous waste according to the national biohazard safety guideline or regulation.

For information on hazardous substances included in the kit please refer to Material Safety Data Sheets.

Material Safety Data Sheets for this product are available upon request directly from DIAsource.

4 REAGENTS

4.1

Reagents provided

Microtiterwells, 12 x 8 (break apart) strips, 96 wells.

CAL N

Wells coated with anti-FSH monoclonal antibody.

FSH Calibrators. N= 0 to 5, 6 vials (lyophilized), 1 mL

Concentration : 0; 5; 10; 20; 50; 100 mlU/mL

Conversion : 6 mlU/mL

Ab HRP

The calibrators are calibrated against 1. International Calibrator for Follicle Stimulation Hormone (FSH),

human recombinant for immunoassay NIBSC code 92/510

See “Preparation of Reagents”

Contains non-mercury preservative

Enzyme Conjugate, 1 vial, 11 mL. Ready for use.

Anti-FSH antibody conjugated to horseradish peroxidase.

Contains non-mercury preservative

CHROM TMB

Substrate Solution, 1 vial, 14 mL. Ready for use.

Tetramethylbenzidine (TMB)

STOP SOLN

Stop Solution, 1 vial, 14 mL. Ready for use.

Contains 0.5 M H

Avoid contact with the stop solution. It may cause skin irritations and burns.

Note: Additional Calibrator 0 for sample dilution is available on request.

4.2 Material required but not provided



A microtiter plate calibrated reader (450±10 nm)



Calibrated variable precision micropipettes.



Absorbent paper.



Distilled or deionized water



Timer



Linear graph paper of software for data reduction

4.3 Storage Conditions

When stored at 2 °C

– 8 °C unopened reagents will retain reactivity until expiration date. Do not use reagents beyond this date.

Opened reagents must be stored at 2 °C

– 8 °C. Microtiter wells must be stored at 2 °C- 8 °C. Once the foil bag has been opened, care should be taken to close it tightly again.

Opened kits retain activity for two months if stored as described above.

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4.4 Reagents Preparation

Bring all reagents and required number of strips to room temperature prior to use.

Calibrators

Reconstitute the lyophilized contents of the calibrator vial with 1 mL Aqua dest.

Note: The reconstituted calibrators are stable for 2 months at 2-8°C. For longer storage freeze at -20°C.

4.5 Disposal of the Kit

The disposal of the kit must be made according to the national regulations. Special information for this product is given in the Material

Safety Data Sheets (see chapter 13).

4.6 Damaged Test Kits

In case of any severe damage to the test kit or components, DIAsource has to be informed in writing, at the latest, one week after receiving the kit. Severely damaged single components should not be used for a test run. They have to be stored until a final solution has been found. After this, they should be disposed according to the official regulations.

5 SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION

Only serum should be used in this assay.

Do not use haemolytic, icteric or lipaemic specimens.

Please note: Samples containing sodium azide should not be used in the assay.

5.1 Specimen Collection

Serum:

Collect blood by venipuncture (e.g. Sarstedt Monovette # for serum), allow to clot, and separate serum by centrifugation at room temperature. Do not centrifuge before complete clotting has occurred. Patients receiving anticoagulant therapy may require increased clotting time.

5.2 Specimen Storage and Preparation

Specimens should be capped and may be stored for up to 5 days at 2°C - 8°C prior to assaying.

Specimens held for a longer time should be frozen only once at -20°C prior to assay. Thawed samples should be inverted several times prior to testing.

5.3 Specimen Dilution

If in an initial assay, a specimen is found to contain more than the highest calibrator, the specimens can be diluted with Ctandard 0 and reassayed as described in Assay Procedure.

For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account.

Example: a) dilution 1:10: 10 µL Serum + 90 µL Calibrator 0 (mix thoroughly) b) dilution 1:100: 10 µL dilution a) 1:10 + 90 µL Calibrator 0 (mix thoroughly).

6 ASSAY PROCEDURE

6.1 General Remarks



All reagents and specimens must be allowed to come to room temperature before use. All reagents must be mixed without foaming.



Once the test has been started, all steps should be completed without interruption.



Use new disposal plastic pipette tips for each calibrator, control or sample in order to avoid cross contamination



Absorbance is a function of the incubation time and temperature. Before starting the assay, it is recommended that all reagents are ready, caps removed, all needed wells secured in holder, etc. This will ensure equal elapsed time for each pipetting step without interruption.



As a general rule the enzymatic reaction is linearly proportional to time and temperature.



Pipetting of all calibrators, samples, and controls should be completed within 6 minutes. (Note this especially for manual pipetting.)

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6.2 Test Procedure

Each run must include a calibration curve.

1. Secure the desired number of Microtiterwells in the holder.

2. Dispense 25 µL of each Calibrator, controls and samples with new disposable tips into appropriate wells.

3. Dispense 100 µL Enzyme Conjugate into each well.

Thoroughly mix for 10 seconds. It is important to have a complete mixing in this step.

