DIAsource KAP1081 hGH-EASIA hGH assay Instruction manual

Below you will find brief information for hGH assay KAP1081 hGH-EASIA. The hGH assay KAP1081 hGH-EASIA is a solid phase Enzyme Amplified Sensitivity Immunoassay performed on a microtiterplate. It is an immunenzymetrisches Assay used for quantitative in vitro determination of human Growth Hormone (hGH) in serum and plasma.

PDF Download

Document

hGH-EASIA

KAP1081

DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue de l'Industrie, 8 - B-1400 Nivelles - Belgium

: 090504/1

Read entire protocol before use.

hGH-EASIA

I. INTENDED USE

Immunoenzymetric assay for the in vitro quantitative measurement of human Growth Hormone (hGH) in serum and plasma.

II. GENERAL INFORMATION

A. Proprietary name : DIAsource hGH-EASIA Kit

B. Catalogue number : KAP1081 : 96 tests

C. Manufactured by : DIAsource ImmunoAssays S.A.

Rue de l'Industrie, 8, B-1400 Nivelles, Belgium.

For technical assistance or ordering information contact :

Tel : +32 (0)67 88.99.99 Fax : +32 (0)67 88.99.96

III. CLINICAL BACKGROUND

A. Biological activities hGH is a polypeptide hormone (molecular weight 21,500 Da) produced by the acidophil cells of the anterior pituitary under the control of two main substances from the median eminence : Growth-hormone Releasing

Factor (GRF) and an inhibitory agent, somatostatin. Dopaminergic, adrenergic and serotoninergic neuroendocrine pathways also play an important role in the control of hGH secretion. Excitatory stimuli of hGH secretion include hypoglycemia, exercise, fasting, meals with a high protein content, deep sleep, stress, glucagon, L Dopa, amino acids, etc. Inhibitory stimuli include glucose, cortisol, hGH and free fatty acids.

Because of its short plasma half life (±25 minutes) and of the frequent excitatory or inhibitory stimuli, hGH displays frequent and large variations of concentration in serum.

One of the main physiological functions of hGH is to act on the liver and other tissues to produce somatomedins, which in turn induce growth by direct action on target tissues. In contrast to hGH, the concentration of somatomedins in serum is kept stable by virtue of being largely bound to circulating plasma proteins.

B. Clinical application

· Growth retardation hGH hyposecretion is one of the various causes of small stature in children. Serum hGH measurement with

· a highly sensitive assay, especially following a provocative stimulus (absence of response), is an important way to establish this diagnosis because this group of patients can be treated by administration of hGH.

Hypopituitarism

Serum hGH measurement is also an index of pituitary function when hypopituitarism (either idiopathic or

· due to tumour and surgery) is suspected.

Gigantism and acromegaly

Serum hGH measurement, especially following a provocative inhibitory test (absence of response), is an important way to establish the diagnosis of hGH hypersecretion due to acidophilic pituitary tumour. This results in gigantism in children and acromegaly in adults. Both of these disorders may be treated by surgery or radiation.

IV. PRINCIPLES OF THE METHOD

The DIAsource HGH-EASIA is a solid phase Enzyme Amplified Sensitivity

Immunoassay performed on a microtiterplate. Calibrators and samples react with the capture monoclonal antibody (MAb 1) coated on microtiter well and with a monoclonal antibody (MAb 2) labelled with horseradish peroxidase (HRP).

After an incubation period allowing the formation of a sandwich: coated MAb 1 – hGH – MAb 2 – HRP, the microtiterplate is washed to remove unbound enzyme labelled antibody. Bound enzyme-labelled antibody is measured through a chromogenic reaction. The Chromogenic Solution (TMB – H

) is added and incubated. The reaction is stopped with the addition of Stop Solution and the microtiterplate is then read at the appropriate wavelength. The amount of substrate turnover is determined colourimetrically by measuring the absorbance, which is proportional to the hGH concentration.

A calibration curve is plotted and hGH concentration in samples is determined by interpolation from the calibration curve.

V. REAGENTS PROVIDED

Reagents 96 tests

Kit

Color

Code

Reconstitution

Breakable microtiterplate with 96 anti hGH

(monoclonal antibodies) coated wells

96 wells blue Ready to use

Ab HRP CONC

1 vial

0,2 ml yellow Dilute 40X with conjugate buffer

Conjugate: HRP labelled anti-hGH

(monoclonal antibodies) in stabilizing buffer

1 vial Ready to use

CONJ BUF

Conjugate buffer: TRIS-HCl buffer with bovine serum albumin and thymol

6 ml red

CAL 0

Zero calibrator in sheep serum and thymol

1 vial lyophilized yellow Add 2.0 ml distilled water

5 vials lyophilized yellow Add 0.5 ml distilled water

CAL N

Calibrator N = 1 to 5

(see exact values on vial labels) in sheep serum and thymol

WASH SOLN CONC

Wash Solution (Tris-HCl)

CONTROL N

Controls - N = 1 or 2 in human serum with thymol

CHROM TMB

Chromogen TMB Solution

(Tetramethylbenzydine)

STOP SOLN

Stop Solution: HCl 1N

1 vial

10 ml

2 vials lyophilized

1 vial

12 ml

1 vial

12 ml brown silver brown white

Dilute 200 x with distilled water (use a magnetic stirrer).

Add 0.5 ml distilled water

Ready to use

Note: 1. Use the zero calibrator for sample dilutions.

2. 1 µIU of the calibrator preparation is equivalent to 1 µIU of the 2 nd

98/574.

VI. SUPPLIES NOT PROVIDED

The following material is required but not provided in the kit:

1. High quality distilled water

2. Pipettes for delivery of: 50 μl, 200 µl, 500 µl and 2 ml (the use of accurate pipettes with disposable plastic tips is recommended)

Vortex mixer

Magnetic stirrer

Washer for microtiterplates

6. Microtiterplate reader capable of reading at 450 nm and 650 nm

(bichromatic reading)

VII. REAGENT PREPARATION

A. Calibrators : Reconstitute the zero calibrator with 2.0 ml distilled water and the other calibrators with 0.5 ml distilled water.

B. Controls : Reconstitute the controls with 0.5 ml distilled water.

C. Working anti-hGH-HRP conjugate: Prepare an adequate volume of conjugate solution by adding 25 µl of the concentrated anti-hGH-HRP conjugate to 1 ml of conjugate buffer. Use a vortex to homogenize.

Extemporaneous preparation is recommended.

D. Working Wash Solution : Prepare an adequate volume of Working Wash

Solution by adding 199 volumes of distilled water to 1 volume of Wash

Solution (200x). Use a magnetic stirrer to homogenize. Discard unused

Working Wash Solution at the end of the day.

VIII. STORAGE AND EXPIRATION DATING OF REAGENTS

Before opening or reconstitution, all kits components are stable until the

§ expiry date, indicated on the vial label, if kept at 2 to 8°C.

Unused wells must be stored, at 2-8°C, in a sealed bag containing a

§ desiccant until expiration date.

After reconstitution, calibrators and controls are stable for 1 week at 2 to

8°C. For longer storage periods, aliquots should be made and kept at

-20°C. Avoid successive freeze thaw cycles.

The concentrated Wash Solution is stable at room temperature until

§ expiration date.

Freshly prepared Working Wash Solution should be used on the same day.

After its first use, the conjugate is stable until expiry date, if kept in the original well-closed vial at 2 to 8°C.

Alterations in physical appearance of kit reagents may indicate instability or deterioration.

IX. SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION

Serum and plasma must be kept at 2 - 8°C.

If the test is not run within 24 hours, storage in aliquots at -20°C is

§ recommended. Avoid subsequent freeze thaw cycles.

Prior to use, all samples should be at room temperature. It is recommended to vortex the samples before use.

Serum, heparinized plasma or EDTA plasma provide similar results.

Y(serum) = 0.89 x (EDTA plasma) + 0.14 µIU/ml r=0.98 n=46

Y(serum) = 1.02 x (Heparin plasma) + 0.01 µIU/ml r=0.98 n=46

Do not use haemolysed samples. §

X. PROCEDURE

A. Handling notes

Do not use the kit or components beyond expiry date.

Do not mix materials from different kit lots.

Bring all the reagents to room temperature prior to use.

Thoroughly mix all reagents and samples by gentle agitation or swirling.

Perform calibrators, controls and samples in duplicate. Vertical alignment is recommended.

Use a clean plastic container to prepare the Wash Solution.

In order to avoid cross-contamination, use a clean disposable pipette tip for the addition of each reagent and sample.

For the dispensing of the Chromogenic Solution and the Stop Solution avoid pipettes with metal parts.

High precision pipettes or automated pipetting equipment will improve the precision.

Respect the incubation times.

To avoid drift, the time between pipetting of the first calibrator and the last sample must be limited to the time mentioned in section XIII paragraph E

(Time delay).

Prepare a calibration curve for each run, do not use data from previous runs.

Dispense the Chromogenic Solution within 15 minutes following the washing of the microtiterplate.

During incubation with Chromogenic Solution, avoid direct sunlight on the microtiterplate.

B. Procedure

1. Select the required number of wells for the run. The unused wells should be resealed in the bag with a desiccant and stored at 2-8°C.

Secure the wells into the holding frame.

Pipette 50 µl of each Calibrator, Control and Sample into the appropriate

5. wells.

Pipette 50 µl of working anti-hGH-HRP conjugate into all the wells.

Incubate for 30 minutes at room temperature – It is mandatory to respect the 30 minute-duration of this incubation

Aspirate the liquid from each well.

Wash the plate 3 times by:

§ Dispensing 0.4 ml of Wash Solution into each well

§ Aspirating the content of each well

Pipette 100 µl of the Chromogenic Solution into each well within 15 minutes following the washing step.

9. Incubate the microtiterplate for 30 minutes at room temperature, avoid direct sunlight.

10. Pipette 100 µl of Stop Solution into each well.

11. Read the absorbencies at 450 nm (reference filter 630 nm or 650 nm) within 1 hour and calculate the results as described in section XI.

XI. CALCULATION OF RESULTS

Read the plate at 450 nm against a reference filter set at 650 nm (or 630 nm).

Calculate the mean of duplicate determinations.

On semi-logarithmic or linear graph paper plot the OD values (ordinate) for each calibrator against the corresponding concentration of hGH

(abscissa) and draw a calibration curve through the calibrator points by connecting the plotted points with straight lines.

Read the concentration for each control and sample by interpolation on the

5. calibration curve.

Computer assisted data reduction will simplify these calculations. If automatic result processing is used, a 4-parameter logistic function curve fitting is recommended.

XII. TYPICAL DATA

The following data are for illustration only and should never be used instead of the real time calibration curve. hGH-EASIA OD units

Calibrator 0.00 μIU/ml

0.45 μIU/ml

5.40 μIU/ml

12.90 μIU/ml

43.50 μIU/ml

98.00 μIU/ml

0.030

0.062

0.226

0.501

1.429

2.330

XIII. PERFORMANCE AND LIMITATIONS

A. Detection Limit

Twenty zero calibrators were assayed along with a set of other calibrators.

The detection limit, defined as the apparent concentration two standard deviations above the average OD at zero binding, was 0.17 μIU/ml.

B. Specificity

Cross-reactive hormones were added to a low and to a high hGH value

Control sample. The apparent hGH response was measured. added Hormone hGH C1

µIU/ml hGH C2

µIU/ml

- hCG 100000 mIU/ml hPL 10000 ng/ml

PRL 12500 ng/ml

1.9

2.0

1.4

1.8

13.5

14.3

13.0

12.6

C. Precision

INTRA ASSAY

Serum

<X> ± SD

(μIU/ml)

6.90 ± 0.34

16.61 ± 0.90

(%)

4.9

5.4

Serum

INTER ASSAY

N <X> ± SD

(μIU/ml)

11..4

0.9

23.5

1.2

SD : Standard Deviation; CV: Coefficient of variation

D. Accuracy

Sample

RECOVERY TEST

Added hGH

(μIU/ml)

Recovered hGH

(μIU/ml)

(%)

8.1

5.1

Recovery

(%)

Serum

Plasma

4.3

13.5

26.8

52.1

4.3

13.5

26.8

52.1

4.1

12.8

28.1

58.9

4.6

13.2

25.3

53.0

105

113

106

102

Sample Dilution

DILUTION TEST

Theoretical Concent.

(μIU/ml)

Measured Concent.

(μIU/ml)

Serum 1

Serum 2

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

1/1

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

48.8

24.4

12.2

6.1

3.1

10.6

5.3

2.7

1.3

0.7

97.7

57.0

27.7

13.6

6.4

3.0

21.2

9.3

4.6

2.2

1.1

0.6

Samples were diluted with zero calibrator.

Conversion factor : 1µIU hGH-EASIA Calibrator = 0.33 ng

E. Time delay between last calibrator and sample dispensing

As shown hereafter, assay results remain accurate even when a sample is dispensed 60 minutes after the calibrators have been added to the coated wells.

TIME DELAY

0 min 10 min 20 min 30 min 45 min 60 min

4.0

13.5

3.6

15.0

3.3

13.8

3.3

13.0

3.0

12.6

3.8

13.0

F. Hook effect

A sample spiked with hGH up to 4000 μIU/ml gives higher OD’s than the last calibrator point.

XIV. INTERNAL QUALITY CONTROL

§ If the results obtained for Control 1 and/or Control 2 are not within the range specified on the vial label, the results cannot be used unless a

§ satisfactory explanation for the discrepancy has been given.

If desirable, each laboratory can make its own pools of control samples,

§ which should be kept frozen in aliquots. Controls that contain azide will interfere with the enzymatic reaction and cannot be used.

Acceptance criteria for the difference between the duplicate results of the samples should rely on Good Laboratory Practises

It is recommended that Controls be routinely assayed as unknown samples

§ to measure assay variability. The performance of the assay should be monitored with quality control charts of the controls.

It is good practise to check visually the curve fit selected by the computer.

XV. REFERENCE INTERVALS

These values are given only for guidance; each laboratory should establish its own normal range of values.

In normal subjects, growth hormone (hGH) secretion is pulsatile. During daytime, hGH concentrations range from <0.2-10 μIU/ml. During sleep, hGH concentrations increase consistently (± 30 μIU/ml). hGH secretion is greatly stimulated by exercise and stress (venous puncture, hypoglycemia, ...), but is decreased by hyperglycemia.

In normal subjects (n=34), two hours after oral glucose load (75 g in adults), hGH levels were lower than 10 μIU/ml and the hGH response to stimulation tests

(insulin, arginine, glucagon administration) exceeded 20 μIU/ml. hGH levels were elevated (even after glucose load) in acromegaly (> 10 μIU/ml).

In hGH deficiency, the response to stimulation test is absent or blunted (short stature by hGH deficiency; hypopituitarism from various origins).

XVI. PRECAUTIONS AND WARNINGS

Safety

For in vitro diagnostic use only.

The human blood components included in this kit have been tested by European approved and/or FDA approved methods and found negative for HBsAg, anti-

HCV, anti-HIV-1 and 2. No known method can offer complete assurance that human blood derivatives will not transmit hepatitis, AIDS or other infections.

Therefore, handling of reagents, serum or plasma specimens should be in accordance with local safety procedures.

All animal products and derivatives have been collected from healthy animals.

Bovine components originate from countries where BSE has not been reported.

Nevertheless, components containing animal substances should be treated as potentially infectious.

Avoid any skin contact with all reagents. In case of contact, wash thoroughly with water.

Do not smoke, drink, eat or apply cosmetics in the working area. Do not pipette by mouth. Use protective clothing and disposable gloves.

XVII. BIBLIOGRAPHY

1. CAMANNI F., MASSARA F., BELFORTE L., ROSATELLO A.,

MOLENATTI G.M. (1977)

Effect of dopamine on plasma growth hormone and prolactin levels in

normal and acromegalic subjects.

J. Clin. Endo. and Metab., 44:465.

DAUGHADAY W.H. (1981)

The adenohypophysis

In : "Textbook of Endocrinology", R.H. Williams ed., W.B. Saunders,

Philadelphia, p;73.

3. DROBNY E.C., AMBURN K., BAUMANN G. (1983)

Circadian variation of basal plasma growth hormone in man.

J. Clin. Endo. and Metab., 57:524-528.

4. HASHIDA S., NAKAWAGA K., ISHIKAWA E., OHTAKI S. (1985)

Basal level of human growth hormone (hGH) in normal serum.

Clin. Chim. Acta, 151:185-186.

5. LEWIS V.J. et al. (1980)

Human growth hormone : A complex of proteins.

Rec. Progr. Horm. Res., 36:488.

6. LI C.H. (1974)

Human growth hormone : perspective on its chemistry and

physiology.

In : "Advances in human growth hormone research", S. Raiti ed. U.S.

Department of Health, Education and Welfare Publ. DMEW publ. no.

(NJH) 74-612, p. 321.

REUTENS AT. (1995)

Evaluation and application of a highly sensitive assay for serum growth hormone (GH) in the study of adult GH deficiency.

J. Clin. Endocrinol. Metab., 80(2): 480-485

CROWLEY S. et al. (1995)

Growth and the growth hormone axis in prepubertal children with asthma.

J. Pediatr. 126(2): 297-303.

KELLY JT. et al. (1993)

Effect of different oral oestrogen formulations on insulin-like growth factor I, growth hormone and growth hormone binding protein in post-menopausal women.

Clin. Endocrinol. 39(5) : 561-567

XVIII. SUMMARY OF THE PROTOCOL

CALIBRATORS

(µl)

SAMPLE(S)

CONTROLS

(µl)

Calibrators (0-5)

Controls, Samples

Working Anti-hGH-HRP conjugate

Incubate for 30 minutes at room temperature

Aspirate the contents of each well.

Wash 3 times with 400 µl of Wash Solution and aspirate.

Chromogenic Solution 100

Incubate for 30 minutes at room temperature

Stop Solution 100

100

Read on a microtiterplate reader and record the absorbance of each well at 450 nm

(versus 630 or 650 nm).

DIAsource Catalogue Nr :

KAP1081

P.I. Number :

1700573/en

Revision nr :

090504/1

Revision date : 2009-05-04

Lire entièrement le protocole avant utilisation.

hGH-EASIA

I. BUT DU DOSAGE

Trousse de dosage immunoenzymatique pour la mesure quantitative in vitro de l’hormone de croissance (hGH) dans le sérum et le plasma humain.

II. INFORMATIONS GENERALES

A. Nom du produit : DIAsource hGH-EASIA kit

B. Numéro de catalogue : KAP1081 : 96 tests

C. Fabriqué par : DIAsource ImmunoAssays S.A.

Rue de l'Industrie, 8 B-1400 Nivelles Belgium.