4. Incubate for 30 minutes at room temperature.

5. Briskly shake out the contents of the wells.

Rinse the wells 5 times with aqua dest (400 µL per well). Strike the wells sharply on absorbent paper to remove residual droplets.

Important note:

The sensitivity and precision of this assay is markedly influenced by the correct performance of the washing procedure!

6. Add 100 µL of Substrate Solution to each well.

7. Incubate for 10 minutes at room temperature.

8. Stop the enzymatic reaction by adding 50 µL of Stop Solution to each well.

9. Determine the absorbance (OD) of each well at 450 ±10 nm with a microtiter plate reader.

It is recommended that the wells be read within 10 minutes after adding the Stop Solution.

6.3 Calculation of Results

1. Calculate the average absorbance values for each set of calibrators, controls and patient samples.

2. Construct a calibration curve by plotting the mean absorbance obtained from each calibrator against its concentration with absorbance value on the vertical(Y) axis and concentration on the horizontal (X) axis.

3. Using the mean absorbance value for each sample determine the corresponding concentration from the calibration curve.

4. Automated method: The results in the Instructions For Use have been calculated automatically using a 4 Parameter curve fit. (4 parameter Rodbard or 4 Parameter Marquardt are the preferred methods). Other data reduction functions may give slightly different results.

5. The concentration of the samples can be read directly from this calibration curve. Samples with concentrations higher than that of the highest calibrator have to be further diluted. For the calculation of the concentrations this dilution factor has to be taken into account.

6.3.1 Example of Typical Calibration Curve

The following data is for demonstration only and cannot be used in place of data generations at the time of assay.

Calibrator Optical Units (450 nm)

Calibrator 0 (0 mIU/mL)

Calibrator 1 (5 mIU/mL)

Calibrator 2 (10 mIU/mL)

Calibrator 3 (20 mIU/mL)

Calibrator 4 (50 mIU/mL)

Calibrator 5 (100 mIU/mL)

0.07

0.16

0.26

0.44

0.92

1.71

7 EXPECTED NORMAL VALUES

It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values.

In a study conducted with apparently normal healthy adults, using the DIAsource FSH ELISA the following values are observed:

Population

Males

Female

Follicular Phase

Mid-cycle

Luteal Phase

Post-Menopausal

5% - 95%Percentile [mIU/mL]

0.89

– 11.72

2.0 - 10.0

7.0 - 20.0

2.0 - 10.0

20.0

–100.0

8 QUALITY CONTROL

Good laboratory practice requires that controls be run with each calibration curve. A statistically significant number of controls should be assayed to establish mean values and acceptable ranges to assure proper performance.

It is recommended to use control samples according to state and federal regulations. The use of control samples is advised to assure the day to day validity of results. Use controls at both normal and pathological levels.

The controls and the corresponding results of the QC-Laboratory are stated in the QC certificate added to the kit. The values and ranges stated on the QC sheet always refer to the current kit lot and should be used for direct comparison of the results.

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It is also recommended to make use of national or international Quality Assessment programs in order to ensure the accuracy of the results.

Employ appropriate statistical methods for analysing control values and trends. If the results of the assay do not fit to the established acceptable ranges of control materials patient results should be considered invalid.

In this case, please check the following technical areas: Pipetting and timing devices; photometer, expiration dates of reagents, storage and incubation conditions, aspiration and washing methods.

After checking the above mentioned items without finding any error contact your distributor or DIAsource directly.

9 PERFORMANCE CHARACTERISTICS

9.1 Assay Dynamic Range

The range of the assay is between 0.86

– 100 mIU/mL.

9.2 Specificity of Antibodies (Cross Reactivity)

The following substances were tested for cross reactivity of the assay:

Hormone Tested Concentration

Produced Color Intensity

Equivalent to FSH in serum

(mIU/mL)

hCG (WHO 1

TSH (WHO 2

LH (WHO 1

Prolactin (WHO 1

75/504) st hGH (WHO 1 st nd

IRP 68/40) st

IRP75/537)

IRP 80/558) st

IRP

IRP 66/217)

10.000 mIU/mL

50.000 mIU/mL

100.000 mIU/mL

50 µIU/mL

100 µIU/mL

100 mIU/mL

250 mIU/mL

500 mIU/mL

100 ng/mL

200 ng/mL

100 ng/mL

200 ng/mL

9.3 Sensitivity

The analytical sensitivity was calculated from the mean plus two standard deviations of twenty (20) replicate analyses of Calibrator 0 and was found to be 0.856 mIU/mL.

9.4 Reproducibility

9.4.1 Intra Assay

The within assay variability is shown below:

Sample

Mean (mIU/mL)

SD (mIU/mL)

CV (%) n =

7.37

0.58

7.91

14.24

0.64

4.50

9.4.2 Inter Assay

The between assay variability is shown below:

38.13

1.60

4.18

Sample

Mean (mIU/mL)

SD (mIU/mL)

CV (%) n =

7.33

0.53

7.18

13.85

0.81

5.84

37.42

1.93

5.15

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9.5 Recovery

Samples have been spiked by adding FSH solutions with known concentrations in a 1:1 ratio.

The % Recovery has been calculated by multiplication of the ratio of the measurements and the expected values with 100.

Sample

Endogenous

FSH

(mIU/mL)

Added

FSH

(mIU/mL)

Measured

Conc.

FSH

(mIU/mL)

Expected

FSH

(mIU/mL)

Recovery

( % )

54.64 0

54.6

74.8

56.8

77.3

52.3

96.8

108.6

24.11

40.8

36.2

24.1

61.7

37.3

32.3

62.1

109.4

112.1

99.4

38.2

24.5

18.8

37.1

22.1

17.1

7.01 0

7.0

52.9

27.0

11.9

7.9

53.5

28.5

13.5

8.5

(* Endogenous FSH / 2 + added FSH because of a 1:1 dilution of serum with spike material.)

103.1

110.9

110.4

98.9

94.6

88.5

93.0

9.6 Linearity

Sample

Dilution

None

1:2

1:4

1:8

1:16

None

1:2

1:4

1:8

1:16

None

1:2

1:4

1:8

1:16

Measured

Conc.

(mIU/mL)

54.6

26.1

12.6

6.1

3.3

24.1

13.4

6.4

3.2

1.7

71.4

38.9

19.4

9.5

4.7

Expected

Conc.

(mIU/mL)

54.6

27.3

13.7

6.8

3.4

24.1

12.1

6.0

3.0

1.5

71.4

35.7

17.8

8.9

4.5

Recovery

(%)

95.5

92.0

88.8

95.6

111.0

106.0

107.6

111.0

109.0

108.5

106.7

106.1

10 LIMITATIONS OF USE

Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results.

10.1 Interfering Substances

Haemoglobin (up to 4 mg/mL), Bilirubin (up to 0.5 mg/mL) and Triglyceride (up to 30 mg/mL) have no influence on the assay results.

10.2 Drug Interferences

Until today no substances (drugs) are known to us, which have an influence to the measurement of FSH in a sample.

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10.3 High-Dose-Hook Effect

No hook effect was observed in this test up to 1600 mIU/mL of FSH.

11 LEGAL ASPECTS

11.1 Reliability of Results

The test must be performed exactly as per the manufacturer’s instructions for use. Moreover the user must strictly adhere to the rules of GLP (Good Laboratory Practice) or other applicable national calibrators and/or laws. This is especially relevant for the use of control reagents. It is important to always include, within the test procedure, a sufficient number of controls for validating the accuracy and precision of the test.

The test results are valid only if all controls are within the specified ranges and if all other test parameters are also within the given assay specifications. In case of any doubt or concern please contact DIAsource.

11.2 Therapeutic Consequences

Therapeutic consequences should never be based on laboratory results alone even if all test results are in agreement with the items as stated under point 11.1. Any laboratory result is only a part of the total clinical picture of a patient.

Only in cases where the laboratory results are in acceptable agreement with the overall clinical picture of the patient should therapeutic consequences be derived.

The test result itself should never be the sole determinant for deriving any therapeutic consequences.

11.3 Liability

Any modification of the test kit and/or exchange or mixture of any components of different lots from one test kit to another could negatively affect the intended results and validity of the overall test. Such modification and/or exchanges invalidate any claim for replacement.

Claims submitted due to customer misinterpretation of laboratory results subject to point 11.2. are also invalid. Regardless, in the event of any claim, the manufacturer’s liability is not to exceed the value of the test kit. Any damage caused to the test kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer.

12 REFERENCES/LITERATURE

1. Marshall, J. C.: Clinic in Endocrinol. Metab., 4, 545 (1975).

2. Jeffcoate, S. L.: Clinic. in Endocrinol. Metab. 4, 521 (1975).

3. Cohen, K. L.: Metabolism, 26, 1165 (1977).

4. Shome, B. and Parlow, A. F.: J. Clin. Endocrinol. Metab., 39, 199 (1974).

5. Lundy, L. E., Lee, S. G., Levy, W., et al.: Obstet. Gynecol., 44, 14 (1974).

6. Ross, F. T., Vande Wiele, R. L. and Franty, A. G.: Text of Endocrinol., Chapter 7, Ed.: R. H. Williams, W.B. Saunders,

Philadelphia (1981).

7. Speroff, L.: Clinic. Gynecol. Endocrinol. and Infert., Chapter 3, Ed: L. Speroff, R. H. Glass and M. G. Kase, Williams & Wilkins

Baltimore (1978).