Pour une assistance technique ou une information sur une commande :

Tel : +32 (0)67 88.99.99 Fax : +32 (0)67 88.99.96

III. CONTEXTE CLINIQUE

A. Activités biologiques

La hGH est une hormone polypeptide (poids moléculaire 21,500 Da) produites par les cellules acidophiles de l’hypophyse antérieure sous contrôle de deux substances principales : le facteur de libération de l’hormone de croissance (GRF) et un agent inhibiteur, la somatostatine. Les voies neuro-endocrines dopaminergiques, adrénergiques et sérotoninergiques jouent également un rôle important dans le contrôle de la sécrétion de la hGH. Les stimulus excitateurs de la sécrétion en hGH sont provoqués par l’hypoglycémie, le sport, le jeûne, des repas hautement protéiques, le sommeil profond, le stress, glucagon, L Dopa, les acides aminés, etc. Les stimulus inhibiteurs sont provoqués par le glucose, le cortisol, la hGH et les acides gras libres. Du fait de sa courte demi-vie (±25 minutes) et de la fréquence des stimulus excitateurs ou inhibiteurs, la concentration de la hGH varie fréquemment de façon irrégulière dans le sérum.

Une des principales fonctions physiologiques de la hGH est d’agir sur le foie et d’autres tissus pour produire la Somatomédine, qui induit alors la croissance par action directe sur les tissus cibles. En contraste avec la hGH, la concentration de somatomédine dans le sérum reste stable car la grande partie est liée aux protéines de plasma de circulation.

B. Application clinique

· Retard de croissance

L’hyposécrétion en hGH est une des causes différentes de la petite taille chez les enfants. Le dosage de la hGH sérique avec un test hautement sensible, particulièrement après un stimulus provocateur (absence de réponse), est important pour établir ce diagnostic car ce groupe de patients peut être traité par administration de hGH.

Hypopituitarisme

Le dosage en hGH sérique est également un index de la fonction pituitaire lorsque l’hypopituitarisme est suspecté (soit idiopathique ou dû à une tumeur ou chirurgie).

Gigantisme et acromégalie

Le dosage en hGH sérique, particulièrement après un test provocateur inhibiteur (absence de réponse), est important pour établir le diagnostic de l’hypersécrétion en hGH due à une tumeur pituitaire acidophilique.

Ceci résulte en un gigantisme chez les enfants et une acromégalie chez les adultes. Les deux disfonctionnements peuvent être traités par chirurgie ou radiation.

IV. PRINCIPES DU DOSAGE

La DIAsource hGH-EASIA est une « Enzyme Amplified Sensitivity

Immunoassay » en phase solide effectuée sur des micro-plaques. Les calibrateurs et les échantillons réagissent avec l’anticorps de capture monoclonal (MAb 1) recouvrant les puits et avec un anticorps monoclonal (MAb 2) marqué avec la peroxydase (HRP). Après une période d’incubation permettant la formation d’un sandwich: MAb 1 recouvert – hGH – MAb 2 – HRP, la micro-plaque est lavée afin d’enlever l’anticorps libre marqué enzymatiquement. L’anticorps lié marqué enzymatiquement est mesuré avec une réaction chromogénique. Une solution chromogénique (TMB – H

) est ajoutée et incubée. La réaction est arrêtée avec l’addition de Solution d’arrêt et la micro-plaque est alors lue à la longueur d’onde appropriée. La quantité de remplacement de substrat est déterminée colorimétriquement par la mesure de l’absorbance, qui est proportionnelle à la concentration en hGH.

Une courbe de calibration est dessinée et la concentration en hGH dans les

échantillons est déterminée par interpolation de la courbe de calibration.

V. REACTIFS FOURNIS

Reactifs 96 tests

Kit

Code

Couleur

Reconstitution

Micro-plaque de titration sécable avec 96 puits recouvert d’anti hGH

(anticorps monoclonal)

96 puits bleu Prêt à l’emploi

Diluer 40 x avec le tampon du conjugué

Ab HRP CONC

Conjugué: anti-hGH marqué avec de l’HRP (anticorps monoclonal) dans un tampon stabilisant

CONJ BUF

Tampon du conjugué: un tampon

TRIS-HCl avec de l'albumine bovine et du thymol

CAL 0

Calibrateur zéro dans du sérum de brebis et du thymol

CAL N

Calibrateur N = 1 à 5

(cfr. Valeurs exactes sur chaque flacon) dans du sérum de brebis et du thymol

WASH SOLN CONC

Solution de Lavage

(Tris-HCl)

CONTROL N

Contrôles - N = 1 ou 2 dans du sérum humain et du thymol

CHROM TMB

Solution Chromogène TMB

(Tetramethylbenzydine)

STOP SOLN

Solution d’arrêt: HCl 1N

1 flacon

0,2 ml

1 flacon

6 ml

1 flacon lyophilisé

1 flacon

10 ml

Jaune

Rouge

Jaune

5 flacons lyophilisés

Jaune

2 flacons lyophilisés

Gris

1 vial

12 ml

1 vial

12 ml

Brun

Blanc

Prêt à l’emploi

Ajouter 2,0 ml d’eau distillée

Ajouter 0,5 ml d’eau distillée

Diluer 200 x avec de l’eau distillée (utiliser un agitateur magnétique).

Ajouter 0,5 ml d’eau distillée

Prêt à l’emploi

Note: 1. Utiliser le calibrateur zéro pour la dilution des échantillons.

2. 1 μIU de la préparation du calibrateur est équivalent à 1 μIU de 2 nd

IS 98/574.

VI. MATERIELS NON FOURNIS

Le matériel mentionné ci-dessous est requis mais non fourni avec la trousse:

1. Eau distillée d’une haute qualité

2. Pipettes pour distribuer: 50 μl, 200 µl, 500 μl et 2 ml (l’utilisation de pipettes précises et de pointes en plastique est recommandée)

Agitateur vortex

Agitateur magnétique

Laveur de micro-plaques

Lecteur de micro-plaques capable de lire à 450 nm et 650 nm (lecture bichromatique)

VII. PREPARATION DES REACTIFS

A. Calibrateurs : Reconstituer le calibrateur zéro avec 2,0 ml d’eau distillée et les autres calibrateurs avec 0,5 ml d’eau distillée..

B. Contrôles : Reconstituer les contrôles avec 0,5 ml d’eau distillée.

C. Conjugué anti-hGH-HRP de travail: Préparer un volume adéquat de conjugué anti-hGH-HRP de travail en ajoutant 25 µl du conjugué anti-hGH-

HRP concentré (40x) à 1 ml de tampon du conjugué. Utiliser un agitateur magnétique pour homogénéiser. Il est recommandé de faire une dilution extemporanée.

D. Solution de Lavage : Préparer un volume adéquat de Solution de Lavage en ajoutant 199 volumes d’eau distillée à 1 volume de Solution de Lavage

(200x). Utiliser un agitateur magnétique pour homogénéiser. Eliminer la

Solution de Lavage non utilisée à la fin de la journée.

VIII. STOCKAGE ET DATE D’EXPIRATION DES REACTIFS

§ Avant l’ouverture ou la reconstitution, tous les composants de la trousse sont stables jusqu’à la date d’expiration, indiquée sur l’étiquette, si la trousse est conservée entre 2 et 8°C.

Des barrettes inutilisées doivent être gardées, à 2-8°C, dans un sachet cacheté contenant un desiccant jusqu’à la date d’expiration.

§ Après reconstitution, les calibrateurs et les contrôles sont stables pendant 7 jours entre 2 et 8°C. Pour de plus longues périodes de stockage, des aliquots devront être réalisés et ceux-ci seront gardés à –20°C pendant 3 mois.

Eviter des cycles de congélation et décongélation successifs.

§ La Solution de Lavage concentrée est stable à température ambiante jusqu’à la date d’expiration.

§ La Solution de Lavage préparée doit être utilisée le jour même.

Après la première utilisation, le conjugué est stable jusqu’à la date d’expiration, si celui-ci est conservé entre 2 et 8°C dans le flacon d’origine correctement fermé.

§ Des altérations dans l’apparence physique des réactifs de la trousse peuvent indiquer une instabilité ou une détérioration.

IX. PREPARATION ET STABILITE DE L’ECHANTILLON

Les échantillons de sérum ou de plasma doivent être gardés entre 2 et 8°C.

Si le test n’est pas réalisé dans les 24 heures, un stockage en aliquots à

-20°C est recommandé.

§ Eviter des cycles de congélation et décongélation successifs.

Avant l’utilisation des échantillons, ceux-ci doivent être à température ambiante. On recommande de vortexer les échantillons avant de les utiliser.

Le sérum ou le plasma (héparnés ou EDTA) donne des résultats similaires.

Y(sérum) = 0,89 x (plasma EDTA) + 0,14 r=0.98 n=46

Y(sérum) = 1,02 x (plasma hép.) + 0.01

§ Ne pas utiliser d’échantillons hémolysés r=0.98 n=46

X. MODE OPERATOIRE

A. Notes de manipulation

Ne pas utiliser la trousse ou ses composants après avoir dépassé la date d’expiration.

Ne pas mélanger du matériel provenant de trousses de lots différents.

Mettre tous les réactifs à température ambiante avant utilisation.

Mélangez tous les réactifs et les échantillons sous agitation douce.

Réaliser les calibrateurs, les contrôles et les échantillons en double. Un alignement vertical est recommandé.

Utiliser un récipient en plastic propre pour préparer la Solution de Lavage.

Pour éviter toute contamination croisée, utiliser une nouvelle pointe de pipette pour l’addition de chaque réactif et échantillon.

Pour la distribution de la solution du chromogène et de la solution d’arrêt,

éviter des pipettes avec des parties en métal.

Des pipettes de haute précision ou un équipement de pipetage automatique permettent d’augmenter la précision.

Respecter les temps d’incubation.

Afin d’éviter des anomalies, le délai entre le pipetage du premier calibrateur et celui du dernier échantillon doit être limité au délai indiqué à la section XIII paragraphe E (Délai).

Préparer une courbe d’étalonnage pour chaque nouvelle série d’expériences, ne pas utiliser les données d’expériences précédentes.

Distribuer la solution du chromogène dans les 15 minutes après le lavage de la micro-plaque de titration.

Eviter exposition à la lumière du soleil lors de l’incubation avec la solution du chromogène.

B. Mode opératoire

1. Sélectionner le nombre de barrettes nécessaires pour le test. Les barrettes inutilisées doivent être cachetées de nouveau dans le sachet avec un desiccant et gardées à 2-8°C.

Placer les barrettes dans le support.

Pipeter 50 µl de chaque Calibrateur, Contrôle et Echantillon dans les puits appropriés.

Pipeter 50 µl du conjugué anti-hGH-HRP de travail dans tous les puits.

Incuber pendant 30 minutes à température ambiante Il est obligatoire de respecter la durée de trente minutes pour cette incubation.

Aspirer le liquide de chaque puits.

Laver la plaque 3 fois en:

§ distribuant 0,4 ml de la Solution de Lavage dans chaque puits

§ aspirant le contenu de chaque puits

Pipeter 100 µl de la solution chromogène dans chaque puits dans les 15 minutes après la phase de lavage.

Incuber la micro-plaque pendant 30 minutes à température ambiante,

éviter exposition à la lumière du soleil.

10. Pipeter 100 µl de la Solution d’arrêt dans chaque puits.

11. Lire les absorbances à 450 nm (filtre de référence 630 nm ou 650 nm) endéans l’heure et calculer les résultats comme décrits dans la section XI.

XI. CALCUL DES RESULTATS

1. Lire la plaque à 450 nm contre un filtre de référence mis à 650 nm (ou 630

3. nm).

Calculer la moyenne de chaque détermination réalisée en double.

Dessiner sur un graphique linéaire ou semi-logarithmique les cpm

(ordonnées) pour chaque calibrateur contre la concentration

5. correspondante en hGH (abscisses) et dessiner une courbe de calibration à l’aide des points de calibration, en connectant les points avec des lignes droites.

Lire la concentration pour chaque contrôle et échantillon par interpolation sur la courbe de calibration.

L’analyse informatique des données simplifiera les calculs. Si un système d’analyse de traitement informatique des données est utilisé, il est recommandé d’ utiliser la fonction « 4 paramètres » du lissage de courbes.

XII. DONNEES TYPES

Les données représentées ci-dessous sont fournies pour information et ne peuvent jamais être utilisées à la place d’une courbe d’étalonnage. hGH-EASIA Unités OD

Calibrateur 0 μIU/ml

0,45 μIU/ml

5,4 μIU/ml

12,9 μIU/ml

43,5 μIU/ml

98,0 μIU/ml

0,030

0,062

0,226

0,501

1,429

2,330

XIII. PERFORMANCE ET LIMITES

A. Sensibilité

Vingt calibrateurs zéro ont été testés en parallèle avec un assortiment d’autres calibrateurs. La limite de détection, définie comme la concentration apparente située 2 déviations standards au-dessus de la moyenne DO déterminée à la fixation zéro, était de 0,17 μIU/ml.

B. Spécificité

Des hormones cross-réactives ont été ajoutées à un control de valeur haute en hGH et à un control de valeur basse. La réponse hGH apparente a été mesurée.

Hormone ajoutée hGH C1

µIU/ml hGH C2

µIU/ml

- hCG 100000 mIU/ml hPL 10000 ng/ml

PRL 12500 ng/ml

1,9

2,0

1,4

1,8

C. Précision

INTRA-ESSAI

Serum

<X> ± SD

(μIU/ml)

6,90 ± 0,34

16,61 ± 0,90

(%)

4,9

5,4

Serum

INTER-ESSAI

<X> ± SD

(μIU/ml)

11,4

0,9

23,5

1,2

SD : Déviation Standard; CV: Coéfficient de variation

13,5

14,3

13,0

12,6

(%)

8,1

5,1

D. Exactitude

Echantillon

Sérum

Plasma

TEST DE RECUPERATION hGH ajoutée

(μIU/ml) hGH récupérée

(μIU/ml)

4,3

13,5

26,8

52,1

4,3

13,5

26,8

52,1

4,1

12,8

28,1

58,9

4,6

13,2

25,3

53,0

Récupération

(%)

105

113

106

102

TEST DE DILUTION

Echantillon Dilution Concent. théorique

(μIU/ml)

Concent. Mesurée

(μIU/ml)

Sérum 1 1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

48,8

24,4

12,2

6,1

3,1

97,7

57,0

27,7

13,6

6,4

3,0

Sérum 2 1/1

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

10,6

5,3

2,7

1,3

0,7

21,2

9,3

4,6

2,2

1,1

0,6

Les échantillons ont été dlilué avec le calibrateur zéro.

Facteur de conversion:

1µIU de la préparation du calibrateur hGH-EASIA = 0,33 ng

E. Délai entre la distribution du dernier calibrateur et celle de

l’échantillon

Comme montré ci-dessous, les résultats d’un essai restent précis même quand un

échantillon est distribué 60 minutes après que le calibrateur a été ajouté aux tubes avec l’anticorps.

DELAI

0 min 10 min 20 min 30 min 45 min 60 min

4,0

13,5

3,6

15,0

3,3

13,8

3,3

13,0

3,0

12,6

3,8

13,0

F. Effet crochet

Un échantillon dopé avec de l’hGH jusqu’à 4000 μIU/ml donne des DO supérieurs au dernier point de calibration.

XIV. CÔNTROLE DE QUALITE INTERNE

§ Si les résultats obtenus pour le(s) contrôle(s) 1 et/ou 2 ne sont pas dans l’intervalle spécifié sur l’étiquette du flacon, les résultats ne peuvent pas être utilisés à moins que l'on ait donné une explication satisfaisante de la nonconformité.

Chaque laboratoire est libre de faire ses propres stocks d’échantillons contrôles, lesquels doivent être congelés aliquotés. Des contrôles qui contiennent de l’azide influenceront la réaction enzymatique et ne peuvent pas être utilisés.

Les critères d’acceptation pour les écarts des valeurs in duplo des

échantillons doivent être basés sur les pratiques de laboratoire courantes.

On recommande que les contrôles soient testés de façon routinière comme des échantillons inconnus pour mesurer la variabilité du test. La réalisation du test doit être suivie avec des fichiers de contrôle de qualité des contrôles.

On recommande de vérifier visuellement la courbe sélectionnée par l’ordinateur.

XV. VALEURS ATTENDUES

Les valeurs sont donnés à titre d’ information; chaque laboratoire doit établir ses propres écarts de valeurs.

Chez les sujets normaux, la sécrétion de l’hormone de croissance (hGH) est pulsatile. Durant la journée, le domaine des concentrations en hGH est <0,2-10

μIU/ml. Pendant le sommeil, les concentrations en hGH augmentent constamment

(± 30 μIU/ml).

La sécrétion en hGH est fortement stimulée par le sport et le stress (ponction veineuse, hypoglycémie, ...), mais décroît en hyperglycémie.

Chez les sujets normaux (n=34), deux heures après une prise orale de glucose (75 g pour les adultes), les taux en hGH étaient inférieurs à 10 μIU/ml et la réponse hGH aux tests de stimulation (administration d’insuline, arginine, glucagon) excédait 20 μIU/ml.

Les taux en hGH étaient élevés (même après prise de glucose) en acromégalie

(> 10 µIU/ml).

En déficience de hGH, la réponse aux tests de stimulation est absente ou faible

(petite taille par déficience en hGH; hypopituitarisme de différentes origines).

XVI. PRECAUTIONS ET AVERTISSEMENTS

Sécurité

Pour utilisation en diagnostic in vitro uniquement.

Les composants de sang humain inclus dans ce kit ont été évalués par des méthodes approuvées par l’Europe et/ou la FDA et trouvés négatifs pour HBsAg, l’anti-HCV, l’anti-HIV-1 et 2. Aucune méthode connue ne peut offrir l'assurance complète que des dérivés de sang humain ne transmettront pas d’hépatite, le sida ou toute autre infection. Donc, le traitement des réactifs, du sérum ou des

échantillons de plasma devront être conformes aux procédures locales de sécurité.

Tous les produits animaux et leurs dérivés ont été collectés d'animaux sains. Les composants bovins proviennent de pays où l’ESB n'a pas été détectée.

Néanmoins, les composants contenant des substances animales devront être traités comme potentiellement infectieux.

Eviter le contact de la peau avec tous les réactifs. En cas de contact, laver avec beaucoup d’eau.

Ne pas fumer, ni boire, ni manger ni appliquer de produits cosmétiques dans les laboratoires. Ne pas pipeter avec la bouche. Utiliser des vêtements protecteurs et des gants à usage unique.

XVII. BIBLIOGRAPHIE

1. CAMANNI F., MASSARA F., BELFORTE L., ROSATELLO A.,

MOLENATTI G.M. (1977)

Effect of dopamine on plasma growth hormone and prolactin levels in

normal and acromegalic subjects.

J. Clin. Endo. and Metab., 44:465.

DAUGHADAY W.H. (1981)

The adenohypophysis

In : "Textbook of Endocrinology", R.H. Williams ed., W.B. Saunders,

Philadelphia, p;73.

3. DROBNY E.C., AMBURN K., BAUMANN G. (1983)

Circadian variation of basal plasma growth hormone in man.

J. Clin. Endo. and Metab., 57:524-528.

4. HASHIDA S., NAKAWAGA K., ISHIKAWA E., OHTAKI S. (1985)

Basal level of human growth hormone (hGH) in normal serum.

Clin. Chim. Acta, 151:185-186.

5. LEWIS V.J. et al. (1980)

Human growth hormone : A complex of proteins.

Rec. Progr. Horm. Res., 36:488.

6. LI C.H. (1974)

Human growth hormone : perspective on its chemistry and

physiology.

In : "Advances in human growth hormone research", S. Raiti ed. U.S.

Department of Health, Education and Welfare Publ. DMEW publ. no.

(NJH) 74-612, p. 321.

REUTENS AT. (1995)

Evaluation and application of a highly sensitive assay for serum growth hormone (GH) in the study of adult GH deficiency.

J. Clin. Endocrinol. Metab., 80(2): 480-485

CROWLEY S. et al. (1995)

Growth and the growth hormone axis in prepubertal children with asthma.

J. Pediatr. 126(2): 297-303.

KELLY JT. et al. (1993)

Effect of different oral oestrogen formulations on insulin-like growth factor I, growth hormone and growth hormone binding protein in post-menopausal women.

Clin. Endocrinol. 39(5) : 561-567

XVIII. RESUME DU PROTOCOLE

CALIBRATEURS

(µl)

ECHANTILLON(S)

CONTROLES

(µl)

Calibrateurs (0-5)

Echantillons , Contrôles

Conjugué anti-hGH-HRP de travail

Incuber pendant 30 minutes à température ambiante.

Aspirer le contenu de chaque puits.

Laver 3 fois avec 400 µl de la Solution de Lavage et aspirer.

Solution du chromogène 100

Incuber pendant 30 min à température ambiante.

Solution d’arrêt 100

100

Lire sur un lecteur de micro-plaques et enregistrer l’absorbance de chaque puits à 450 nm (contre 630 ou 650 nm) et 490 nm (contre 630 ou 650 nm)

DIAsource Catalogue Nr :

KAP1081

P.I. Number :

1700573/fr

Revision nr :

090504/1

Date de révision : 2009-05-04

Vor Gebrauch des Kits lesen Sie bitte diese Packungsbeilage.

hGH-EASIA

I. VERWENDUNGSZWECK

Ein immunenzymetrisches Assay für die quantitative in vitro Bestimmung von humanem

Wachstumshormon (hGH) in Serum und Plasma.

II. ALLGEMEINE INFORMATION

A. Handelsbezeichnung : DIAsource hGH-EASIA Kit

B. Katalognummer : KAP1081 : 96 Tests

C. Hergestellt von: DIAsource ImmunoAssays S.A.

Rue de l'Industrie, 8, B-1400 Nivelles, Belgien.

Für technische Unterstützung oder Bestellungen wenden Sie sich bitte an:

Tel : +32 (0)67 88.99.99 Fax : +32 (0)67 88.99.96

Für Deutschland : Kostenfreie Rufnummer : 0800 1 00 85 74 - Kostenfreie Faxnummer : 0800 1 00 85 75

E-mail Ordering : [email protected]

III. KLINISCHER HINTERGRUND

A. Biologische Aktivität hGH ist ein Polypeptid mit einem Molekulargewicht von 21.500 Da. Synthetisiert in den azidophilen Zellen des Hypophysenvorderlappens (HVL) erfolgt die Ausschüttung unter der Kontrolle von Somatotropin-

Releasing-Faktor (GRF) und Somatostatin als inhibierendem Agens. Neurotransmitter wie Dopamin,

Adrenalin und Serotonin spielen ebenfalls eine wichtige Rolle in der hGH-Sekretion. Stimulierend auf die hGH-Ausschüttung wirken Hypoglykämie, Sport, Fasten, Nahrung mit hohem Proteingehalt, Schlaf, Stress,

Glucagon, L-Dopa, Aminosäuren, usw. Glucose, Cortisol, hGH und freie Fettsäuren hingegen hemmen die

Freisetzung von hGH. Neben der kurzen Halbwertszeit von hGH (± 25 Minuten) ist die Vielzahl der die

Ausschüttung beeinflussenden Faktoren für die häufige und große Variationsbreite der hGH-Spiegel im

Serum verantwortlich.

Eine der Hauptwirkungen von hGH ist die Induktion der Somatomedin-Produktion in Leber und anderen

Geweben. Somatomedine beeinflussen das Wachstum durch direkte Wirkung auf die entsprechenden

Zielorgane. Im Gegensatz zu hGH bleibt die Somatomedin-Konzentration im Serum durch die weit gehende

Bindung an zirkulierende Plasmaproteine stabil.

B. Klinische Anwendung

· Minderwuchs

Zu geringe hGH-Ausschüttung ist eine der möglichen Ursachen für Minderwuchs bei Kindern. Die

Bestimmung von hGH im Serum nach einem Provokationstest (ausbleibende Reaktion) mittels eines sehr sensitiven Tests ist eine wichtige Methode zur Identifizierung solcher Patientengruppen, da diese Patienten durch Gabe von hGH sehr gut therapiert werden können.

Hypopituitarismus

Die Bestimmung von hGH im Serum gibt auch einen Hinweis auf die Hypophysenfunktion, falls eine

Hypophysenunterfunktion (entweder idiopathisch oder bedingt durch einen Tumor oder chirurgischen

Eingriff) vermutet wird.

Gigantismus und Akromegalie

Die hGH-Bestimmung im Serum vor allem nach einem Inhibitionstest (ausbleibende Reaktion) ist wesentlicher Bestandteil der Diagnose einer tumorbedingten hGH-Überproduktion. hGH-Überproduktion führt bei Kindern zu Riesenwuchs, bei Erwachsenen zu Akromegalie. Beide Erkrankungen können durch einen chirurgischen Eingriff oder Bestrahlung therapiert werden.

IV. GRUNDSÄTZLICHES ZUR DURCHFÜHRUNG

Der DIAsource hGH-EASIA ist ein solid phase-Enzyme Amplified Sensitive

Immunoassay (EASIA) im Mikrotiterplattenformat. Kalibratoren und Proben reagieren mit dem primären monoklonalen Antikörper (MAk 1), mit dem die

Wells der Mikrotiterplatte beschichtet sind, und mit einem monoklonalen

Antikörper (MAk 2), der mit Meerrettich-Peroxidase (MRP) markiert ist. Nach einer Inkubationsphase bildet sich ein Sandwich-Komplex: MAk 1 - hGH - MAk

2 - MRP; nicht gebundene enzymbeschriftete Antikörper werden durch Waschen der Mikrotiterplatte entfernt. Gebundene enzymbeschriftete Antikörper werden durch eine Farbreaktion gemessen. Chromogene Lösung (TMB – H

) wird hinzugefügt und inkubiert. Die Reaktion wird durch Hinzufügen einer

Stopplösung beendet und die Mikrotiterplatte wird bei adäquater Wellenlänge ausgewertet. Die Menge an Substratumsatz wird kolorimetrisch durch Messung der Absorption bestimmt, die proportional zur hGH-Konzentration ist.

Es wird eine Kalibrationskurve erstellt und die hGH-Konzentration in den Proben wird durch Interpolation von der Kalibrationskurve bestimmt.

V. MITGELIEFERTE REAGENZIEN

Reagenzien 96 Test

Kit

Farb-

Code

Rekonstitution

96 Wells Blau gebrauchsfertig Mikrotiterplatte mit

96 Anti-hGH beschichteten, abbrechbaren Wells

(monoklonale

Antikörper)

Ab HRP CONC

Konjugat: MRP beschriftete AntihGH (monoklonale Antikörper) in Stabilisierungspuffer

1 Gefäß

0,2 ml

Gelb 40 fach mit

Konjugatpuffer verdünnen

CONJ BUF

Konjugatpuffer: TRIS-HCl Puffer mit Rinderserumalbumin und

Thymol

1 Gefäß

6 ml

Rot gebrauchsfertig

1 Gefäß lyophilisiert

Gelb 2,0 ml dest. Wasser

zugeben

CAL 0

Null-Kalibrator in Schafserum und Thymol

CAL N

Kalibrator - N = 1 bis 5

(genaue Werte auf Gefäß-

Etiketten) in Schafserum und

Thymol

WASH SOLN CONC

Waschlösung (Tris-HCl)

5 Gefäße lyophilisiert

1 Gefäß

10 ml

2 Gefäße lyophilisiert

Gelb

Braun

Silber

0,5 ml dest. Wasser

zugeben

200 x mit dest. Wasser verdünnen

(Magnetrührer benutzen).

0,5 ml dest. Wasser

zugeben

CONTROL N

Kontrollen - N = 1 oder 2

Humanserum und Thymol

CHROM TMB

Chromogenes TMB

(Tetramethylbenzydin)

1 Gefäß

12 ml

Braun gebrauchsfertig

STOP SOLN

Stopplösung: HCl 1N

1 Gefäß

12 ml weiβ gebrauchsfertig

Bemerkung: 1. Benutzen Sie den Null-Kalibrator zur Probenverdünnung.

2. 1 μIU der Kalibratorzubereitung ist äquivalent zu 1 μIU 2 nd

98/574.

VI. ZUSÄTZLICH BENÖTIGTES MATERIAL

Folgendes Material wird benötigt, aber nicht mit dem Kit mitgeliefert:

Hochwertiges destilliertes Wasser

Pipetten: 50 μl, 200 µl, 500 μl und 2 ml (Verwendung von

Präzisionspipetten mit Einwegplastikspitzen wird empfohlen)

Vortex Mixer

Magnetrührer

Waschgerät für Mikrotiterplatten

Mikrotiterplatten-Lesegerät zur Auswertung bei 450 nm und 650 nm

(bichromatischer Auswertung)

VII. VORBEREITUNG DER REAGENZIEN

A. Kalibratoren: Rekonstituieren Sie den Null-Kalibrator mit 2,0 ml dest.

Wasser, die anderen Kalibratoren mit 0,5 ml dest. Wasser.

B. Kontrollen: Rekonstituieren Sie die Kontrollen mit 0,5 ml dest. Wasser.

C. Anti-hGH-HRP Konjugat Gebrauchslösung: Bereiten Sie eine geeignete

Menge Konjugatlösung zu indem Sie 25 µl des Anti-hGH-HRP Konzentrats zu 1 ml Konjugatpuffer geben. Benutzen Sie einen Vortex zum

Homogenisieren. Es ist die spontane Zubereitung gefordert.

D. Waschlösung: Bereiten Sie ein angemessenes Volumen Waschlösung aus einem Anteil Waschlösung (200x) mit 199 Anteilen dest. Wasser zu.

Verwenden Sie einen Magnetrührer zum gleichmäßigen Durchmischen.

Werfen Sie die nicht benutzte Waschlösung am Ende des Tages weg.

VIII. AUFBEWAHRUNG UND LAGERUNG DER REAGENZIEN

§ Vor dem Öffnen oder der Rekonstitution sind die Reagenzien des Kits bis zum Ablaufdatum (Angaben auf Etikett) bei Lagerung bei 2°C bis 8°C stabil.

Nicht verwendete Mikrotiterstreifen sollten bis zum Verfallsdatum dicht in der Folie verschlossen mit Trockenmittel bei 2° bis 8°C gelagert werden.

§ Nach der Rekonstitution sind die Kalibratoren und Kontrollen bei 2°C bis

8°C 7 Tage stabil. Aliquots müssen bei längerer Aufbewahrung bei -20°C eingefroren werden, dann sind Sie 3 Monate haltbar. Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen.

Die konzentrierte Waschlösung ist bei Raumtemperatur bis zum

Verfallsdatum haltbar.

Frisch zubereitete Waschlösung sollte am selben Tag benutzt werden.

§ Nach der ersten Benutzung ist das Konjugat bei Aufbewahrung im

Originalgefäß und bei 2° bis 8° C bis zum Ablaufdatum stabil.

§ Veränderungen im Aussehen der Kitkomponenten können ein Anzeichen für Instabilität oder Zerfall sein.

IX. PROBENSAMMLUNG UND -VORBEREITUNG

§ Serum- oder Plasmaproben müssen bei 2-8°C aufbewahrt werden.

§ Falls der Test nicht innerhalb von 24 Std. durchgeführt wird, ist die

Aufbewahrung bei -20°C erforderlich.

Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren und Auftauen.

Vor Gebrauch müssen alle Proben Raumtemperatur erreichen.

Vortexmischen der Proben wird vor Gebrauch empfohlen.

Serum-, Heparinisiertes Plasma- oder EDTA-Plasmaproben liefern ähnliche

Ergebnisse.

Y(Serum) = 0,89 x (EDTA-Plasma) + 0,14 r=0,98 n=46

Y(Serum) = 1,02 x (Hep. Plasma) + 0,01 r=0,98 n=46

§ Keine hämolytischen Proben benutzen

X. DURCHFÜHRUNG

A. Bemerkungen zur Durchführung

Verwenden Sie den Kit oder dessen Komponenten nicht nach

Ablaufdatum.

Vermischen Sie Materialien von unterschiedlichen Kit-Chargen nicht.

Bringen Sie alle Reagenzien vor der Verwendung auf Raumtemperatur.

Mischen Sie alle Reagenzien und Proben gründlich durch sanftes Schütteln oder Rühren.

Führen Sie Kalibratoren, Kontrollen und Proben doppelt aus. Vertikale

Ausrichtung wird empfohlen.

Verwenden Sie zur Zubereitung der Waschlösung reinen

Kunststoffbehälter.

Verwenden Sie saubere Einwegpipettenspitzen, um Kreuzkontamination zu vermeiden.

Verwenden Sie zur Pipettierung der chromogene Lösung und der

Stopplösung keine Pipetten mit Metallteilen.

Präzisionspipetten oder ein automatisches Pipettiersystem erhöhen die

Präzision.

Achten Sie auf die Einhaltung der Inkubationszeiten.

Zur Vermeidung von Drift muss die Zeit zwischen dem Pipettieren des ersten Kalibrators und der letzten Probe auf die Zeit beschränkt werden, die in Abschnitt XIII Absatz E (Zeitverzögerung) erwähnt wird.

Erstellen Sie für jeden Durchlauf eine Kalibrationskurve, verwenden Sie nicht die Daten von früheren Durchläufen.

Pipettieren Sie die chromogene Lösung innerhalb von 15 Minuten nach dem Waschen der Mikrotiterplatte.

Während der Inkubation mit der chromogene Lösung ist die

Mikrotiterplatte vor direktem Sonnenlicht zu schützen.

B. Durchführung

1. Wählen Sie die erforderliche Anzahl der Streifen für den Lauf aus. Nicht verwendete Mikrotiterstreifen sollten wieder dicht in der Folie verschlossen mit Trockenmittel bei 2° bis 8°C gelagert werden.

Befestigen Sie die Streifen im Halterahmen.

Pipettieren Sie jeweils 50 µl Kalibrator, Kontrolle und Probe in die

5. entsprechenden Wells.

Pipettieren Sie 50 µl Anti-hGH-HRP Gebrauchslösung in alle Wells.

Inkubieren Sie 30 Minuten bei Raumtemperatur - Es ist zwingend

7. notwendig, die 30 Minuten Inkubationszeit einzuhalten.

Saugen Sie die Flüssigkeit aus jedem Well ab.

Waschen Sie die Platte dreimal:

§ pipettieren Sie 0,4 ml Waschlösung in jeden Well

§ saugen Sie der Inhalt jedes Wells ab

8. Pipettieren Sie 100 µl der chromogene Lösung innerhalb von 15 Minuten nach dem Waschvorgang in jeden Well.

9. Inkubieren Sie die Mikrotiterplatte 30 Minuten bei Raumtemperatur; vermeiden Sie direktes Sonnenlicht.

10. Pipettieren Sie 100 µl der Stopplösung in jeden Well.

11. Werten Sie die Absorptionen bei 450 nm (Referenzfilter 630 nm oder 650 nm) innerhalb 1 Stunde aus und berechnen Sie die Resultate wie in

Abschnitt XI beschrieben.

XI. BERECHNUNG DER ERGEBNISSE

1. Werten Sie die Platte bei 450 nm gegen einen Referenzfilter auf 650 nm

(oder 630 nm) aus.

Berechnen Sie den Durchschnitt aus den Doppelbestimmungen.

Tragen Sie auf semilogarithmischem oder linearem Millimeterpapier den c.p.m. (Ordinate) für jeden Standard gegen die entsprechende

Konzentration hGH (Abszisse) und zeichnen Sie eine Kalibrationskurve durch die Kalibrationspunkte, indem Sie die eingetragenen Punkte durch gerade Linien verbinden.

Berechnen Sie die Konzentration für jede Kontrolle und Probe durch

Interpolation aus der Kalibrationskurve.

Computergestützte Methoden können ebenfalls zur Erstellung der

Kalibrationskurve verwendet werden. Falls die Ergebnisberechnung mit dem Computer durchgeführt wird, empfehlen wir die Berechnung mit einer “4 Parameter”-Kurvenfunktion.

XII. TYPISCHE WERTE

Die folgenden Daten dienen nur zu Demonstrationszwecken und können nicht als

Ersatz für die Echtzeitstandardkurve verwendet werden. hGH-EASIA OD Einheiten

Kalibrator 0 μIU/ml

0,45 μIU/ml

5,4 μIU/ml

12,9 μIU/ml

43,5 μIU/ml

98,0 μIU/ml

0,030

0,062

0,226

0,501

1,429

2,330

XIII. LEISTUNGSMERKMALE UND GRENZEN DER METHODIK

A. Nachweisgrenze

Zwanzig Null-Kalibratoren wurden zusammen mit einem Satz anderer

Kalibratoren gemessen.

Die Nachweisgrenze, definiert als die scheinbare Konzentration bei zwei

Standardabweichungen über dem gemessenen Durchschnittswert bei

Nullbindung, entsprach 0,17 μIU/ml.

B. Spezifität

Kreuzreaktive Hormone wurden zu einem minderwertigen und zu einem hochwertigen Kontrolle zugegeben. Das Scheinbare hGH Ergebnis wurde gemessen. hGH C1

µIU/ml hGH C2

µIU/ml Zugeg. Hormon

- hCG 100000 mIU/ml hPL 10000 ng/ml

PRL 12500 ng/ml

1,9

2,0

1,4

1,8

13,5

14,3

13,0

12,6

C. Präzision

INTRA ASSAY

Serum N <X> ± SD

(μIU/ml)

(%)

Serum

INTER ASSAY

N <X> ± SD

(μIU/ml)

(%)

6,90 ± 0,34

16,61 ± 0,90

4,9

5,4

11,4

0,9

23,5

1,2

SD : Standardabweichung; CV: Variationskoeffizient

D. Genauigkeit

WIEDERFINDUNGSTEST

Probe Zugeg. hGH

(μIU/ml)

Wiedergef. hGH

(μIU/ml)

8,1

5,1

Wiedergefunden

(%)

Serum

Plasma

4,3

13,5

26,8

52,1

4,3

13,5

26,8

52,1

4,1

12,8

28,1

58,9

4,6

13,2

25,3

53,0

105

113

106

102

Probe Verdünn.