8. Rebar, R. W., Erickson, G. F. and Yen, S.S.C.: Fertil. Steril., 37, 35 (1982).

9. Catt, K. J. and Pierce, J.G.: Reprod. Endocrinol., Chapter 2, Ed: S.S.C. Yen and R. B. Jaffe, Philadelphia (1978).

10. Leonard, J. M., Leach, R. B., Couture, M. and Paulsen, C.A.: J. Clinic. Endocrinol., 34, 209 (1972).

11. Reiter, E. O. and Lulin, H. E.: J. Clinic. Endocrinol., 33, 957 (1971).

12. Abraham, G. E., Ed.: Radioassay Systems in Clinic. Endocrinol., Marcel Dekker, Inc., New York (1981).

13. Engvall, E., Methods in Enzymology, Volume 70, VanVunakis, H. and Langone, J.J., (eds.),

Academic Press, New York, 419 (1980).

14. Uotila, M., Ruoslahti, E. and Engvall, E., J.Immunol. Methods, 42, 11 (1981).

Revision date : 2015-06-22

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FSH ELISA

KAPD1288

IN VITRO DIAGNOSTIC USE

DIAsource ImmunoAssays SA - Rue du Bosquet 2, B-1348 Louvain-la-Neuve, Belgium - Tel: +32 10 84 99 11 - Fax : +32 10 84 99 90

1 INTRODUCCIÓN

El Kit de inmunoensayo enzimático DIAsource FSH ELISA proporciona los materiales necesarios para la determinación cuantitativa del Hormona estimulante folicular (FSH) en suero.

Este ensayo está diseñado solo para diagnóstico in vitro.

2 FUNDAMENTO DEL ENSAYO

El Kit DIAsource FSH ELISA es un ensayo en fase sólida de inmunoadsorción unido a enzimas (ELISA), basado en el principio del sándwich.

Los pocillos de las placas están recubiertos con un anticuerpo monoclonal dirigido contra un único foci antigénico en una molécula de

FSH. Se incuba una alícuota de una muestra perteneciente a un paciente que contiene FSH endógena en los pocillos recubiertos con el enzima conjugado, que es un anticuerpo anti- FSH conjugado con la peroxidasa endógena. Después de la incubación se lava el conjugado que no se ha unido.

La cantidad de peroxidasa unida es proporcional a la concentración de FSH en la muestra.

Cuando se añade la solución del sustrato de la peroxidasa, la intensidad del color desarrollado es proporcional a la concentración de

FSH en la muestra del paciente.

3 PRECAUCIONES



Este kit es solamente para diagnóstico in vitro.



Por favor, se usa solo la versión valida de la metódico técnico incluido aquí en el lit



Para obtener información de las sustancias peligrosas incluidas en el kit por favor mirar las hojas de los datos de seguridad del material.



Todos los reactivos en este kit de ensayo que contienen suero o plasma humano se han ensayado y confirmado ser negativos para HIV I/II, HBsAg y HCV mediante procedimientos aprobados por la FDA. Sin embargo, todos los reactivos deben ser tratados tanto en su uso como dispensación como potencialmente biopeligrosos.



Evitar contacto con Stop Solution que contiene H

0,5 M. Puede provocar irritación y quemaduras en la piel.



Nunca pipetear con la boca y evitar el contacto de los reactivos y las muestras con la piel y con membranas mucosas.



No fumar, comer, beber o usar cosméticos en áreas donde las muestras o los reactivos del kit están siendo usados.



Usar guantes de látex cuando se utilicen las muestras y los reactivos. La contaminación microbiana de los reactivos o las muestras puede dar resultados erróneos.



El manejo debe realizarse de acuerdo a los procedimientos definidos por las guías o regulación nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas.



No utilizar los reactivos después de su fecha de caducidad que aparece en las etiquetas del kit.



Todos los volúmenes indicados han de ser realizados de acuerdo con el protocolo. Los resultados óptimos del ensayo se obtienen solo cuando se utilizan pipetas y lectores de microplacas calibrados.



No mezclar o usar componentes de kits con distinto número de lote. Se recomienda no intercambiar pocillos de distintas placas incluso si son del mismo lote. Los kits pueden haber sido enviados o almacenados bajo diferentes condiciones y las características de unión de las placas pueden resultar diferentes.



Los compuestos químicos y los reactivos preparados o utilizados han de tratarse como residuos peligrosos de acuerdo con las guías o regulación nacionales de seguridad de sustancias biopeligrosas.



Las hojas de los datos de seguridad de este producto están disponibles bajo pedido directamente a DIAsource ImmunoAssays

S.A..

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4 COMPONENTES DEL KIT

4.1 Componentes del Kit

1. Microtiterwells (Placas multipocillo), 12 x 8 tiras separables, 96 pocillos;

Pocillos recubiertos con anticuerpo anti- FSH (monoclonal).

CAL

CHROM

STOP

HRP

TMB

SOLN

Calibrador (Calibrador 0-5), 6 viales (liofilizados), 1 mL;

Concentraciones: 0, 5; 10; 20; 50; 100 mIU/mL.