VERDÜNNUNGSTEST

Theoret. Konzent.

(μIU/ml)

Gemess. Konzent.

(μIU/ml)

Serum 1

Serum 2

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

48,8

24,4

12,2

6,1

3,1

97,7

57,0

27,7

13,6

6,4

3,0

1/1

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

10,6

5,3

2,7

1,3

0,7

21,2

9,3

4,6

2,2

1,1

0,6

Die Proben wurden mit Null-Kalibrator verdünnt.

Umrechnungsfaktor:

1µIU der Standardzubereitung hGH-EASIA = 0,33 ng

E. Zeitverzögerung zwischen letzter Kalibrator- und Probenzugabe

Es wird im Folgenden gezeigt, dass die Genauigkeit der Tests selbst dann gewährleistet ist, wenn die Probe 60 Minuten nach Zugabe des Kalibrators in die beschichteten Röhrchen zugegeben wird.

ZEITDIFFERENCE

0 min 10 min 20 min 30 min 45 min 60 min

4,0

13,5

3,6

15,0

3,3

13,8

3,3

13,0

3,0

12,6

3,8

13,0

F. Hook-Effekt

Eine Probe mit hGH bis zu 4000 μIU/ml liefert höhere Messwerte als der letzte Kalibratormeßwert.

XIV INTERNE QUALITÄTSKONTROLLE

Entsprechen die Ist-Werte nicht den auf den Fläschchen angegebenen Soll-

Werten, können die Werte, ohne treffende Erklärung der Abweichungen, nicht weiterverarbeitet werden.

§ Falls zusätzliche Kontrollen erwünscht sind, kann jedes Labor seinen eigenen Pool herstellen, der in Aliquots eingefroren werden sollte.

Kontrollen mit erhöhten Azidkonzentrationen stören die Enzymreaktion und können nicht verwendet werden.

§ Akzeptanzkriterien für die Differenz zwischen den Resultaten der

Wiederholungstests anhand der Proben müssen auf Guter Laborpraxis beruhen.

§ Es wird empfohlen, Kontrollen im Assay routinemäßig wie unbekannte

Proben zu behandeln, um die Assayvarianz zu messen. Die Leistung des

Assay muss mit den Qualitätskontrollkarten der Kontrollen überprüft werden.

Es hat sich bewährt, die durch den Computer ausgewählte Kurvenanpassung visuell zu überprüfen.

XV. REFERENZ INTERVALLE

Diese Werte sind nur Richtwerte; jedes Labor muss seinen eigenen

Normalwertbereich ermitteln.

Bei gesunden Personen erfolgt die hGH-Ausschüttung pulsatil. Tagsüber variiert die hGH-Konzentration von < 0,2 bis 10 µIE/ml. Im Schlaf steigt die hGH-

Konzentration kontinuierlich an (± 30 µIE/ml).

Nach sportlichen Aktivitäten oder Stress (Blutentnahme, Hypoglykämie) werden hohe Werte, bei Hyperglykämie niedrige hGH-Spiegel gefunden.

Zwei Stunden nach Glucose-Belastung (75 g bei Erwachsenen) wurden bei gesunden Personen (n = 34) hGH-Spiegel < 10 µIE/ml, nach einem

Stimulationstest (Insulin, Arginin, Glucagon) hGH-Spiegel > 20 µIE/ml gefunden.

Patienten mit Akromegalie zeigten selbst nach Glucose-Gabe erhöhte hGH-Werte

(> 10 µIU/ml).

Bei hGH-Mangel kann keine oder nur verminderte Erhöhung der hGH-Spiegel nach Stimulation detektiert werden (Minderwuchs durch hGH-Mangel;

Hypopituitarismus verschiedener Ursachen).

XIII. VORSICHTSMASSNAHMEN UND WARNUNGEN

Sicherheit

Nur für diagnostische Zwecke.

Die menschlichen Blutkomponenten in diesem Kit wurden mit europäischen und in den USA erprobten FDA-Methoden getestet, sie waren negativ für HBsAG, anti-HCV und anti-HIV 1 und 2. Keine bekannte Methode kann jedoch vollkommene Sicherheit darüber liefern, dass menschliche Blutbestandteile nicht

Hepatitis, AIDS oder andere Infektionen übertragen. Deshalb sollte der Umgang mit Reagenzien, Serum oder Plasmaproben in Übereinstimmung mit den

Sicherheitsbestimmungen erfolgen.

Alle tierischen Produkte und deren Derivate wurden von gesunden Tieren gesammelt. Komponenten von Rindern stammen aus Ländern in denen BSE nicht nachgewiesen wurde.

Trotzdem sollten Komponenten, die tierische Substanzen enthalten, als potenziell infektiös betrachtet werden.

Vermeiden Sie Hautkontakt mit allen Reagenzien. Bei Kontakt gründlich mit

Wasser spülen.

Bitte rauchen, trinken, essen Sie nicht in Ihrem Arbeitsbereich, und verwenden

Sie keine Kosmetika. Pipettieren Sie nicht mit dem Mund. Verwenden Sie

Schutzkleidung und Wegwerfhandschuhe.

XVII. LITERATUR

1. CAMANNI F., MASSARA F., BELFORTE L., ROSATELLO A.,

MOLENATTI G.M. (1977)

Effect of dopamine on plasma growth hormone and prolactin levels in

normal and acromegalic subjects.

J. Clin. Endo. and Metab., 44:465.

DAUGHADAY W.H. (1981)

The adenohypophysis

In : "Textbook of Endocrinology", R.H. Williams ed., W.B. Saunders,

Philadelphia, p;73.

3. DROBNY E.C., AMBURN K., BAUMANN G. (1983)

Circadian variation of basal plasma growth hormone in man.

J. Clin. Endo. and Metab., 57:524-528.

4. HASHIDA S., NAKAWAGA K., ISHIKAWA E., OHTAKI S. (1985)

Basal level of human growth hormone (hGH) in normal serum.

Clin. Chim. Acta, 151:185-186.

5. LEWIS V.J. et al. (1980)

Human growth hormone : A complex of proteins.

Rec. Progr. Horm. Res., 36:488.

6. LI C.H. (1974)

Human growth hormone : perspective on its chemistry and

physiology.

In : "Advances in human growth hormone research", S. Raiti ed. U.S.

Department of Health, Education and Welfare Publ. DMEW publ. no.

(NJH) 74-612, p. 321.

REUTENS AT. (1995)

Evaluation and application of a highly sensitive assay for serum growth hormone (GH) in the study of adult GH deficiency.

J. Clin. Endocrinol. Metab., 80(2): 480-485

CROWLEY S. et al. (1995)

Growth and the growth hormone axis in prepubertal children with asthma.

J. Pediatr. 126(2): 297-303.

KELLY JT. et al. (1993)

Effect of different oral oestrogen formulations on insulin-like growth factor I, growth hormone and growth hormone binding protein in post-menopausal women.

Clin. Endocrinol. 39(5) : 561-567

XVIII. ZUSAMMENFASSUNG DES PROTOKOLLS

KALIBRATOREN

(µl)

PROBE(N)

KONTROLLEN

(µl)

Kalibratoren (0-5)

Proben, Kontrollen

Anti-hGH-HRP

Gebrauchslösung

30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.

Inhalt jedes Wells absaugen.

Dreimal mit 400 µl Waschlösung waschen und absaugen. chromogene Lösung 100 100

30 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren.

Stopplösung 100 100

Auf einem Mikrotiterplatten-Lesegerät auswerten und Absorption jedes Wells bei 450 nm (gg. 630 oder 650 nm) vermerken.

DIAsource Katalognummer :

KAP1081

Beipackzettelnummer:

1700573/de

Nummer der

Originalausgabe:

090504/1

Revisionsdatum : 2009-05-04

Prima di utilizzare il kit leggere attentamente le istruzioni per l’uso

hGH -EASIA

I. USO DEL KIT

Kit immunoenzimetrico per la determinazione quantitativa in vitro dell’Ormone della Crescita umano

(hGH) in siero o plasma.

II. INFORMAZIONI DI CARATTERE GENERALE

A. Nome commerciale: DIAsource hGH-EASIA Kit

B. Numero di catalogo: KAP1081: 96 test

C. Prodotto da: DIAsource ImmunoAssays S.A.

Rue de l’Industrie, 8, B-1400 Nivelles, Belgio.

Per informazioni tecniche o su come ordinare il prodotto contattare:

Tel: +32 (0) 67 88.99.99 Fax: +32 (0) 67 88.99.96

III. INFORMAZIONI CLINICHE

A. Attività biologiche

L’hGH è un ormone polipeptidico (peso molecolare 21.500 Da) la cui produzione da parte delle celule acidofile della ghiandola pituitaria anteriore è controllata da due importanti sostanze prodotte dall’eminenza mediana: il Fattore di

Rilascio dell’Ormone della Crescita (GRF) e la somatostatina, un agente dall’effetto inibente. Un ruolo non meno importante nella secrezione dell’hGH è quello esercitato dalle vie dopaminergica, adrenergica e serotoninergica. La secrezione di hGH viene stimolata anche da altri fattori quali ipoglicemia, esercizio fisico, digiuno, assunzione di pasti ad alto contenuto proteico, sonno profondo, stress, glucagone, L-Dopa, aminoacidi e altro, mentre risulta inibita da glucosio, cortisolo, hGH, e acidi grassi liberi. La sua breve emivita plasmatica (+/-25 minuti) e i vari stimoli eccitatori o inibitori determinano ampie e frequenti variazioni del suo livello nel siero. L’azione dell’hGH a livello epatico e tissutale, una delle sue principali funzioni fisiologiche, induce la produzione di somatomedina che stimola la crescita attraverso un’azione diretta sui tessuti target. Al contrario di quanto accade per l’hGH, il livello di somatomedina nel siero si mantiene stabile grazie al legame di questa con le proteine circolanti nel plasma.

B. Applicazione clinica

Ritardo nella crescita

L’iposecrezione di hGH è una delle varie cause di ritardo nella crescita in età pediatrica. Il dosaggio dell’hGH nel siero mediante un test altamente sensibile, meglio ancora se effettuato in seguito a stimolo provocativo (assenza di risposta), rappresenta uno strumento importante per la formulazione di una corretta diagnosi per pazienti di questo tipo che possono essere trattati con somministrazioni di hGH.

Ipopituitarismo

La determinazione dei livelli di hGH nel siero è inoltre un indice della funzionalità ipofisaria in caso di sospetto ipopituitarismo (idiopatico o dovuto a neoplasia e intevento chirurgico).

Gigantismo e acromegalia

La determinazione dei livelli di hGH nel siero, specialmente dopo test provocativo di inibizione (assenza di risposta) è un mezzo importante per la formulazione diagnostica di ipersecrezione di hGH indotta da adenoma acidofilo. Le patologie che ne derivano, gigantismo nel bambino e acromegalia nell’adulto, possono essere trattate con intervento chirurgico o radioterapia.

IV. PRINCIPIO DEL METODO

DIAsource hGH-EASIA è un immunosaggio a sensibilità amplificata a fase solida eseguito su piastre di microtitolazione. I calibratori e i campioni reagiscono con la cattura dell’anticorpo monoclonale (MAb 1) che riveste il pozzetto di microtitolazione e con un anticorpo monoclonale (MAb 2) marcato con horseradish perossidasi (HRP). Dopo un periodo di incubazione che consenta la formazione di un sandwich: MAb 1 di rivestimento – hGH – MAb 2 – HRP, la piastra di microtitolazione viene lavata per rimuovere l’anticorpo marcato con enzima non legato. L’anticorpo marcato con enzima non legato viene misurato attraverso una reazione cromogenica. Si procede quindi con l’aggiunta della soluzione cromogena (TMB-H

) e successiva incubazione. La reazione viene interrotta con l’aggiunta di Soluzione di arresto; quindi la piastra di microtitolazione viene letta alla lunghezza d’onda adeguata. La quantità di turnover del substrato viene determinata colorimetricamente misurando l’assorbanza che è proporzionale alla concentrazione di hGH.

Viene tracciata una curva di calibrazione e la concentrazione hGH nei campioni viene determinata per interpolazione dalla curva di calibrazione.

V. REATTIVI FORNITI

Reattivi Kit da 96 test

Codice colore

Volume di ricostituzione

96 pozzetti Blu Pronte per l’uso

Piastra di microtitolazione con 96 pozzetti separabili, rivestiti anti hGH (anticorpi monoclonali)

Ab HRP CONC

Coniugato: marcato HRP anti-hGH

(Anticorpi monoclonali) in tampone stabilizzante

CONJ BUF

Tampone del coniugato: tampone

TRIS-HCl con albumina di siero bovino e timolo

CAL 0

Calibratore zero in siero di pecora e timolo.

CAL N

Calibratore 1-5 (le concentrazioni esatte degli calibratore sono riportate sulle etichette dei flaconi), in siero di pecora e timolo.

1 flacone

0,2 ml

1 flacone

6 ml

1 flacone liofiliz.

5 flaconi liofiliz.

Giallo

Rosso

Giallo

Diluire 40 x con tampone del coniugato

Pronto per l’uso

Aggiungere 2,0 ml di acqua distillata

Aggiungere 0,5 ml di acqua distillata

WASH SOLN CONC

Tampone di lavaggio (TRIS HCl)

CONTROL N

Controlli: N = 1 o 2, in siero umano con timolo

CHROM TMB

Soluzione Cromogena TMB

(tetrametilbenzidina)

STOP SOLN

Soluzione di arresto: HCl 1N

1 flacone

10 ml

2 flaconi liofiliz.

1 flacone

12 ml

1 flacone

12 ml

Bruno

Argento

Bruno bianco

Diluire 200 x con acqua distillata usando un agitatore magnetico)..

Aggiungere 0,5 ml di acqua distillata

Pronto per l’uso

Note: 1. Usare lo standard zero per diluire i campioni.

2. 1

UI della preparazione standard è equivalente a 1

UI di 2 nd

98/574.

VI. REATTIVI NON FORNITI

Il seguente materiale è richiesto per il dosaggio ma non è fornito nel kit.

Acqua distillata di qualità elevata

Pipette per dispensare 50

µ l, 200 µl, 500

µ l e 2 ml (Si raccomanda di

5. utilizzare pipette accurate con puntale in plastica monouso).

Agitatore tipo vortex.

Agitatore magnetico. lavatrice per piastra di microtitolazione

6. Lettore piastra di microtitolazione con una potenza di lettura di 450 nm e

650 nm (lettura bicromatica)

VII. PREPARAZIONE DEI REATTIVI

A. Calibratore: Ricostituire il calibratore zero con 2,0 ml di acqua distillata e gli altri calibratori con 0,5 ml di acqua distillata.

B. Controlli: Ricostituire i controlli con 0,5 ml di acqua distillata.

C. Soluzione di lavoro del coniugato anti-hGH-HRP: Preparare la quantità necessaria di soluzione del coniugato aggiungendo 25 µl del coniugato anti-hGH-HRP a 1 ml di tampone del coniugato. Utilizzare un vortex per omogeneizzare. Si raccomanda la preparazione estemporanea.

D. Soluzione di lavoro del tampone di lavaggio: Preparare la quantità necessaria di soluzione di lavoro del tampone di lavaggio aggiungendo 199 parti di acqua distillata ad una parte di tampone di lavaggio concentrato

(200x). Usare un agitatore magnetico per rendere la soluzione omogenea. La soluzione di lavoro va scartata al termine della giornata.

VIII. CONSERVAZIONE E SCADENZA DEI REATTIVI

I reattivi non utilizzati sono stabili a 2-8°C fino alla data riportata su ciascuna etichetta.

Le strisce reattive inutilizzate devono essere conservate a 2-8°C, in un contenitore sigillato che contenga un essiccante fino alla data di scadenza.

§ Dopo la ricostituzione, i calibratori e i controlli sono stabili 7 giorni a 2-8°C.

Per periodi di conservazione molto lunghi, preparare e mantenere le aliquote a –20°C. Evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento dei campioni.

La soluzione di lavaggio concentrata è stabile a temperatura ambiente fino alla data di scadenza.

La soluzione di lavoro del tampone di lavaggio deve essere preparata fresca ogni volta e usata nello stesso giorno della preparazione.

Dopo apertura del flacone, il coniugato è stabile fino alla data di scadenza riportata sull’etichetta, se conservato a 2-8°C nel flacone originale ben tappato.

§ Alterazioni dell’aspetto fisico dei reattivi possono indicare una loro instabilità o deterioramento.

IX. RACCOLTA E PREPARAZIONE DEI CAMPIONI

§ Conservare i campioni di siero o plasma a 2-8°C.

Se non si desidera eseguire il dosaggio entro 24 ore dal prelievo, si raccomanda di conservare i campioni a –20°C. Evitare ripetuti cicli di congelamento-scongelamento dei campioni.

§ Prima dell’impiego, tutti i campioni devono essere a temperatura ambiente.

Si raccomanda di vortexare i campioni prima di utilizzarli.

§ Siero, plasma eparinato o plasma EDTA producono risultati simili.

Y(siero) = 0.89 x (plasma EDTA) + 0.14 µIU/ml r=0.98 n=46

Y(siero) = 1.02 x (plasma eparinato) + 0.01 µIU/ml r=0.98 n=46

§ Non usare campioni emolizzati.

X. METODO DEL DOSAGGIO

A. Avvertenze generali

Non usare il kit o suoi componenti oltre la data di scadenza.

Non mescolare reattivi di lotti diversi.

Prima dell’uso portare tutti i reattivi a temperatura ambiente.

Mescolare delicatamente i campioni per inversione o rotazione.

Eseguire calibratori, controlli e campioni in doppio. Si raccomanda l’allineamento verticale.

Utilizzare un contenitore di plastica pulito per preparare la soluzione di lavaggio.

Per evitare cross-contaminazioni, cambiare il puntale della pipetta ogni volta che si usi un nuovo reattivo o campione.

Per la distribuzione della soluzione cromogena e la Stop Solution evitare pipette con parti metalliche.

L’uso di pipette ben tarate e ripetibili o di sistemi di pipettamento automatici migliora la precisione del dosaggio.

Rispettare i tempi di incubazione.

Per evitare derive, l’intervallo tra il pipettaggio del primo calibratore e l’ultimo campione deve essere limitato ai tempi riportati nella sezione XIII, paagrafo E (Tempo Trascorso).