Conversión: 6 mIU/mL = 1 ng/mL

Los calibradores están calibrados según WHO 1

International Calibrador parar FSH NIBSC código

(92/510.) (1. Intern. Calibrador for Follicle Stimulation Hormone (FSH), human recombinant for

immunoassay)

Enzyme Conjugate (Conjugado enzimático), 1 vial, 11 mL, listo para usar,

Anticuerpo anti- FSH conjugado con la Peroxidasa de rábano;

Substrate Solution (Solución de sustrato), 1 vial, 14 mL, listo para usar,

Tetrametilbencidina (TMB).

Stop Solution (Solución de parada), 1 vial, 14 mL, listo para usar, contiene 0.5M H

Evitar el contacto con la Solución de parada. Puede causar irritación y quemaduras en al piel.

Nota: Se puede solicitar el Calibrador 0 para la dilución de la muestra.

4.2 Equipamiento y material requerido pero no provisto



Lector de microplacas calibrado (450±10 nm) (ej. Microtiter Plate Reader).



Micropipetas de precisión variable calibradas.



Papel absorbente.



Agua destilada.

4.3 Almacenamiento y estabilidad del kit

Cuando se almacena a 2°C - 8°C, los reactivos sin abrir mantienen su reactividad hasta la fecha de caducidad. No utilizar los reactivos más allá de esta fecha.

Los reactivos abiertos han de almacenarse a 2°C - 8°C. Las placas multipocillo han de almacenarse a 2°C

– 8°C. Una vez se ha abierto la bolsa hay que tener cuidado y cerrarla de nuevo.

Los kits abiertos conservan su actividad durante dos meses si se almacenan como se ha descrito arriba.

4.4 Preparación de los Reactivos

Dejar que todos los reactivos y el número requerido de tiras alcancen la temperatura ambiente antes de usarse.

Calibradores

Reconstituir los contenidos liofilizados de los viales de los calibradores con 1 mL de agua destilada.

Nota: Los calibradores reconstituidos son estables durante 2 meses a 2°C

– 8°C. Para períodos más largos congelar a -20°C.

4.5 Eliminación del Kit

La eliminación del kit debe realizarse de acuerdo con las leyes nacionales. En las hojas de datos de seguridad se proporciona información especial de este producto.

4.6 Kits de ensayo dañados

En caso de que exista cualquier daño severo del kit de ensayo o de sus componentes, ha de informarse por escrito a DIAsource

ImmunoAssays S.A. no mas tarde de una semana después de recibir el kit. No deben utilizarse componentes dañados para llevar a cabo un ensayo. Han de almacenarse hasta que se encuentre una solución. Después de esto, deben ser eliminados de acuerdo con las leyes oficiales.

5 MUESTRAS

Sólo debe utilizarse suero en este ensayo.

No usar muestras hemolíticas, ictéricas o lipémicas.

Tener en cuenta: No deben usarse muestras que contengan acida sódica.

5.1 Toma de muestras

Suero:

Recoger la sangre por punción en la vena (ej. Sarstedt Monovette # para el suero), permitir coagulación, y separar el suero por centrifugación a temperatura ambiente. No centrifugar antes de la coagulación completa. Las muestras de pacientes que reciben terapia anticoagulante requieren más tiempo para coagular.

5.2 Almacenamiento de las muestras

Las muestras deben ser tapadas y pueden ser almacenadas hasta 5 días a 2°C - 8°C antes del ensayo.

Las muestras almacenadas por un período de tiempo mas largo han de congelarse sólo una vez a - 20°C antes del ensayo. Las muestras descongeladas deben invertirse varias veces antes del ensayo.

Catalogue Nr: KAPD1288 P.I. Number : 1701236/es Revision Nr : 150622/1

5.3 Dilución de las muestras

Si en un ensayo inicial, se encuentra una muestra que presenta valores mayores que el calibrador mas concentrado, ha de diluirse con Calibrador 0 y volver a ensayarse como se describe en el Procedimiento de Ensayo.

Para el cálculo de las concentraciones habrá que tener en cuenta el factor de dilución.

Ejemplo: a) dilución 1:10: 10 µL Suero + 90 µL Calibrador 0 (mezclar totalmente) b) dilución 1:100: 10 µL dilución a) 1:10 + 90 µL Calibrador 0 (mezclar totalmente).

6 PROCEDIMIENTO DE ENSAYO

6.1 Consideraciones generales



Todos los reactivos y muestras han de estar a temperatura ambiente antes de su uso. Todos los reactivos deben mezclarse sin formar espuma.



Una vez se ha comenzado el ensayo deben completarse todos los pasos sin interrupción.



Utilizar puntas de pipeta de plástico nuevas para cada calibrador, control o muestra para evitar combinaciones cruzadas.



La absorbancia es función del tiempo de incubación y la temperatura. Antes de comenzar el ensayo, se recomienda que todos los reactivos estén preparados, tapas removidas, todos los pocillos que se necesiten asegurados en recipiente, etc. Esto asegurará un tiempo similar para cada paso de pipeteo sin que haya interrupciones.



Como regla general, la reacción enzimática es linealmente proporcional al tiempo y a la temperatura.



El pipeteo de todos los calibradores, muestras y controles debe estar completado en 6 minutos. (Tenerlo en cuenta especialmente para el pipeteo manual).

6.2 Procedimiento de ensayo

Cada uno debe incluir una curva de calibradores.

1. Asegurar el número deseado de pocillos en el recipiente.

2. Dispensar 25 µL de cada Calibrador, Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados.

3. Dispensar 100 µL de Enzyme Conjugate a cada pocillo.

Mezclar totalmente durante 10 segundos. Es importante mezclar completamente en este paso.

4. Incubar durante 30 minutes a temperatura ambiente.

5. Sacudir enérgicamente el contenido de los pocillos.

Lavar los pocillos 5 veces con agua destilada (400 µL por pocillo). Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales.

Nota importante:

La sensibilidad y la precisión de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realización correcta del proceso de lavado!

6. Adicionar 100 µL de Substrate Solution a cada pocillo.

7. Incubar durante 10 minutes a temperatura ambiente.

8. Parar la reacción enzimática mediante la adición de 50 µL de Stop Solution a cada pocillo.

9. Leer la OD a 450±10 nm con un lector de microplacas dentro de los 10 minutos después de la adición de la Stop Solution.

6.3 Cálculo de los Resultados

1. Calcular los valores de absorbancia media para cada conjunto de calibradores, controles y muestras de pacientes.

2. Construir una curva estándar mediante la representación de la absorbancia media obtenida para cada calibrador frente a su concentración con el valor de absorbancia en el eje vertical (Y) y la concentración en el eje horizontal (X).

3. Usando el valor de absorbancia media de cada muestra determinar la concentración correspondiente a partir de la curva calibrador.

4. Método automatizado: Los resultados en la Instrucciones de uso se han calculado automáticamente usando una curva de regresión 4 Parámetros (4 Parámetros Rodbard o 4 Parámetros Marquardt son los métodos preferidos). Otras funciones de regresión darán lugar a resultados sensiblemente diferentes.

5. La concentración de las muestra puede leerse directamente de la curva de calibradores. Las muestras con concentraciones superiores al mayor estándar han de diluirse. Para el cálculo de las concentraciones hay que tener en cuenta el factor de dilución.

6.3.1 Ejemplo de una Curva Calibrador Típica

Los siguientes datos son solamente para la explicación y no pueden ser utilizados en lugar de los datos generados en el momento del ensayo.

Catalogue Nr: KAPD1288 P.I. Number : 1701236/es Revision Nr : 150622/1

Calibrador Unidades Ópticas (450 nm)

Calibrador 0 (0 mIU/mL)

Calibrador 1 (5 mIU/mL)

Calibrador 2 (10 mIU/mL)

Calibrador 3 (20 mIU/mL)

0.07

0.16

0.26

0.44

Calibrador 4 (50 mIU/mL) 0.92

Calibrador 5 (100 mIU/mL) 1.71

7 VALORES ESPERADOS

Se recomienda encarecidamente que cada laboratorio determine sus valores normales e inusuales.

En un estudio con adultos aparentemente sanos utilizando el DIAsource FSH ELISA se observaron los siguientes valores:

Hombres

Mujeres

Población

Fase Folicular

Ciclo menstrual

Fase Luteal

Posmenopausia

Percentil 5% - 95%

[mIU/mL]

0.89

– 11.72

2.0 - 10.0

7.0 - 20.0

2.0 - 10.0

20.0

–100.0

8 CONTROL DE CALIDAD

Se recomienda usar muestras control de acuerdo con las leyes estatales y federales. El uso de muestras control ser recomienda para asegurar la validez diaria de los resultados. Usar controles tanto a niveles normal como patológico.

Los controles y los correspondientes resultados del Laboratorio de control de calidad están fijados en el certificado de control de calidad que acompañan al kit. Los valores y los rangos fijados en la hoja del control de calidad se refieren siempre al kit actual y deben usarse para la comparación directa de los resultados.

Es recomendable también hacer uso de programas de Aseguramiento de la Calidad nacionales o internacionales para asegurar la exactitud de los resultados.

Utilizar métodos estadísticos apropiados para el análisis de los valores y tendencia de los controles. Si los resultados del ensayo no se ajustan a los rangos aceptables establecidos en los controles, los resultados obtenidos de los pacientes han de considerarse inválidos.

En este caso, por favor comprobar las siguientes áreas técnicas: Pipeteo y tiempo empleado, fotómetro, fecha de caducidad de los reactivos, condiciones de almacenamiento e incubación, métodos de aspiración y lavado.

Después de comprobar los asuntos mencionados arriba sin encontrar ningún error, contactar con su distribuidor o con DIAsource

ImmunoAssays S.A. directamente.

9 CARACTERÍSTICAS DEL ENSAYO

9.1 Rango dinámico del ensayo

El rango del ensayo se encuentra entre 0,86

– 100 mIU/mL.