Allestire una curva di calibrazione per ogni seduta analitica, in quanto non

è possibile utilizzare per un dosaggio curve di calibrazione di sedute analitiche precedenti.

Distribuzione della soluzione cromogena entro 15 minuti dopo il lavaggio della piastra di microtitolazione.

Durante l’incubazione con la soluzione cromogena evitare la luce diretta del sole sulla piastra di microtitolazione.

B. Metodo del dosaggio

1. Selezionare il numero di strisce reagenti necessario per il test. Le strisce reagenti inutilizzate devono essere risigillate nel contenitore con un

2. essiccante e conservate a 2-8°C.

Assicurare le strisce reagenti nel telaio di supporto.

Pipettare 50 µl di ogni calibratore, controllo e campione nei pozzetti adeguati.

Pipettare 50 µl della soluzione di lavoro del coniugato anti-hGH-HRP in tutti i pozzetti.

Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente - Il rispetto della durata di

30 minuti di tale incubazione è indispensabile.

Aspirare il liquido da ogni pozzetto.

Lavare la piastra 3 volte :

§ versando 0,4 ml di soluzione di lavaggio in ogni pozzetto

§ aspirando il contenuto di ogni pozzetto

Pipettare in ogni pozzetto 100 µl di Soluzione Cromogena entro 15 minuti dal termine della fase di lavaggio.

Incubare la piastra di microtitolazione per 30 minuti a temperatura ambiente; evitare la luce diretta del sole.

10. Pipettare 100 µl di soluzione di arresto in ogni pozzetto.

11. Leggere le assorbanze a 450 nm (filtro di riferimento a 630 nm o 650 nm) entro un’ora e calcolare i risultati come descritto nella sezione XI.

XI. CALCOLO DEI RISULTATI

1. Leggere la piastra a 450 nm rispetto a un filtro di riferimento regolato a

650 nm (o 630 nm).

Calcolare la media delle determinazioni in duplicato.

Costruire la curva di calibrazione su carta millimetrata semilogaritmica o lineare ponendo in ordinata le medie dei colpi per minuto (cpm) dei replicati degli standard e in ascissa le rispettive concentrazioni di hGH,

5. collegando i punti tracciati con linee rette.

Determinare le concentrazioni e controlli per interpolazione sulla curva di taratura.

E’ possibile utilizzare un sistema di interpolazione dati automatizzato. Con un sistema automatico di interpolazione dati, utilizzare la curva a 4 parametri.

XII. CARATTERISTICHE TIPICHE

I sotto riportati sono forniti a titolo di esempio e non devono essere utilizzati per calcolare le concentrazioni di hGH in campioni e controlli al posto della curva standard, che va eseguita per ogni dosaggio. hGH-EASIA

Unità OD

Calibratore 0 μIU/ml

0,45 μIU/ml

5,4 μIU/ml

12,9 μIU/ml

43,5 μIU/ml

98,0 μIU/ml

0,030

0,062

0,226

0,501

1,429

2,330

XIII. CARATTERISTICHE E LIMITI DEL METODO

A. Sensibilità

Venti replicati dello standard zero sono stati dosati insieme agli altri standard.

La sensibilità, calcolata come concentrazione apparente di un campione con OD pari alla media più 2 deviazioni standard di 20 replicati dello standard zero, è risultata essere 0,17 μIU/ml.

B. Specificità

Sono stati aggiunti ormoni cros-reattivi a un campione di controllo a basso livello di hGH e a un campione di controllo a livello elevato ed è stata quindi misurata la risposta apparente dell’hGH.

Ormoni aggiunti hGH C1

µIU/ml hGH C2

µIU/ml

- hCG 100000 mIU/ml hPL 10000 ng/ml

PRL 12500 ng/ml

1,9

2,0

1,4

1,8

13,.5

14,3

13,0

12,6

C. Precisione

INTRA SAGGIO

Siero N

<X> ± SD

(μIU/ml)

6,90 ± 0,34

16,61 ± 0,90

(%)

4,9

5,4

Siero

INTER SAGGIO

<X> ± SD

(μIU/ml)

11,4

0,9

23,5

1,2

(%)

8,1

5,1

SD : Deviazione Standard; CV: Coefficiente di Variazione

D. Accuratezza

Campione

TEST DI RECUPERO hGH aggiunta hGH

(µIU/ml) recuperata

(µIU/ml)

Recupero

(%)

Siero

Plasma

4,3

13,5

26,8

52,1

4,3

13,5

26,8

52,1

4,1

12,8

28,1

58,9

4,6

13,2

25,3

53,0

105

113

106

102

Campione Diluizione

TEST DI DILUIZIONE

Concentrazione teorica

(µIU/ml)

Concentrazione misurata

(µIU/ml)

Siero 1

Siero 2

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

1/1

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

10,6

5,3

48,8

24,4

12,2

6,1

3,1

2,7

1,3

0,7

21,2

9,3

4,6

97,7

57,0

27,7

13,6

6,4

3,0

2,2

1,1

0,6

I campioni sono stati diluiti con calibratore zero.

Fattore di conversione: 1µIU hGH EASIA Calibrator = 0,33ng

E. Tempo trascorso tra l’aggiunta dell’ultimo calibratore e il campione

Come mostrato nella seguente tabella, il dosaggio si mantiene accurato anche quando un campione viene aggiunto nelle provette sensibilizzate 60 minuti dopo l’aggiunta del calibratore.

TEMPO TRASCORSO

0 min 10 min 20 min 30 min 45 min 60 min

4,0

13,5

3,6

15,0

3,3

13,8

3,3

13,0

3,0

12,6

3,8

13,0

D. Effetto hook

Un campione ha cui è stata aggiunta hGH fino a 4000

IU/ml ha OD superiori a quello dello standard più concentrato.

XIV. CONTROLLO DI QUALITA’ INTERNO

Se i risultati ottenuti dosando il Controllo 1 e il Controllo 2 non sono all’interno dei limiti riportati sull’etichetta dei flaconi, non è opportuno utilizzare i risultati ottenuti per i campioni, a meno che non si trovi una giustificazione soddisfacente.

Ogni laboratorio può preparare un proprio pool di sieri da utilizzare come controllo, da conservare congelato in aliquote. I controlli che contengono azide interferiscono con la reazione enzimatica e quindi non possono essere utilizzati.

§ I criteri di accettazione delle differenze tra i risultati in duplicato dei campioni devono basarsi sulla buona prassi di laboratorio.

Si raccomanda di saggiare i controlli con regolarità come campioni sconosciuti per misurare la variabilità del saggio. La resa del saggio deve essere monitorata con tabelle di controllo qualità dei controlli.

§ È buona pratica verificare visivamente il modello di curva selezionato dal computer.

XV. INTERVALLI DI RIFERIMENTO

Questi valori vengono dati solo come guida; ogni laboratorio deve stabilire i propri intervalli normali di valori.

In soggetti normali la secrezione dell’ormone della crescita (hGH) è pulsatile.

Durante il giorno, le concentrazioni di hGH variano da <0,2-10 µUI/ml, mentre durante il sonno aumentano sensibilmente (+/- 30 µUI/ml)

La secrezione di hGH viene fortemente stimolata dall’esercizio fisico e dallo stress (iniezione endovenosa, ipoglicemia…) e viene al contrario inibita dall’iperglicemia. In soggetti normali (n=34), a due ore dal test da carico di glucosio (75g. negli adulti), i livelli di hGH sono risultati inferiori a 10 µUI/ml, e la risposta dell’hGH ai test di stimolazione (insulina, arginina e glucagone) ha superato il livello di 20 µUI/ml.

Nei soggetti con acromegalia, i livelli di hGH sono risultati elevati anche dopo carico di glucosio (>10 µUI/ml).

Nei casi di deficit di hGH, la risposta ai test di stimolazione risulta assente o fortemente attenuata (bassa statura dovuta a deficit di hGH, ipopituitarismo di varia origine).

XVI. PRECAUZIONI PER L’USO

Sicurezza

Il kit è solo per uso diagnostico in vitro.

I reattivi di origine umana presenti nel kit sono stati dosati con metodi approvati da organismi di controllo europei o da FDA e si sono rivelati negativi per HBs Ag, anti HCV, anti HIV1 e anti HIV2. Non sono disponibili metodi in grado di offrire la certezza assoluta che derivati da sangue umano non possano provocare epatiti,

AIDS o trasmettere altre infezioni. Manipolare questi reattivi o i campioni di siero o plasma secondo le procedure di sicurezza vigenti.

Tutti i prodotti di origine animale o loro derivati provengono da animali sani. I componenti di origine bovina provengono da paesi dove non sono stati segnalati casi di BSE. E’ comunque necessario considerare i prodotti di origine animale come potenziali fonti di infezioni.

Evitare qualsiasi contatto della cute con tutti i reagenti. In caso di contatto, lavare abbondamentemente con acqua.

Non fumare, bere, mangiare o applicare cosmetici nell’area di lavoro. Non pipettare i reattivi con pipette a bocca. Utilizzare indumenti protettivi e guanti monouso.

XVII. RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI

CAMANNI F., MASSARA F., BELFORTE L., ROSATELLO A.,

MOLENATTI G.M. (1977)

Effect of dopamine on plasma growth hormone and prolactin levels in

normal and acromegalic subjects.

J. Clin. Endo. and Metab., 44:465.

DAUGHADAY W.H. (1981)

The adenohypophysis

In : "Textbook of Endocrinology", R.H. Williams ed., W.B. Saunders,

Philadelphia, p;73.

3. DROBNY E.C., AMBURN K., BAUMANN G. (1983)

Circadian variation of basal plasma growth hormone in man.

J. Clin. Endo. and Metab., 57:524-528.

4. HASHIDA S., NAKAWAGA K., ISHIKAWA E., OHTAKI S. (1985)

Basal level of human growth hormone (hGH) in normal serum.

Clin. Chim. Acta, 151:185-186.

5. LEWIS V.J. et al. (1980)

Human growth hormone : A complex of proteins.

Rec. Progr. Horm. Res., 36:488.

6. LI C.H. (1974)

Human growth hormone : perspective on its chemistry and physiology.

In : "Advances in human growth hormone research", S. Raiti ed. U.S.

Department of Health, Education and Welfare Publ. DMEW publ. no.

(NJH) 74-612, p. 321.

7. REUTENS AT. (1995)

Evaluation and application of a highly sensitive assay for serum growth hormone (GH) in the study of adult GH deficiency.

J. Clin. Endocrinol. Metab., 80(2): 480-485

8. CROWLEY S. et al. (1995)

Growth and the growth hormone axis in prepubertal children with asthma.

J. Pediatr. 126(2): 297-303.

9. KELLY JT. et al. (1993)

Effect of different oral oestrogen formulations on insulin-like growth factor I, growth hormone and growth hormone binding protein in post-menopausal women.

Clin. Endocrinol. 39(5) : 561-567

XVIII. SCHEMA DEL DOSAGGIO

CALIBRATORE

(µl)

CAMPIONI

CONTROLLI

(µl)

Calibratore (0 - 5)

Campioni, controlli

Soluzione di lavoro del coniugato anti-hGH-HRP

Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente.

Aspirare il contenuto di ogni pozzetto.

Lavare 3 volte con 400 µl di soluzione di lavaggio e aspirare.

Soluzione chromogena 100 100

Incubare per 30 minuti a temperatura ambiente.

Soluzione di arresto 100 100

Leggere su un lettore per piastra da microtitolazione e registrare l’assorbanza di ogni pozzetto a 450 nm (rispetto a 630 o 650 nm)

Numero di catalogo di

DIAsource:

KAP1081

P.I. numero:

1700573/it

Revisione numero:

090504/1

Data di revisione : 2009-05-04

Διαβάστε ολόκληρο το πρωτόκολλο πριν από τη χρήση.

hGH-EASIA

Ι. ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ

Ανοσοενζυμομετρικός προσδιορισμός για την in vitro ποσοτική μέτρηση της ανθρώπινης αυξητικής

ορμόνης (hGH) στον ορό και το πλάσμα.

II. ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

A. Εμπορική ονομασία: Κιτ hGH-EASIA της DIAsource

B. Αριθμός καταλόγου:

KAP1081: 96 προσδιορισμοί

Γ. Κατασκευάζεται από την: DIAsource ImmunoAssays S.A.

Rue de l'Industrie, 8, B-1400 Nivelles, Belgium.

Για τεχνική βοήθεια ή πληροφορίες σχετικά με παραγγελίες επικοινωνήστε στα:

Τηλ.: +32 (0)67 88.99.99 Φαξ: +32 (0)67 88.99.96

III. ΚΛΙΝΙΚΟ ΥΠΟΒΑΘΡΟ

Βιολογική δράση της hGH

Η hGH είναι μια πολυπεπτιδική ορμόνη (μοριακό βάρος 21.500 Da) που παράγεται από τα οξεόφιλα

κύτταρα της πρόσθιας υπόφυσης υπό τον έλεγχο των δύο κυρίων ουσιών από το μέσο έπαρμα: του

παράγοντα απελευθέρωσης της αυξητικής ορμόνης (GRF) και ενός ανασταλτικού παράγοντα, της

σωματοστατίνης. Οι ντοπαμινεργικοί, αδρενεργικοί και σεροτονινεργικοί νευροενδοκρινικοί οδοί παίζουν

επίσης σημαντικό ρόλο στον έλεγχο της έκκρισης της hGH. Στα ερεθίσματα που διεγείρουν την έκκριση

της hGH περιλαμβάνονται η υπογλυκαιμία, η άσκηση, η νηστεία, τα γεύματα με υψηλή περιεκτικότητα

πρωτεΐνης, ο βαθύς ύπνος, το στρες, η γλυκαγόνη, η L Dopa, τα αμινοξέα κ.λπ. Στα ανασταλτικά

ερεθίσματα περιλαμβάνονται η γλυκόζη, η κορτιζόλη, η hGH και τα ελεύθερα λιπαρά οξέα. Λόγω της

σύντομης ημιζωής της στο πλάσμα (±25 λεπτά) και των συχνών διεγερτικών ή ανασταλτικών ερεθισμάτων,

η hGH εμφανίζει συχνές και μεγάλες διακυμάνσεις ως προς τη συγκέντρωση στο πλάσμα.

Μια από τις κύριες φυσιολογικές λειτουργίες της hGH είναι να δρα στο ήπαρ και άλλους ιστούς για την

παραγωγή σωματομεδινών, οι οποίες με τη σειρά τους επιφέρουν αύξηση με άμεση δράση επί των ιστών-

στόχων. Σε αντίθεση με την hGH, η συγκέντρωση της σωματομεδίνης στον ορό διατηρείται σταθερή

συνεπεία του μεγάλου βαθμού δέσμευσής της στις κυκλοφορούσες πρωτεΐνες του πλάσματος.

Κλινική εφαρμογή του προσδιορισμού hGH-EASIA

Καθυστέρηση της ανάπτυξης

Η μειωμένη έκκριση hGH είναι μιας από τις διάφορες αιτίες για το μικρό ανάστημα στα παιδιά. Μέτρηση

της hGH στον ορό με έναν προσδιορισμό υψηλής ευαισθησίας, ειδικά μετά από ένα προκλητό ερέθισμα

(έλλειψη απόκρισης), αποτελεί σημαντικό τρόπο για να τεκμηριωθεί η διάγνωση αυτή διότι η συγκεκριμένη

ομάδα ασθενών μπορεί να αντιμετωπισθεί θεραπευτικά με τη χορήγηση hGH.

Υποϋποφυσισμός

Η μέτρηση της hGH στον ορό αποτελεί επίσης ένα δείκτη της λειτουργίας της υπόφυσης όταν υπάρχει

υποψία υποϋποφυσισμού (είτε ιδιοπαθούς είτε λόγω όγκου ή χειρουργικής επέμβασης).

Γιγαντισμός και μεγαλακρία

Η μέτρηση της hGH στον ορό, ειδικά μετά από μια προκλητή εξέταση αναστολής (απουσία απόκρισης),

αποτελεί σημαντικό τρόπο για την τεκμηρίωση της διάγνωσης υπερβολικής έκκρισης hGH λόγω οξεόφιλου όγκου της υπόφυσης. Αυτό έχει ως αποτέλεσμα γιγαντισμό στα παιδιά και μεγαλακρία στους ενηλίκους.

Και οι δύο αυτές διαταραχές μπορούν να αντιμετωπισθούν με χειρουργική επέμβαση ή ακτινοβολία.

IV. ΒΑΣΙΚΕΣ ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ΜΕΘΟΔΟΥ

Ο προσδιορισμός hGH-EASIA της DIAsource είναι ένας ενζυμικός ανοσοπροσδιορισμός

ενισχυμένης ευαισθησίας, στερεής φάσης, ο οποίος εκτελείται σε πλάκες μικροτιτλοδότησης.

Οι βαθμονομητές και τα δείγματα αντιδρούν με το μονοκλωνικό αντίσωμα σύλληψης (MAb

1) που είναι επιστρωμένο στην υποδοχή της πλάκας μικροτιτλοδότησης και με ένα

μονοκλωνικό αντίσωμα (MAb 2) σημασμένο με ραφανιδική υπεροξειδάση (HRP). Μετά από

μια περίοδο επώασης που επιτρέπει το σχηματισμό ενός σάντουιτς: επιστρωμένο MAb 1 – hGH – MAb 2 – HRP, η πλάκα μικροτιτλοδότησης υποβάλλεται σε πλύση για να

απομακρυνθεί το σημασμένο με ένζυμο αδέσμευτο αντίσωμα. Το σημασμένο με ένζυμο

δεσμευμένο αντίσωμα μετράται μέσω μιας χρωμογόνου αντίδρασης. Προστίθεται και

επωάζεται χρωμογόνο διάλυμα (ΤΜΒ – H

). Η αντίδραση σταματά με την προσθήκη

ανασχετικού διαλύματος και στη συνέχεια γίνεται ανάγνωση της πλάκας μικροτιτλοδότησης

στο κατάλληλο μήκος κύματος. Η ποσότητα μετατροπής του υποστρώματος καθορίζεται

χρωματομετρικά μετρώντας την απορρόφηση, η οποία είναι ανάλογη προς τη συγκέντρωση hGH.

Παριστάνεται γραφικά μια καμπύλη βαθμονόμησης και προσδιορίζεται η συγκέντρωση της hGH στα δείγματα με αναγωγή από την καμπύλη βαθμονόμησης.