9.2 Especificidad de los Anticuerpos (Reactividad Cruzada)

Consultar el manual de usuario en inglés.

9.3 Sensibilidad Analítica

La sensibilidad analítica se calculó a partir de la media mas dos desviaciones estándar de veinte (20) réplicas del Calibrador 0 y resultó ser 0.856 mIU/mL.

9.4 Precisión

Consultar el manual de usuario en inglés.

9.5 Recuperación

Consultar el manual de usuario en inglés.

9.6 Linealidad

Consultar el manual de usuario en inglés.

Catalogue Nr: KAPD1288 P.I. Number : 1701236/es Revision Nr : 150622/1

10 LIMITACIONES DE USO

Cualquier manipulación inadecuada de las muestras o modificaciones del ensayo pueden influenciar los resultados.

10.1 Sustancias que pueden interferir

Hemoglobina (hasta 4 mg/mL), Bilirrubina (hasta 0.5 mg/mL) y Triglicéridos (hasta 30 mg/mL) no influencian los resultados del ensayo.

10.2 Interferencias con drogas

Hasta ahora no se han encontrado sustancias (drogas) conocidas por nosotros, que tengan influencia en la medida de FSH en una muestra.

10.3 Efecto Gancho-Dosis-Elevada

No se ha observado efecto gancho en este ensayo hasta 1600 mIU/mL de FSH.

11 ASPECTOS LEGALES

11.1 Fiabilidad de los Resultados

El ensayo debe realizarse exactamente de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Mas aún, el usuario debe ajustarse estrictamente a las reglas BPL (Buenas Prácticas de Laboratorio) o a otros calibradores y/o leyes nacionales aplicables. Esto es especialmente relevante para el uso de reactivos control. Es importante incluir siempre, dentro del procedimiento de ensayo, un número suficiente de controles para validar la exactitud y la precisión del ensayo.

Los resultados del ensayo son válidos sólo si todos los controles se encuentran dentro de los rangos especificados y si todos los otros parámetros del ensayo se encuentran dentro de las especificaciones dadas para el ensayo. En cado de alguna duda o inquietud, por favor, contactar con DIAsource ImmunoAssays S.A..

11.2 Consecuencias Terapéuticas

Las consecuencias terapéuticas nunca deben basarse sólo en los resultados de laboratorio incluso si todos los resultados del ensayo están de acuerdo con los asuntos fijados en el punto 11.1. Cualquier resultado de laboratorio es solamente una parte del cuadro clínico de un paciente.

Solamente en los casos donde los resultados de laboratorio están en acuerdo con todo el cuadro clínico de un paciente, se pueden derivar consecuencias terapéuticas.

Nunca deben derivarse consecuencias terapéuticas a partir de solamente el resultado obtenido en el ensayo

11.3 Responsabilidad

Cualquier modificación del kit y/o cambio o mezcla de cualquier componente procedentes de kits de lotes diferentes puede afectar negativamente a los resultados esperados y en la validez de todo el test. Esas modificaciones y/o cambios invalidad cualquier reclamación de reposición.

Las reclamaciones emitidas debidas a una mala interpretación de los resultados de laboratorio por parte del comprador referidos al punto 11.2 son también inválidas. A pesar de todo, en el caso de cualquier reclamación, la responsabilidad del fabricante no excede el valor del kit. Cualquier daño provocado al kit durante su transporte no está sujeto a la responsabilidad del fabricante.

12 REFERENCIAS/BBLIOGRAFÍA

Consultar el manual de usuario en inglés.

Fecha de revisión: 2015-06-22

Catalogue Nr: KAPD1288 P.I. Number : 1701236/es Revision Nr : 150622/1

P.I. Number : 1701000

WASH SOLN CONC

CAL 0

CAL

CONTROL

125I

CONC

HRP

HRP CONC

CONJ

CHROM

BUF

TMB CONC

CHROM TMB

SUB BUF

STOP SOLN

INC

BUF

SER

Ab AP

SUB

BIOT

PNPP

CONJ CONC

PREC AGENT

AVID HRP CONC

ASS

BUF

BIOT

SAV

NSB

2nd Ab

HRP CONC

ACID

DIST

TRAY

PMSF

BUF

INC BUF

ACETONITRILE

SERUM

DIL SPE

DIL BUF

ANTISERUM

IMMUNOADSORBENT

DIL CAL

REC

PEG

SOLN

EXTR SOLN

ELU

GEL

SOLN

PRE SOLN

NEUTR SOLN

TRACEUR BUF

STRIP

SUB

EXTR SOLN CONC

CART

SAV

PIPETTE

HRP

WASH SOLN

Used symbols

Consult instructions for use

Storage temperature

Use by

Batch code

Catalogue number

Control

In vitro diagnostic medical device

Manufacturer

Contains sufficient for <n> tests

Wash solution concentrated

Zero calibrator

Calibrator #

Control #

Tracer

Tracer concentrated

Tubes

Incubation buffer

Acetonitrile

Serum

Specimen diluent

Dilution buffer

Antiserum

Immunoadsorbent

Calibrator diluent

Reconstitution solution

Polyethylene glycol

Extraction solution

Elution solution

Bond Elut Silica cartridges

Pre-treatment solution

Neutralization solution

Tracer buffer

Microtiterplate

HRP Conjugate

HRP Conjugate concentrate

Conjugate buffer

Chromogenic TMB concentrate

Chromogenic TMB solution

Substrate buffer

Stop solution

Incubation serum

Buffer

AP Conjugate

Substrate PNPP

Biotin conjugate concentrate

Precipitating Agent

Avidine HRP concentrate

Assay buffer

Biotin conjugate

Specific Antibody

Streptavidin HRP concentrate

Non-specific binding

2nd Antibody

Acidification Buffer

Distributor

Incubation trays

PMSF solution

Protect from light

Dot Strip

Substrate

Extraction Buffer Concentrate

Cartridge

Streptavidin HRP

Pipette

Wash buffer

Revision nr 140723

P.I. Number : 1701000

WASH SOLN CONC

CAL 0

CAL

CONTROL

125I

CONC

HRP

HRP CONC

CONJ

CHROM

BUF

TMB

CONC

CHROM TMB

SUB BUF

STOP SOLN

INC

BUF

SER

SUB

BIOT

PNPP

CONJ CONC

PREC AGENT

AVID HRP

CONC

ASS

BUF

BIOT

SAV

NSB

2nd Ab

HRP CONC

ACID

DIST

TRAY

PMSF

BUF

INC BUF

ACETONITRILE

SERUM

DIL

SPE

BUF

ANTISERUM

IMMUNOADSORBENT

DIL CAL

REC

PEG

SOLN

EXTR SOLN

ELU

GEL

SOLN

PRE SOLN

NEUTR SOLN

TRACEUR BUF

SUB

EXTR SOLN CONC

CART

SAV

PIPETTE

HRP

WASH SOLN

Símbolos utilisados

Tampón de Conjugado

Cromógena TMB concentrada

Solución Cromógena TMB

Tampón de sustrato

Solución de Parada

Suero de Incubación

Tampón

AP Conjugado

Sustrato PNPP

Concentrado de conjugado de biotina

Agente de precipitación

Concentrado avidina-HRP

Tampón de ensayo

Conjugado de biotina

Anticuerpo específico

Estreptavidina-HRP Concentrado

Unión no específica

Segundo anticuerpo

Tampón de Acidificación

Distribuidor

Bandejas de incubación

Solución de PMSF

Proteger de la luz

Tries Dot

Sustrato

Concentrado de tampón de extracción

Cartucho

Estreptavidina HRP

Pipeta

Tampón de lavado

Consultar las instrucciones de uso

Limitación de temperatura

Fecha de caducidad

Codigo de lote

Número de catálogo

Control

Producto sanitario para diagnóstico in vitro

Fabricante

Contenido suficiente para <n> ensayos

Solución de lavado concentrada

Calibrador cero

Calibrador #

Control #

Trazador

Trazador concentrada

Tubos

Tampón de incubación

Acetonitrilo

Suero

Diluyente de Muestra

Tampón de dilución

Antisuero

Inmunoadsorbente

Diluyente de calibrador

Solución de Reconstitución

Glicol Polietileno

Solución de extracción

Solución de elución

Cartuchos Bond Elut Silica

Solución de Pre-tratamiento

Solución de Neutralización

Tampón de trazador

Placa de microvaloración

HRP Conjugado

HRP Conjugado concentrada

Revision nr 140723

Key Features

Quantitative in vitro diagnostic measurement
Measures Follicle Stimulating Hormone (FSH) in serum
Sandwich principle-based ELISA
Uses monoclonal antibodies
Measures FSH levels elevated after menopause, castration, and in premature ovarian failure
Measures FSH levels in men regulated by FSH.

Frequently Answers and Questions

What is FSH?

Follicle-Stimulating Hormone (FSH) is a glycoprotein secreted by the basophil cells of the anterior pituitary. Gonadotropin-releasing hormone (GnRH), produced in the hypothalamus, controls the release of FSH from the anterior pituitary.

What are the normal FSH levels?

It is strongly recommended that each laboratory should determine its own normal and abnormal values. In a study conducted with apparently normal healthy adults, using the DIAsource FSH ELISA the following values are observed: Males: 0.89 – 11.72 mIU/mL; Female: Follicular Phase: 2.0 - 10.0 mIU/mL, Mid-cycle: 7.0 - 20.0 mIU/mL, Luteal Phase: 2.0 - 10.0 mIU/mL, Post-Menopausal: 20.0 –100.0 mIU/mL

What are the limitations of use?

Reliable and reproducible results will be obtained when the assay procedure is performed with a complete understanding of the package insert instruction and with adherence to good laboratory practice. Any improper handling of samples or modification of this test might influence the results.