V. ΠΑΡΕΧΟΜΕΝΑ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΑ

Αντιδραστήρια Κιτ 96

προσδιορι-

σμών

Χρωμα-

τικός

κωδικός

Ανασύσταση

Πλάκα

μικροτιτλοδότησης με 96

αποσπώμενες υποδοχές

επιστρωμένες με

96 υποδοχές μπλε Έτοιμο για χρήση

Ab HRP CONC

Σύζευγμα: αντι- hGH

(μονοκλωνικά αντισώματα)

σημασμένα με HRP σε ρυθμιστικό

διάλυμα σταθεροποίησης

CONJ BUF

Ρυθμιστικό διάλυμα συζεύγματος:

ρυθμιστικό διάλυμα TRIS-HCl με

βόεια ορολευκωματίνη και θυμόλη

CAL 0

Μηδενικός βαθμονομητής σε ορό

προβάτου και θυμόλη

CAL N

Βαθμονομητής N = 1 έως 5

(δείτε τις ακριβείς τιμές πάνω στις

ετικέτες των φιαλιδίων) σε ορό

προβάτου και θυμόλη

WASH SOLN CONC

Διάλυμα πλύσης (Tris-HCl)

1 φ

ιαλίδιο

0,2 ml

1 φ

ιαλίδιο

6 ml

1 φιαλίδιο

λυοφιλοποι-

ημένο

5 φιαλίδια

λυοφιλοποι-

ημένο

1 φιαλίδιο

10 ml

κίτρινο

κόκκινο Έτοιμο για χρήση

κίτρινο

Αραιώστε 40X με

ρυθμιστικό διάλυμα

συζεύγματος

Προσθέστε 2,0 ml

απεσταγμένου νερού

Προσθέστε 0,5 ml

απεσταγμένου νερού

CONTROL N

Οροί ελέγχου - N = 1 ή 2

σε ανθρώπινο ορό με θυμόλη

CHROM TMB

Χρωμογόνος TMB

(τετραμεθυλβενζυδίνη)

STOP SOLN

Ανασχετικό αντιδραστήριο: HCl

2 φιαλίδια

λυοφιλοποι-

ημένο

1 φιαλίδιο

12 ml

1 φιαλίδιο

12 ml

καφέ

ασημί

καφέ

λευκό

Αραιώστε 200 x με

απεσταγμένο νερό

(χρησιμοποιήστε

μαγνητικό αναδευτήρα).

Προσθέστε 0,5 ml

απεσταγμένου νερού

Έτοιμο για χρήση

Σημείωση: 1. Χρησιμοποιείτε το μηδενικό βαθμονομητή για αραιώσεις

δειγμάτων.

2.1 μIU του παρασκευάσματος του βαθμονομητή είναι ισοδύναμο με 1 μIU

του 2 ου

IS 98/574

VI.

ΑΝΑΛΩΣΙΜΑ ΠΟΥ ΔΕΝ ΠΑΡΕΧΟΝΤΑΙ

Τα ακόλουθα υλικά απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται στο κιτ:

Απεσταγμένο νερό υψηλής ποιότητας

Πιπέτες για διανομή: 50 μl, 200 μl, 500 μl και 2 ml (συνιστάται η χρήση πιπετών

ακριβείας με αναλώσιμα πλαστικά ρύγχη)

Αναμείκτης στροβιλισμού

Μαγνητικός αναδευτήρας

Συσκευή πλύσης για πλάκες μικροτιτλοδότησης

Συσκευή ανάγνωσης πλακών μικροτιτλοδότησης με δυνατότητα ανάγνωσης στα 450 nm και 650 nm (διχρωματική ανάγνωση)

VII.

ΠΑΡΑΣΚΕΥΗ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΟΥ

A. Βαθμονομητές: Ανασυστήστε το μηδενικό βαθμονομητή με 2,0 ml απεσταγμένου

νερού και άλλους βαθμονομητές με 0,5 ml απεσταγμένου νερού.

B. Οροί ελέγχου: Ανασυστήστε τους ορούς ελέγχου με 0,5 ml απεσταγμένου νερού.

Αντι-hGH-HRP σύζευγμα εργασίας: Προετοιμάστε επαρκή όγκο διαλύματος

συζεύγματος προσθέτοντας 25 µl του συμπυκνωμένου συζεύγματος αντιhGH-HRP σε 1 ml ρυθμιστικού διαλύματος συζεύγματος. Χρησιμοποιήστε

αναμείκτη στροβιλισμού (τύπου vortex) για να ομογενοποιήσετε.

Προτείνεται προετοιμασία τη στιγμή της χρήσης.

D. Διάλυμα πλύσης εργασίας: Προετοιμάστε επαρκή όγκο διαλύματος πλύσης εργασίας

με προσθήκη 199 όγκων απεσταγμένου νερού σε 1 όγκο διαλύματος πλύσης (200x).

Χρησιμοποιήστε μαγνητικό αναδευτήρα για την ομογενοποίηση. Απορρίψτε το μη

χρησιμοποιημένο διάλυμα πλύσης εργασίας στο τέλος της ημέρας.

VIII. ΦΥΛΑΞΗ ΚΑΙ ΗΜΕΡΟΜΗΝΙΑ ΛΗΞΗΣ ΤΩΝ ΑΝΤΙΔΡΑΣΤΗΡΙΩΝ

Πριν από το άνοιγμα ή την ανασύσταση, όλα τα συστατικά του κιτ παραμένουν

σταθερά έως την ημερομηνία λήξης, η οποία αναγράφεται στην ετικέτα του φιαλιδίου,

εφόσον διατηρούνται σε θερμοκρασία 2 έως 8° C.

Οι μη χρησιμοποιημένες ταινίες πρέπει να φυλάσσονται στους 2-8° C, σε σφραγισμένη

σακούλα που περιέχει αποξηραντικό παράγοντα, μέχρι την ημερομηνία λήξης.

Μετά την ανασύσταση, οι βαθμονομητές και οι οροί ελέγχου παραμένουν σταθεροί για

μία εβδομάδα σε θερμοκρασία 2 έως 8° C. Για μεγαλύτερες περιόδους φύλαξης,

πρέπει να σχηματίζονται κλάσματα/δόσεις μιας χρήσης και να διατηρούνται στους –

20° C. Αποφύγετε τους επανειλημμένους κύκλους απόψυξης-κατάψυξης.

Το συμπυκνωμένο διάλυμα πλύσης είναι σταθερό σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι την

ημερομηνία λήξης.

Φρέσκο, παρασκευασμένο διάλυμα πλύσης εργασίας θα πρέπει να χρησιμοποιείται την ίδια ημέρα.

Μετά την πρώτη χρήση του, το σύζευγμα παραμένει σταθερό έως την ημερομηνία

λήξης, εφόσον διατηρείται στο αρχικό, ερμητικά κλειστό φιαλίδιο σε θερμοκρασία 2 έως 8° C.

Τυχόν μεταβολές της φυσικής εμφάνισης των αντιδραστηρίων του κιτ ενδέχεται να

υποδηλώνουν αστάθεια ή αλλοίωση.

IX.

ΣΥΛΛΟΓΗ ΚΑΙ ΠΡΟΕΤΟΙΜΑΣΙΑ ΔΕΙΓΜΑΤΩΝ

Τα δείγματα ορού και πλάσματος πρέπει να φυλάσσονται σε θερμοκρασία 2-8° C.

Εάν η εξέταση δεν πραγματοποιηθεί εντός 24 ωρών, συνιστάται η φύλαξη σε

κλάσματα/δόσεις μιας χρήσης στους -20° C. Αποφεύγετε τους επακόλουθους κύκλους

κατάψυξης-απόψυξης.

Φέρετε όλα τα δείγματα σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση. Συνιστάται η

ανάμειξη των δειγμάτων σε συσκευή στροβιλισμού πριν από τη χρήση.

Ορός, ηπαρινισμένο πλάσμα ή πλάσμα με EDTA παρέχουν παρόμοια αποτελέσματα. .

Y (ορός) = 0,89 x (πλάσμα με EDTA) + 0,14 r=0,98 n=46

Y (ορός) = 1,02 x (πλάσμα με ηπαρίνη) + 0,01 r=0,98

Μην χρησιμοποιείτε δείγματα που έχουν υποστεί αιμόλυση. n=46

X. ΔΙΑΔΙΚΑΣΙΑ

A. Σημειώσεις σχετικά με το χειρισμό

Μη χρησιμοποιείτε το κιτ ή τα συστατικά μετά την ημερομηνία λήξης.

Μην αναμειγνύετε υλικά από διαφορετικές παρτίδες κιτ.

Φέρετε όλα τα αντιδραστήρια σε θερμοκρασία δωματίου πριν από τη χρήση.

Αναμείξτε καλά όλα τα αντιδραστήρια και τα δείγματα με απαλή ανακίνηση ή

ανάδευση.

Εκτελέστε εις διπλούν ανάληψη των βαθμονομητών, των ορών ελέγχου και των

δειγμάτων. Συνιστάται κάθετη ευθυγράμμιση.

Χρησιμοποιήστε ένα καθαρό, πλαστικό δοχείο για να ετοιμάσετε το διάλυμα

πλύσης.

Χρησιμοποιείτε ένα καθαρό αναλώσιμο ρύγχος πιπέτας για την προσθήκη κάθε

διαφορετικού αντιδραστηρίου και δείγματος προκειμένου να αποφύγετε την

επιμόλυνση.

Αποφύγετε πιπέτες με μεταλλικά μέρη για τη διανομή του Χρωμογόνου

Διαλύματος και του Ανασχετικού Διαλύματος.

Η ακρίβεια βελτιώνεται με χρήση πιπετών υψηλής ακρίβειας ή

αυτοματοποιημένου εξοπλισμού διανομής με πιπέτες.

Τηρείτε τους χρόνους επώασης.

Για να αποφύγετε τη μετατόπιση, ο χρόνος μεταξύ της διανομής με πιπέτα του

πρώτου βαθμονομητή και του τελευταίου δείγματος πρέπει να περιορίζεται στο

χρόνο που αναφέρεται στην ενότητα XIII, παράγραφο E (μεσοδιάστημα).

Προετοιμάστε μια καμπύλη βαθμονόμησης για κάθε ανάλυση και μη

χρησιμοποιείτε δεδομένα από προηγούμενες αναλύσεις.

Διανείμετε το Χρωμογόνο Διάλυμα εντός 15 λεπτών από την πλύση της πλάκας

μικροτιτλοδότησης.

Κατά τη διάρκεια επώασης με το Χρωμογόνο Διάλυμα, αποφύγετε την έκθεση

της πλάκας μικροτιτλοδότησης σε άμεσο ηλιακό φως

B. Διαδικασία

Επιλέξτε τον απαιτούμενο αριθμό ταινιών για την ανάλυση. Οι μη χρησιμοποιημένες

ταινίες πρέπει να ξανασφραγιστούν μέσα στη σακούλα με τον αποξηραντικό

παράγοντα και να φυλαχτούν σε θερμοκρασία 2-8° C.

Ασφαλίστε τις ταινίες μέσα στο πλαίσιο στήριξης.

Διανείμετε με πιπέτα 50 µl από κάθε βαθμονομητή, ορό ελέγχου και δείγμα στις

κατάλληλες υποδοχές.

Διανείμετε με πιπέτα 50 µl αντι-hGH-HRP συζεύγματος εργασίας σε όλες

10.

11.

τις υποδοχές.

Επωάστε επί 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου - Η τήρηση 30 λεπτών

ως διάρκεια για αυτήν την επώαση είναι υποχρεωτική.

Αναρροφήστε το υγρό από κάθε υποδοχή.

Πλύνετε την πλάκα 3 φορές:

διανέμοντας 0,4 ml διαλύματος πλύσης σε κάθε υποδοχή.

αναρροφώντας το περιεχόμενο κάθε υποδοχής.

Διανείμετε με πιπέτα 100 µl του χρωμογόνου διαλύματος σε κάθε υποδοχή, εντός 15

λεπτών από το βήμα πλύσης.

Επωάστε επί 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου, αποφύγετε την άμεση έκθεση στην

ηλιακή ακτινοβολία.

Διανείμετε με πιπέτα 100 µl ανασχετικού διαλύματος σε κάθε υποδοχή.

Κάντε ανάγνωση των απορροφήσεων στα 450 nm (φίλτρο αναφοράς 630 nm ή 650 nm) εντός 1 ώρας και υπολογίστε τα αποτελέσματα όπως περιγράφεται στην ενότητα

XI.

XI.

ΥΠΟΛΟΓΙΣΜΟΣ ΤΩΝ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΩΝ

Κάντε ανάγνωση της πλάκας στα 450 nm έναντι ενός φίλτρου αναφοράς που

ρυθμίζεται στα 650 nm (ή τα 630 nm).

Υπολογίστε τη μέση τιμή των διπλών προσδιορισμών.

Σε ημιλογαριθμικό ή γραμμικό χαρτί γραφημάτων, παραστήστε γραφικά τις τιμές

OD (τεταγμένη) για κάθε βαθμονομητή έναντι της αντίστοιχης συγκέντρωσης της

5. hGH (τετμημένη) και σχεδιάστε μια καμπύλη βαθμονόμησης μέσω των σημείων του

βαθμονομητή, συνδέοντας με ευθείες γραμμές τα αποτυπωμένα σημεία.

Διαβάστε τη συγκέντρωση για κάθε ορό ελέγχου και δείγμα με αναγωγή στην

καμπύλη βαθμονόμησης.

Αναγωγή δεδομένων με τη βοήθεια ηλεκτρονικού υπολογιστή θα απλοποιήσει

αυτούς τους υπολογισμούς. Εάν χρησιμοποιείται αυτόματη επεξεργασία

αποτελεσμάτων, συνιστάται προσαρμογή καμπύλης λογιστικής συνάρτησης 4

παραμέτρων.

XII. ΤΥΠΙΚΑ ΔΕΔΟΜΕΝΑ

Τα ακόλουθα δεδομένα προορίζονται μόνο ως παράδειγμα και δεν πρέπει να

χρησιμοποιούνται ποτέ αντί της καμπύλης βαθμονόμησης πραγματικού χρόνου. hGH-EASIA Μονάδες OD

Βαθμονομητής

0 μIU/ml

0,45 μIU/ml

5,4 μIU/ml

12,9 μIU/ml

43,5 μIU/ml

98,0 μIU/ml

0,030

0,062

0,226

0,501

1,429

2,330

XIII. ΑΠΟΔΟΣΗ ΚΑΙ ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ

Όριο ανίχνευσης

Μετρήθηκαν είκοσι μηδενικοί βαθμονομητές μαζί με ένα σύνολο άλλων

βαθμονομητών. Το όριο ανίχνευσης, οριζόμενο ως η φαινομενική συγκέντρωση δύο

τυπικών αποκλίσεων πάνω από τις μέσες μετρήσεις OD σε μηδενική δέσμευση, ήταν

0,17 μIU/ml.

Ειδικότητα

Ορμόνες διασταυρούμενης αντιδραστικότητας προστέθηκαν σε ένα δείγμα ορού

ελέγχου hGH χαμηλής και υψηλής τιμής.

Μετρήθηκε η φαινομενική απόκριση της hGH.

Προστεθείσα ορμόνη

- hCG 100000 mIU/ml hPL 10000 ng/ml

PRL 12500 ng/ml hGH C1

µIU/ml

1,9

2,0

1,4

1,8 hGH C2

µIU/ml

13,5

14,3

13,0

12,6

Γ. Ακρίβεια

ΓΙΑ ΤΟΝ ΙΔΙΟ ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟ

Ορός

<X> ± Τ.Α.

(μIU/ml)

6,90 ± 0,34

16,61 ± 0,90

Σ.Δ.

(%)

4,9

5,4

Ορός

Τ.Α.: Τυπική απόκλιση, Σ.Δ.: Συντελεστής διακύμανσης

Δ. Ορθότητα

Δείγμα

ΔΟΚΙΜΑΣΙΑ ΑΝΑΚΤΗΣΗΣ

Προστεθείσα hGH

Ανακτηθείσα hGH

(μIU/ml) (μIU/ml)

ΜΕΤΑΞΥ ΔΙΑΦΟΡΕΤΙΚΩΝ

ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΩΝ

<X> ± Τ.Α.

(μIU/ml)

11,4

23,5

0,9

1,2

Σ.Δ.

(%)

8,1

5,1

Ανάκτηση

(%)

Ορός

Πλάσμα

4,3

13,5

26,8

52,1

4,3

13,5

26,8

52,1

4,1

12,8

28,1

58,9

4,6

13,2

25,3

53,0

105

113

106

102

Δείγμα Αραίωση

ΔΟΚΙΜΑΣΙΑ ΑΡΑΙΩΣΗΣ

Θεωρητική

συγκέντρωση

(μIU/ml)

Μετρηθείσα

συγκέντρωση

(μIU/ml)

Ορός 1 1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

1/64

48,8

24,4

12,2

6,1

3,1

97,7

57,0

27,7

13,6

6,4

3,0

Ορός 2

1/1

1/2

1/4

1/8

1/16

1/32

10,6

5,3

2,7

1,3

0,7

21,2

9,3

4,6

2,2

1,1

0,6

Τα δείγματα αραιώθηκαν με μηδενικό βαθμονομητή.

Συντελεστής μετατροπής:

1 µIU του βαθμονομητή ισοδύναμεί με 0,33 ng

E. Μεσοδιάστημα μεταξύ της διανομής τελευταίου βαθμονομητή και δείγματος

Όπως φαίνεται στη συνέχεια, τα αποτελέσματα του προσδιορισμού παραμένουν

αξιόπιστα ακόμα και όταν διανέμεται ένα δείγμα 60 λεπτά μετά την προσθήκη των

βαθμονομητών στα επιστρωμένα σωληνάρια.

ΜΕΣΟΔΙΑΣΤΗΜΑ

0 λεπτά

λεπτά

4,0

13,5

3,6

15,0

3,3

13,8

3,3

13,0

3,0

12,6

3,8

13,0

ΣΤ. Φαινόμενο αγκίστρου (hook)

Δείγμα που εμβολιάστηκε με hGH έως 4000 μIU/ml δίνει υψηλότερες μετρήσεις

οπτικής πυκνότητας (OD) από το σημείο του τελευταίου βαθμονομητή.

XIV. ΕΣΩΤΕΡΙΚΟΣ ΠΟΙΟΤΙΚΟΣ ΕΛΕΓΧΟΣ

Εάν τα αποτελέσματα που λαμβάνονται για τον ορό ελέγχου 1 ή/και τον ορό ελέγχου 2

δε βρίσκονται εντός του πεδίου τιμών που καθορίζεται στην ετικέτα του φιαλιδίου, τα

αποτελέσματα δεν είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν, εκτός εάν έχει δοθεί

ικανοποιητική εξήγηση για την ασυμφωνία.

Εάν είναι επιθυμητό, κάθε εργαστήριο μπορεί να δημιουργήσει τα δικά του μείγματα

δειγμάτων ελέγχου (pools), τα οποία πρέπει να διατηρούνται κατεψυγμένα σε

κλάσματα/δόσεις μιας χρήσης. Οροί ελέγχου που περιέχουν αζίδιο θα επιδράσουν στην

ενζυμική αντίδραση και δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν.

Τα κριτήρια αποδοχής για τη διαφορά μεταξύ των διπλών αποτελεσμάτων των

δειγμάτων θα πρέπει να βασίζονται σε ορθές εργαστηριακές πρακτικές.

Συνιστάται οι οροί ελέγχου να υποβάλλονται σε προσδιορισμό τακτικά ως άγνωστα

δείγματα για να μετράται η μεταβλητότητα του προσδιορισμού. Η απόδοση του

προσδιορισμού πρέπει να παρακολουθείται με διαγράμματα ποιοτικού ελέγχου των

ορών ελέγχου.

Είναι καλό το να ελέγχετε οπτικά την προσαρμογή της καμπύλης που επιλέχθηκε από

τον υπολογιστή.

XV.

ΤΙΜΕΣ ΑΝΑΦΟΡΑΣ

Οι τιμές αυτές παρέχονται μόνον ως οδηγός. Κάθε εργαστήριο θα πρέπει να καθιερώσει το

δικό του πεδίο φυσιολογικών τιμών.

Σε φυσιολογικά υποκείμενα, η έκκριση της αυξητικής ορμόνης (hGH) είναι παλμικού τύπου.

Κατά τη διάρκεια της ημέρας, οι συγκεντρώσεις της hGH κυμαίνονται από <0,2-10 μIU/ml.

Κατά τη διάρκεια του ύπνου, οι συγκεντρώσεις της hGH αυξάνονται σταθερά (± 30 μIU/ml).

Η έκκριση της hGH διεγείρεται κατά πολύ από την άσκηση και το στρες (φλεβική

παρακέντηση, υπογλυκαιμία, ...), αλλά μειώνεται από την υπεργλυκαιμία.

Σε φυσιολογικά υποκείμενα (n=34), δύο ώρες μετά από του στόματος λήψη γλυκόζης (75 g

σε ενηλίκους), τα επίπεδα της hGH ήταν χαμηλότερα από 10 μIU/ml και η απόκριση της hGH σε δοκιμασίες διέγερσης (χορήγηση ινσουλίνης, αργινίνης, γλυκαγόνης) υπερέβαινε τα

20 μIU/ml.

Τα επίπεδα της hGH ήταν αυξημένα (ακόμη και μετά τη χορήγηση γλυκόζης) στη

μεγαλακρία (> 10 μIU/ml).

Σε ανεπάρκεια hGH, η απόκριση στη δοκιμασία διέγερσης είτε δεν υπάρχει είτε έχει

αμβλυνθεί (μικρό ανάστημα λόγω ανεπάρκειας hGH, υποϋποφυσισμός προερχόμενος από

διάφορα αίτια).

XVI. ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΕΙΔΟΠΟΙΗΣΕΙΣ

Ασφαλείας

Μόνο για διαγνωστική χρήση in vitro.

Τα συστατικά ανθρώπινου αίματος που περιλαμβάνονται στο κιτ αυτό έχουν ελεγχθεί με

μεθόδους εγκεκριμένες στην Ευρώπη ή/και από τον FDA και έχει διαπιστωθεί ότι είναι

αρνητικά ως προς την παρουσία HBsAg, αντι-HCV, αντι-HIV-1 και 2. Καμία γνωστή

μέθοδος δεν είναι δυνατό να παρέχει πλήρη διασφάλιση ότι παράγωγα του ανθρώπινου

αίματος δε θα μεταδώσουν ηπατίτιδα, AIDS ή άλλες λοιμώξεις. Επομένως, ο χειρισμός

αντιδραστηρίων, δειγμάτων ορού ή πλάσματος θα πρέπει να γίνεται σύμφωνα με τις τοπικές

διαδικασίες περί ασφάλειας.

Όλα τα ζωικά προϊόντα και παράγωγα έχουν συλλεχθεί από υγιή ζώα. Τα βόεια συστατικά

προέρχονται από χώρες όπου δεν έχει αναφερθεί BSE. Παρ' όλ' αυτά, συστατικά που

περιέχουν ζωικές ουσίες θα πρέπει να αντιμετωπίζονται ως δυνητικώς μολυσματικά.

Αποφύγετε κάθε επαφή με το δέρμα με όλα τα αντιδραστήρια. Σε περίπτωση επαφής,

πλύνετε σχολαστικά με νερό.

Μην καπνίζετε, μην πίνετε, μην τρώτε και μη χρησιμοποιείτε καλλυντικά στο χώρο εργασίας.

Μην διανέμετε με πιπέτα χρησιμοποιώντας το στόμα σας. Χρησιμοποιείτε προστατευτικό

ρουχισμό και γάντια μιας χρήσης.

XVII. ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ

CAMANNI F., MASSARA F., BELFORTE L., ROSATELLO A., MOLENATTI

G.M. (1977)

Effect of dopamine on plasma growth hormone and prolactin levels in normal

and acromegalic subjects.

J. Clin. Endo. and Metab., 44:465.

DAUGHADAY W.H. (1981)

The adenohypophysis

In : "Textbook of Endocrinology", R.H. Williams ed., W.B. Saunders, Philadelphia, p;73.

3. DROBNY E.C., AMBURN K., BAUMANN G. (1983)

Circadian variation of basal plasma growth hormone in man.

J. Clin. Endo. and Metab., 57:524-528.

4. HASHIDA S., NAKAWAGA K., ISHIKAWA E., OHTAKI S. (1985)

Basal level of human growth hormone (hGH) in normal serum.

Clin. Chim. Acta, 151:185-186.

5. LEWIS V.J. et al. (1980)

Human growth hormone : A complex of proteins.

Rec. Progr. Horm. Res., 36:488.

6. LI C.H. (1974)

Human growth hormone : perspective on its chemistry and physiology.

In : "Advances in human growth hormone research", S. Raiti ed. U.S. Department of

Health, Education and Welfare Publ. DMEW publ. no. (NJH) 74-612, p. 321.

REUTENS AT. (1995)

Evaluation and application of a highly sensitive assay for serum growth hormone (GH) in the study of adult GH deficiency.

J. Clin. Endocrinol. Metab., 80(2): 480-485

CROWLEY S. et al. (1995)

Growth and the growth hormone axis in prepubertal children with asthma.

J. Pediatr. 126(2): 297-303.

KELLY JT. et al. (1993)

Effect of different oral oestrogen formulations on insulin-like growth factor I, growth hormone and growth hormone binding protein in post-menopausal women.

Clin. Endocrinol. 39(5) : 561-567

XVIII. ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΤΟΥ ΠΡΩΤΟΚΟΛΛΟΥ

ΒΑΘΜΟΝΟΜΗΤΕΣ

(µl)

ΔΕΙΓΜΑ(ΤΑ)

ΟΡΟΙ ΕΛΕΓΧΟΥ

(µl)

Βαθμονομητές (0-5)

Δείγματα, οροί ελέγχου

Αντι-hGH-HRP σύζευγμα

εργασίας

Επωάστε επί 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου

Αναρροφήστε το περιεχόμενο κάθε υποδοχής.

Πλύνετε 3 φορές με 400 µl διαλύματος πλύσης και αναρροφήστε.

Αποκαλυπτικό διάλυμα

100

Επωάστε επί 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου

Ανασχετικό διάλυμα 100 100

Κάντε ανάγνωση σε συσκευή ανάγνωσης πλακών μικροτιτλοδότησης και καταγράψτε

την απορρόφηση κάθε υποδοχής στα 450 nm (έναντι 630 ή 650 nm)

Αρ. καταλόγου DIAsource:

KAP1081

Αριθμός P.I.:

1700573/el

Αρ. αναθεώρησης:

090504/1

ημερομηνία αναθεώρησης : 2009-05-04

P.I. Number : 1701000

WASH SOLN CONC

CAL 0

CAL

CONTROL

125I

CONC

HRP

HRP CONC

CONJ

HRP

BUF

CONC

CHROM TMB CONC

CHROM TMB

SUB

STOP

INC

BUF

SOLN

SER

BUF

Ab AP

SUB

BIOT

PNPP

CONJ CONC

AVID

ASS

HRP

BUF

CONC

Ab BIOT

SAV HRP CONC

NSB

2nd Ab

ACID BUF

INC BUF

ACETONITRILE

SERUM

DIL SPE

DIL BUF

ANTISERUM

IMMUNOADSORBENT

DIL

REC

CAL

SOLN

PEG

EXTR SOLN

ELU SOLN

GEL

PRE SOLN

NEUTR SOLN

TRACEUR BUF

Used symbols

Reconstitution solution

Polyethylene glycol

Extraction solution

Elution solution

Bond Elut Silica cartridges

Pre-treatment solution

Neutralization solution

Tracer buffer

Microtiterplate

HRP Conjugate

HRP Conjugate concentrate

Conjugate buffer

Chromogenic TMB concentrate

Chromogenic TMB solution

Substrate buffer

Stop solution

Incubation serum

Buffer

AP Conjugate

Substrate PNPP

Biotin conjugate concentrate

Avidine HRP concentrate

Assay buffer

Biotin conjugate

Specific Antibody

Streptavidin HRP concentrate

Non-specific binding

2nd Antibody

Acidification Buffer

Consult instructions for use

Storage temperature

Use by

Batch code

Catalogue number

Control

In vitro diagnostic medical device

Manufacturer

Contains sufficient for <n> tests

Wash solution concentrated

Zero calibrator

Calibrator #

Control #

Tracer

Tracer concentrated

Tubes

Incubation buffer

Acetonitrile

Serum

Specimen diluent

Dilution buffer

Antiserum

Immunoadsorbent

Calibrator diluent

Symboles utilisés

Solution de reconstitution

Glycol Polyéthylène

Solution d’extraction

Solution d’elution

Cartouches Bond Elut Silica

Solution de pré-traitement

Solution de neutralisation

Tampon traceur

Microplaque de titration

HRP Conjugué

HRP Conjugué concentré

Tampon conjugué

Chromogène TMB concentré

Solution chromogène TMB

Tampon substrat

Solution d’arrêt

Sérum d'incubation

Tampon

AP Conjugué

Tampon PNPP

Biotine conjugué concentré

Avidine HRP concentré

Tampon de test

Biotine conjugué

Anticorps spécifique

Concentré streptavidine HRP

Liant non spécifique

Second anticorps

Tampon d'acidification

Consulter les instructions d’utilisation

Température de conservation

Utiliser jusque

Numéro de lot

Référence de catalogue

Contrôle

Dispositif médical de diagnostic in vitro

Fabricant

Contenu suffisant pour <n> tests

Solution de lavage concentrée

Calibrateur zéro

Calibrateur #

Contrôle #

Traceur

Traceur concentré

Tubes

Tampon d'incubation

Acétonitrile

Sérum

Diluant du spécimen

Tampon de dilution

Antisérum

Immunoadsorbant

Diluant de calibrateur

Revision nr 070716

P.I. Number : 1701000

WASH SOLN CONC

CAL 0

CAL

CONTROL

125I

CONC

HRP

HRP CONC

CONJ

HRP

BUF

CONC

CHROM TMB CONC

CHROM TMB

SUB

STOP

INC

BUF

SOLN

SER

BUF

Ab AP

SUB

BIOT

PNPP

CONJ CONC

AVID

ASS

HRP

BUF

CONC

Ab BIOT

SAV HRP CONC

NSB

2nd Ab

ACID BUF

INC BUF

ACETONITRILE

SERUM

DIL SPE

DIL BUF

ANTISERUM

IMMUNOADSORBENT

DIL

REC

CAL

SOLN

PEG

EXTR SOLN

ELU SOLN

GEL

PRE SOLN

NEUTR SOLN

TRACEUR BUF

Gebruikte symbolen

Raadpleeg de gebruiksaanwijzing

Bewaartemperatuur

Houdbaar tot

Lotnummer

Catalogusnummer

Controle

Medisch hulpmiddel voor in-vitro diagnostiek

Fabrikant

Inhoud voldoende voor <n> testen

Wasoplossing, geconcentreerd

Nulkalibrator

Kalibrator #

Controle #

Tracer

Tracer geconcentreerd

Buisjes

Incubatiebuffer

Acetonitrile

Serum

Specimen diluent

Verdunningsbuffer

Antiserum

Immunoadsorbent

Kalibratorverdunner

Reconstitutieoplossing

Polyethyleen glycol

Extractieoplossing

Elutieoplossing

Bond Elut Silica kolom

Pre-behandelingsoplossing

Neutralisatieoplossing

Tracerbuffer

Microtiterplaat

HRP Conjugaat

HRP Conjugaat geconcentreerd

Conjugaat buffer

Chromogene TMB geconcentreerd

Chromogene Oplossing TMB

Substraatbuffer

Stopoplossing

Incubatieserum

Buffer

AP Conjugaat

Substraat PNPP

Geconcentreerd Biotine conjugaat

Geconcentreerd Avidine-HRP conjugaat

Assay buffer

Biotine conjugaat

Specifiek antilichaam

Streptavidine-HRP concentraat

Aspecifieke binding

2de antilichaam

Verzuringsbuffer

Gebrauchte Symbolen

Rekonstitutionslösung

Polyethylenglykol

Extraktionslösung

Eluierungslösung

Bond Elut Silikakartuschen

Vorbehandlungslösung

Neutralisierungslösung

Tracer-Puffer

Mikrotiterplatte

HRP Konjugat

HRP Konjugat Konzentrat

Konjugatpuffer

Chromogenes TMB Konzentrat

Farblösung TMB

Substratpuffer

Stopplösung

Inkubationsserum

Puffer

AP Konjugat

Substrat PNPP

Biotin-Konjugat-Konzentrat

Avidin-HRP-Konzentrat

Assaypuffer

Biotin-Konjugat

Spezifischer Antikörper

HRP Streptavidinkonzentrat

Unspezifische Bindung

Sekundärer Antikörper

Ansäuerungspuffer

Gebrauchsanweisung beachten

Lagern bei

Verwendbar bis

Chargenbezeichnung

Bestellnummer

Kontrolle

In Vitro Diagnostikum

Hersteller

Ausreichend für <n> Ansätze

Waschlösung-Konzentrat

Null kalibrator

Kalibrator #

Kontrolle #

Tracer

Tracer Konzentrat

Röhrchen

Inkubationspuffer

Azetonitril

Humanserum

Probenverdünner

Verdünnungspuffer

Antiserum

Immunadsorbens

Kalibratorverdünnung

Revision nr 070716

P.I. Number : 1701000

WASH SOLN CONC

CAL 0

CAL

CONTROL

125I

CONC

HRP

HRP CONC

CONJ

HRP

BUF

CONC

CHROM TMB CONC

CHROM TMB

SUB

STOP

INC

BUF

SOLN

SER

BUF

Ab AP

SUB

BIOT

PNPP

CONJ CONC

AVID

ASS

HRP

BUF

CONC

Ab BIOT

SAV HRP CONC

NSB

2nd Ab

ACID BUF

INC BUF

ACETONITRILE

SERUM

DIL SPE

DIL BUF

ANTISERUM

IMMUNOADSORBENT

DIL

REC

CAL

SOLN

PEG

EXTR SOLN

ELU SOLN

GEL

PRE SOLN

NEUTR SOLN

TRACEUR BUF

Simboli utilizzati

Soluzione di ricostituzione

Polietilenglicole

Soluzione di estrazione

Soluzione di eluizione

Cartucce di silice bond elut

Soluzione di pretrattamento

Soluzione di neutralizzazione

Tracer Buffer

Piastra di microtitolazione

HRP Coniugato

HRP Coniugato concentrato

Buffer coniugato

Cromogena TMB concentrato

Soluzione cromogena TMB

Tampone substrato

Soluzione di arresto

Incubazione con siero

Buffer

AP Coniugato

Substrato PNPP

Concentrato coniugato con biotina

Concentrato avidina HRP

Soluzione tampone per test

Coniugato con biotina

Anticorpo Specifico

Streptavidina-HRP concentrata

Legame non-specifico

2° Anticorpo

Tampone Acidificante

Consultare le istruzioni per l’uso

Limitazioni di temperatura

Utilizzare entro

Numero di lotto

Numero di catalogo

Controllo

Dispositivo medico-diagnostico in vitro

Fabbricante

Contenuto sufficiente per <n> saggi

Tampone di lavaggio concentrato

Calibratore zero

Standard #

Controllo #

Marcato

Marcato concentrato

Provette

Tampone incubazione

Acetonitrile

Siero

Diluente campione

Tampone diluizione

Antisiero

Immunoassorbente

Diluente calibratore

Símbolos utilisados

Consultar las instrucciones de uso

Limitación de temperatura

Fecha de caducidad

Codigo de lote

Número de catálogo

Control

Producto sanitario para diagnóstico in vitro

Fabricante

Contenido suficiente para <n> ensayos

Solución de lavado concentrada

Calibrador cero

Calibrador #

Control #

Trazador

Trazador concentrada

Tubos

Tampón de incubación

Acetonitrilo

Suero

Diluyente de Muestra

Tampón de dilución

Antisuero

Inmunoadsorbente

Diluyente de calibrador

Solución de Reconstitución

Glicol Polietileno

Solución de extracción

Solución de elución

Cartuchos Bond Elut Silica

Solución de Pre-tratamiento

Solución de Neutralización

Tampón de trazador

Placa de microvaloración

HRP Conjugado

HRP Conjugado concentrada

Tampón de Conjugado

Cromógena TMB concentrada

Solución Cromógena TMB

Tampón de sustrato

Solución de Parada

Suero de Incubación

Tampón

AP Conjugado

Sustrato PNPP

Concentrado de conjugado de biotina

Concentrado avidina-HRP

Tampón de ensayo

Conjugado de biotina

Anticuerpo específico

Estreptavidina-HRP Concentrado

Unión no específica

Segundo anticuerpo

Tampón de Acidificación

Revision nr 070716

P.I. Number : 1701000

WASH SOLN CONC

CAL 0

CAL

CONTROL

125I

CONC

HRP

HRP CONC

CONJ

HRP

BUF

CONC

CHROM TMB CONC

CHROM TMB

SUB

STOP

INC

BUF

SOLN

SER

BUF

Ab AP

SUB

BIOT

PNPP

CONJ CONC

AVID

ASS

HRP

BUF

CONC

Ab BIOT

SAV HRP CONC

NSB

2nd Ab

ACID BUF

INC BUF

ACETONITRILE

SERUM

DIL SPE

DIL BUF

ANTISERUM

IMMUNOADSORBENT

DIL

REC

CAL

SOLN

PEG

EXTR SOLN

ELU SOLN

GEL

PRE SOLN

NEUTR SOLN

TRACEUR BUF

Símbolos utilizados

Solução de Reconstituição

Polietileno-glicol

Solução de Extracção

Solução de Eluição

Cartuchos de silica Bond Elut

Solução de pré-tratamento

Solução de neutralização

Tampão Marcador

Placa de micro titulação

HRP Conjugação

HRP Conjugação concentrada

Conjugue o tampão

Cromogénica TMB concentrada

Solução Cromogénica TMB

Tampão de substrato

Solução de Paragem

Soro de incubação

Tampão

AP Conjugação

Substrato PNPP

Concentrado conjugado de biotina

Concentrado HRP de avidina

Tampão de ensaio

Conjugado de biotina

Anticorpo específico

Estreptavidina HRP concentrado

Ligações não especificas

Anticorpo secundário

Tampão de acidificação

Consulte instruções de utilização

Temperatura de conservação

Utilizar antes de

Código de lote

Número de catálogo

Controlo

Dispositivo médico de diagnóstico in vitro

Fabricante

Conteúdo suficiente para <n> testes

Solução de lavagem concentrada

Calibrador zero

Calibrador #

Controlo #

Marcador

Marcador concentrada

Tubos

Tampão de incubação

Acetonitrilo

Soro

Diluidor de espécimes

Tampão de diluição

Anti-soro

Imunoadsorvente

Diluente do calibrador

Använda symboler

Läs instruktionerna före användning

Förvaringstemperatur

Används av

Lotnummer

Katalognummer

Kontroll

In vitro diagnostiskt kit

Tillverkare

Innehållet räcker till <n> prover

Tvättlösning, koncentrerad

Nollkalibrerare

Kalibrator #

Kontroll #

Radioisotop, antigen

Radioisotop, antikropp

Radioisotop, antigen koncentrerad

Radioisotop, antikropp koncentrerad

Rör

Inkuberingsbuffert

Acetonitril

Serum

Spädningsbuffert för prover

Spädningsbuffert

Antiserum

Immunoadsorberare

Kalibratordiluent

Rekonstitutionslösning

Polyetylenglykol

Extraktionslösning

Elueringslösning

Silikonpatroner för elueringsbindning

Förbehandlingslösning

Neutraliseringslösning

Tracerbuffert

Microtiterplatta

HRP-konjugat

HRP-konjugat-koncentrat

Konjugatbuffert

Kromogeniskt TMB-koncentrat

Kromogenisk TMB-lösning

Substratbuffert

Stoplösning

Inkubationsserum

Buffert

AP-konjugat

Substrat-PNPP

Biotinkonjugat koncentrat

Avidin HRP-koncentrat

Provbuffert

Biotinkonjugat

Revision nr 070716

P.I. Number : 1701000

WASH SOLN CONC

CAL 0

CAL

CONTROL

125I

CONC

HRP

HRP CONC

CONJ

HRP

BUF

CONC

CHROM TMB CONC

CHROM TMB

SUB

STOP

INC

BUF

SOLN

SER

BUF

Ab AP

SUB

BIOT

PNPP

CONJ CONC

AVID

ASS

HRP

BUF

CONC

Ab BIOT

SAV HRP CONC

NSB

2nd Ab

ACID BUF

INC BUF

ACETONITRILE

SERUM

DIL SPE

DIL BUF

ANTISERUM

IMMUNOADSORBENT

DIL

REC

CAL

SOLN

PEG

EXTR SOLN

ELU SOLN

GEL

PRE SOLN

NEUTR SOLN

TRACEUR BUF

Επεξήγηση συμβόλων

Συμβουλευτείτε τις οδηγίες χρήσης

Θερμοκρασία αποθήκευσης

Ημερομηνία λήξης

Αριθμός παρτίδας

Αριθμός καταλόγου

Πρότυπο ελέγχου

In Vitro Διαγνωστικό Ιατροτεχνολιγικό προιόν

Κατασκευαστής

Περιεχόμενο επαρκές για «ν» εξετάσεις

Συμπυκνωμένο διάλυμα έκπλυσης

Μηδενικός βαθμονομητής

Βαθμονομητής #

Ορός ελέγχου #

Ιχνηθέτης

Χρωμογόνος Ιχνηθέτης

Σωληνάρια

Ρυθμιστικό διάλυμα επώασης

Ακετονιτρίλιο

Ορός

Διάλυμα αραίωσης δειγμάτων

Ρυθμιστικό διάλυμα αραίωσης

Αντιορός

Ανοσοπροσροφητικό

Αραιωτικό βαθμονομητών

Διάλυμα ανασύστασης

Πολυαιθυλενογλυκόλη

Διάλυμα εκχύλισης

Διάλυμα έκλουσης

Φύσιγγες πυριτίου Bond Elut

Διάλυμα προεπεξεργασίας

Διάλυμα εξουδετέρωσης

Ρυθμιστικό διάλυμα

Πλάκα μικροτιτλοδότησης

HRP Σύζευγμα

Χρωμογόνος HRP Σύζευγμα

Ρυθμιστικό διάλυμα συζεύγματος

Χρωμογόνος TMB

Διάλυμα χρωμογόνου ΤΜΒ

Ρυθμιστικό διάλυμα υποστρώματος

Ανασχετικό αντιδραστήριο

Ορός επώασης

Ρυθμιστικό διάλυμα

AP Σύζευγμα

PNPP υποστρώματος

Συμπυκνωμένο αντιδραστήριο συζευγμένο με βιοτίνη

Συμπυκνωμένο διάλυμα αβιδίνης-HRP

Ρυθμιστικό διάλυμα προσδιορισμού

αντιδραστήριο συζευγμένο με βιοτίνη

Ειδικό Αντίσωμα

Συμπυκνωμένη στρεπταβιδίνη συνεξευγμένη με HRP

μη-ειδική δέσμευση

2ο Αντίσωμα

Ρυθμιστικό Διάλυμα όξινο

Anvendte symboler

Rekonstitueringsopløsning

Polyetylenglykol

Ekstraktionsopløsning

Elueringsopløsning

Patroner med bindingselueringssilica

Forbehandlingsopløsning

Neutraliseringsopløsning

Markørbuffer

Mikrotiterplade

HRP-konjugat

HRP-konjugat-koncentreret

Konjugatbuffer

Kromogen TMB-koncentreret

Kromogen TMB-opløsning

Substratbuffer

Stopopløsning

Inkubationsserum

Buffer

AP-konjugat

Substrat PNPP

Biotin konjugat koncentrat

Avidin HRP koncentrat

Prøvebuffer

Biotin konjugat

Læs brugsvejledningen

Opbevaringstemperatur

Anvend inden

Batchkode

Katalognummer

Kontrol

Medicinsk udstyr til in vitro-diagnosticering

Fabrikant

Indeholder nok til <n> test

Koncentreret vaskeopløsning

Nul-kalibrator

Kalibrator nr.

Kontrol nr.

Markør

Koncentreret markør

Tuber

Inkubationsbuffer

Acetonitril

Serum

Prøvediluent

Fortyndingsbuffer

Antiserum

Immonoadsorbent

Kalibratordiluent

Revision nr 070716

P.I. Number : 1701000

WASH SOLN CONC

CAL 0

CAL

CONTROL

125I

CONC

HRP

HRP CONC

CONJ

HRP

BUF

CONC

CHROM TMB CONC

CHROM TMB

SUB

STOP

INC

BUF

SOLN

SER

BUF

Ab AP

SUB

BIOT

PNPP

CONJ CONC

AVID

ASS

HRP

BUF

CONC

Ab BIOT

SAV HRP CONC

NSB

2nd Ab

ACID BUF

INC BUF

ACETONITRILE

SERUM

DIL SPE

DIL BUF

ANTISERUM

IMMUNOADSORBENT

DIL

REC

CAL

SOLN

PEG

EXTR SOLN

ELU SOLN

GEL

PRE SOLN

NEUTR SOLN

TRACEUR BUF

Stosowane symbole

Przed zastosowaniem zapoznać się z instrukcją

Temperatura przechowywania

Zużyć przed

Kod serii

Numer katalogowy

Kontrola

Urządzenie medyczne do diagnostyki in vitro

Producent

Zawartość wystarczająca do <n> testów

Roztwór płuczący stężony

Kalibrator zerowy

Kalibrator nr

Kontrola nr

Znacznik izotopowy

Znacznik izotopowy stężony

Probówki

Wymagana inkubacja buforu

Acetonitryl

Surowica

Rozcieńczalnik próbki

Bufor do rozcieńczania

Antysurowica

Immunoadsorbent

Rozcieńczalnik kalibratora

Roztwór do rozcieńczania

Glikol poli(oksy)etylenowy

Roztwór ekstrakcyjny

Roztwór elucyjny

Kolumny krzemionkowe Bond Elut

Roztwór do przygotowania wstępnego

Roztwór neutralizujący

Bufor znacznika mikropłytka

Koniugat peroksydazy chrzanowej

Koncentrat koniugatu peroksydazy chrzanowej

Bufor do koniugacji

Koncentrat chromogenu TMB (czterometylobenzydyny)

Roztwór chromogenu TMB (czterometylobenzydyny)

Bufor substratu

Roztwór zatrzymujący reakcję

Wymagana inkubacja surowicy

Bufor

Koniugat AP (fosfatazy alkalicznej) p-nitrofenylofosforan substratowy

Koncentrat koniugatu biotyny

Koncentrat peroksydazy chrzanowej z awidyną

Bufor do oznaczania

Koniugatu biotyny

Przeciwciało swoiste

Koncentrat streptawidyny HRP

Wiązanie nieswoiste

Drugie przeciwciało

Bufor zakwaszający

Használt szimbólumok

Mintaelőkészítő oldat

Polietilén glikol

Extrakciós oldat

Eluáló oldat

Bond Elut Silica szilikagél patronok

Előkezelő oldat

Semlegesítő oldat

Nyomjelző izotóp higító puffer

Mikrotiter lemez

HRP konjugátum

HRP konjugátum koncentrátum

Konjugátum puffer

Kromogén TMB koncentrátum

Kromogén TMB oldat

Szubsztrát puffer

Stop oldat

Inkubációs szérum

Puffer

AP konjugátum

Szubsztrát PNPP

Biotin konjugátum koncentrátum

Avidin HRP koncentrátum

Vizsgálati puffer

Biotin konjugátum

Specifikus ellenanyag

Sztreptavidin HRP koncentrátum

Nem-specifikus kötődés

Másodlagos ellenanyag

Savas puffer

Olvassa el a használati útmutatót

Tárolási hőmérséklet

Lejárati idő

Gyártási kód

Katalógus szám

Kontrol

In vitro diagnosztikai eszköz

Gyártó

Tartalma <n> teszt elvégzésére elegendő

Mosó folyadék koncentrátum

Zero kalibrátor

Kalibrátor #

Kontrol #

Nyomjelző izotóp

Nyomjelző izotóp koncentrátum

Csövek

Inkubáló puffer

Acetonitril

Szérum

Mintahigító

Higító puffer

Antiszérum

Immunadszorbens

Kalibrátor higító

Revision nr 070716

P.I. Number : 1701000

WASH SOLN CONC

CAL 0

CAL

CONTROL

125I

CONC

HRP

HRP CONC

CONJ

HRP

BUF

CONC

CHROM TMB CONC

CHROM TMB

SUB

STOP

INC

BUF

SOLN

SER

BUF

Ab AP

SUB

BIOT

PNPP

CONJ CONC

AVID

ASS

HRP

BUF

CONC

Ab BIOT

SAV HRP CONC

NSB

2nd Ab

ACID BUF

INC BUF

ACETONITRILE

SERUM

DIL SPE

DIL BUF

ANTISERUM

IMMUNOADSORBENT

DIL

REC

CAL

SOLN

PEG

EXTR SOLN

ELU SOLN

GEL

PRE SOLN

NEUTR SOLN

TRACEUR BUF

Използвани символи

Вижте инструкцията за работа

Температура на съхранение

Използвайте с

Партиден код

Каталожен номер

Контрол

Ин витро диагностично медицинско изделие

Производител

Съдържание достатъчно за <n> теста

Концентриран измиващ разтвор

Нулев калибратор

Калибратор #

Контрол #

Трейсър

Концентриран маркер

Епруветки

Инкубационен буфер

Ацетонитрил

Серум

Разредител за пробите

Буфер за разреждане

Антисерум

Имуноабсорбент

Разредител за калибратора

Пресъздаващ разтвор

Полиетилен гликол

Екстрактов разтвор

Разтвор за елюиране

Силикагелни пълнители

Пред-лечебен разтвор

Неутрализиращ ратвор

Маркерен буфер

Микротитърна пластина

HRP конюгат / Конюгат на хрянова пероксидаза

HRP конюгиран концентрат

Буфер за конюгата

Хромогенен TMB концентрат

Хромогенен TMB разтвор

Субстратен буфер

Стоп разтвор

Инкубационен серум

Буфер

AP конюгат / конюгат на алкална фосфатаза

Субстрат PNPP / пара нитрофенил фосфат

Биотин конюгиран концентрат

Авидин HRP концентрат

Буфер за пробите

Биотин конюгат специфично антитяло стрептавидин HRP концентрат не специфично свързване второ антитяло киселинизиращ буфер

Revision nr 070716

Hello! I am an AI chatbot specifically trained to assist you with the DIAsource KAP1081 hGH-EASIA hGH assay Instruction manual. I have thoroughly reviewed the document and can help you locate the exact information you need or explain the content in clear and simple terms. Whether you’re looking for guidance on specific features, troubleshooting steps, or general usage, feel free to ask your questions. The more details you provide about your concerns or needs, the more accurately and effectively I can assist you!

Show related prompts

Assistant typing

Assistant terminated

It looks like you''ve reached a document that is written in multiple languages, including one that isn''t your native language. You can use the following links to temporarily hide pages without the language you prefer.

Key features

Solid phase Enzyme Amplified Sensitivity Immunoassay
Quantitative in vitro determination
Human Growth Hormone (hGH) measurement
Serum and plasma samples
High sensitivity and accuracy
Easy to use and interpret

Frequently asked questions

The DIAsource hGH-EASIA is a solid phase Enzyme Amplified Sensitivity Immunoassay for the quantitative in vitro measurement of human Growth Hormone (hGH) in serum and plasma.

The hGH-EASIA kit can be used with serum or plasma samples.

The detection limit of the hGH-EASIA kit is 0.17 μIU/ml.

hGH-EASIA

hGH-EASIA

I. INTENDED USE

Immunoenzymetric assay for the in vitro quantitative measurement of human Growth Hormone (hGH) in serum and plasma.

II. GENERAL INFORMATION

A. Proprietary name : DIAsource hGH-EASIA Kit

B. Catalogue number : KAP1081 : 96 tests

C. Manufactured by : DIAsource ImmunoAssays S.A.

Rue de l'Industrie, 8, B-1400 Nivelles, Belgium.

For technical assistance or ordering information contact :

Tel : +32 (0)67 88.99.99 Fax : +32 (0)67 88.99.96

III. CLINICAL BACKGROUND

hGH-EASIA

I. BUT DU DOSAGE

Trousse de dosage immunoenzymatique pour la mesure quantitative in vitro de l’hormone de croissance (hGH) dans le sérum et le plasma humain.

II. INFORMATIONS GENERALES

A. Nom du produit : DIAsource hGH-EASIA kit

B. Numéro de catalogue : KAP1081 : 96 tests

C. Fabriqué par : DIAsource ImmunoAssays S.A.

Rue de l'Industrie, 8 B-1400 Nivelles Belgium.

Pour une assistance technique ou une information sur une commande :

Tel : +32 (0)67 88.99.99 Fax : +32 (0)67 88.99.96

III. CONTEXTE CLINIQUE

hGH-EASIA

I. VERWENDUNGSZWECK

Ein immunenzymetrisches Assay für die quantitative in vitro Bestimmung von humanem

Wachstumshormon (hGH) in Serum und Plasma.

II. ALLGEMEINE INFORMATION

A. Handelsbezeichnung : DIAsource hGH-EASIA Kit

B. Katalognummer : KAP1081 : 96 Tests

C. Hergestellt von: DIAsource ImmunoAssays S.A.

Rue de l'Industrie, 8, B-1400 Nivelles, Belgien.

Für technische Unterstützung oder Bestellungen wenden Sie sich bitte an:

Tel : +32 (0)67 88.99.99 Fax : +32 (0)67 88.99.96

III. KLINISCHER HINTERGRUND

hGH -EASIA

I. USO DEL KIT

Kit immunoenzimetrico per la determinazione quantitativa in vitro dell’Ormone della Crescita umano

(hGH) in siero o plasma.

II. INFORMAZIONI DI CARATTERE GENERALE

A. Nome commerciale: DIAsource hGH-EASIA Kit

B. Numero di catalogo: KAP1081: 96 test

C. Prodotto da: DIAsource ImmunoAssays S.A.

Rue de l’Industrie, 8, B-1400 Nivelles, Belgio.

Per informazioni tecniche o su come ordinare il prodotto contattare:

Tel: +32 (0) 67 88.99.99 Fax: +32 (0) 67 88.99.96

III. INFORMAZIONI CLINICHE

A. Attività biologiche

B. Applicazione clinica

hGH-EASIA

Ι. ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΕΤΑΙ

Ανοσοενζυμομετρικός προσδιορισμός για την in vitro ποσοτική μέτρηση της ανθρώπινης αυξητικής

ορμόνης (hGH) στον ορό και το πλάσμα.

II. ΓΕΝΙΚΕΣ ΠΛΗΡΟΦΟΡΙΕΣ

A. Εμπορική ονομασία: Κιτ hGH-EASIA της DIAsource

B.

Αριθμός καταλόγου:

KAP1081: 96 προσδιορισμοί

Γ. Κατασκευάζεται από την: DIAsource ImmunoAssays S.A.

Rue de l'Industrie, 8, B-1400 Nivelles, Belgium.

Για τεχνική βοήθεια ή πληροφορίες σχετικά με παραγγελίες επικοινωνήστε στα:

Τηλ.: +32 (0)67 88.99.99 Φαξ: +32 (0)67 88.99.96

III. ΚΛΙΝΙΚΟ ΥΠΟΒΑΘΡΟ

What is the intended use of the hGH-EASIA kit?

What kind of samples can be used with the hGH-EASIA kit?

What is the detection limit of the hGH-EASIA kit?

Related

Shad Y0NM15ST Manual

HIV test HIV BLOT 2.2 - Manuale d'istruzioni

HIV Blot HIV BLOT 2.2 - Manuale di istruzioni

CEA DNOV060 Instruction Manual

FSH ELISA KAPD1288 - Instruction For Use

Access HCV Ab PLUS Istruzioni per l'uso - BIO-RAD

Istruzioni per l'uso HIV combo A59428, HIV combo A59429, HIV combo A59430

SHBG ELISA KAPD2996 Instruction for Use

Microlife Microlife Control Solution Level 1 for all models of Microlife Blood Glucose Monitoring Systems Εγχειρίδιο χρήστη

BIO-RAD Access HIV combo, Access HIV combo Calibrators, Access HIV combo QC HIVcombo Οδηγίες Χρήσης

SHBG ELISA KAPD2996 Instructions