DIAsource 4.0 Manuel utilisateur
Voici de brèves informations sur Anti-HCV Elisa 4.0. L’Anti-HCV Elisa V 4.0 est un kit de diagnostic par essai immuno-enzymatique de quatrième génération pour la détection qualitative in vitro d’anticorps dirigés contre le virus de l’hépatite C (anti-HCV) dans le sérum ou le plasma humain. Le conjugué HCV Ag•HRPO dilué est ajouté aux puits et entraîne la formation du complexe (HCV) • (Anti-HCV) • (HCV Ag•HRPO).
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Anti-HCV Elisa 4.0 KAPG4NAE3 DIAsource ImmunoAssays S.A. - Rue du Bosquet, 2 - B-1348 Louvain-la-Neuve - Belgium : 110711/3 en KAPG4NAE3 IN VITRO DIAGNOSTIC USE DIAsource ImmunoAssays SA - Rue du Bosquet 2, B-1348 Louvain-la-Neuve, Belgium Tel: +32 10 84 99 11 - Fax : +32 10 84 99 90 1) 2) B. Components (1) Description Qt. per 96 tests 1 plate 1bottle, 1.8 ml 1 bottle, 3.0 ml HCV Antigens Plate Ag (2) HRP CONC Conc. HCV Ag•HRPO Conjugate CONTROL H (3) Anti-HCV Positive Control CONTROL (4) Catalogue Nr: KAPG4NAE3 L PI number : 1701265 CONJ BUF (5) Conjugate Diluent CONC (6) 1bottle, 24 ml 1 bottle, 12 ml 1 bottle 110 ml 1 bottle 12 ml (7) SUB BUF Substrate Buffer WASH SOLN CONC (9) SOLN 4) Catalogue Nr: KAPG4NAE3 PI number : 1701265 8 1 50 16 2 100 24 3 150 32 4 200 40 5 250 48 6 300 56 7 350 64 8 400 72 - 80 9 450 81 - 96 10 500 Catalogue Nr: KAPG4NAE3 PI number : 1701265 PI number : 1701265 Anti-HCV Positive Control HCV Antigens Plate Conc. HCV Antigen•HRPO Conjugate Solution State Stability Original 1 month Original 1 month Original 1 month Original 1 month Original 1 month Room temp. Diluted 6 hours Diluted 2 days Conjugate Diluent Room temp. Catalogue Nr: KAPG4NAE3 PI number : 1701265 Original 1 month Original Room temp. Substrate Buffer TMB Substrate Solution Mixture Room temp. Room temp. 1 month Diluted 2 days Diluted 1 week Original 1 month Original 1 month Mixture 6 hours Original 1 month n tests 5169 200 100 5369 n reactive 12 1 0 13 30 30 ♦ Anti-HCV Elisa V 4.0 25 25 ♦ Anti-HCV Elisa V 4.0 20 Anti HCV (S/Co) Anti-HCV IgG (S/Co) 20 15 10 10 5 5 0 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 0 2 Dilution Steps Catalogue Nr: KAPG4NAE3 4 6 8 10 12 14 16 18 20 Dilution Steps PI number : 1701265 ♦ Anti-HCV Elisa V 4.0 20 30 ♦ Anti-HCV Elisa V 4.0 25 15 20 Anti HCV (S/Co) Anti-HCV (S/Co) GBC NANBASE C-96 3.1 Reihe2 15 Reihe3 10 10 5 5 0 0 10 20 30 40 50 60 70 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 -5 20 Dilution Step Dilution Steps PeliCheck Anti-HCV Reference Panel 30 Anti-HCV (S/Co) 25 20 15 10 5 0 0 2 4 6 8 10 Dilution Step 10,000 8,000 6,000 4,000 2,000 0,000 0,000 5,000 10,000 15,000 20,000 25,000 30,000 35,000 GBC NANBASE C-96 3.1 = 100% Anti-HCV Elisa V 4.0 = 100 % 4.12.5) Precision Catalogue Nr: KAPG4NAE3 PI number : 1701265 Positive Serum 2 Positive Control Mean CV (%) Mean CV (%) Mean CV (%) Day 1 4.49 7.22 9.01 5.94 21.79 4.91 Day 2 4.16 13.06 8.54 9.41 21.44 4.23 Day 3 5.07 5.24 10,64 9,27 21,70 3,08 Mean 4.57 8.51 9.40 8.21 21.64 4.07 2. Total Imprecision ↓ PI number : 1701265 5) Revision date : 2011-07-11 Catalogue Nr: KAPG4NAE3 PI number : 1701265 Anti-HCV Elisa V 4.0. Pour la détection qualitative in vitro d’anticorps dirigés contre le virus de l’hépatite C (anti-HCV) dans le sérum ou le plasma humain fr KAPG4NAE3 DIAGNOSTIC IN VITRO DIAsource ImmunoAssays SA - Rue du Bosquet 2, B-1348 Louvain-la-Neuve, Belgique Tél : +32 10 84 99 11 - Fax : +32 10 84 99 90 1) BUT DU DOSAGE L’anti-HCV Elisa V 4.0 est un kit de diagnostic par essai immuno-enzymatique de quatrième génération pour la détection qualitative in vitro d’anticorps dirigés contre le virus de l’hépatite C (anti-HCV) dans le sérum ou le plasma humain. 2) THÉORIE DE FONCTIONNEMENT/BRÈVE DESCRIPTION DU PRODUIT L’anti-HCV Elisa V 4.0 applique le « principe du sandwich direct » comme base de l’essai pour détecter les anticorps dirigés contre le virus de l'hépatite C (anti-HCV). Il s’agit d’un kit d’essai immuno-enzymatique de quatrième génération qui utilise des antigènes HCV recombinants (antigènes capsidiques, NS3 et NS5) pour détecter des anticorps dirigés contre le virus de l’hépatite C (anti-HCV) dans le sérum ou le plasma humain.*1-3 Ces antigènes, réactifs pour les anticorps prédominants dirigés contre le HCV, constituent l’absorbant antigénique de la phase solide. Lorsque le sérum ou le plasma humain est ajouté aux puits, les antigènes HCV et l’anti-HCV forment des complexes sur les puits si des anti-HCV sont présents dans l’échantillon. Les puits sont rincés pour retirer le matériel non lié. Le conjugué HCV Ag•HRPO dilué est ajouté aux puits et entraîne la formation du complexe (HCV) • (Anti-HCV) • (HCV Ag•HRPO). Après lavage du conjugué non lié, une solution de substrat TMB est ajoutée pour coloration. L’intensité de la coloration est proportionnelle à la quantité d’anticorps présents dans l’échantillon. Les processus de réaction sont décrits ci-dessous : A. Échantillon (contenant des Anti-HCV) : 1. Plaque (antigènes HCV) + échantillon (contenant des Anti-HCV) → plaque (antigène HCV)•Anti-HCV 2. Laver pour retirer le matériel non lié. 3. Plaque (antigène HCV)•Anti-HCV + HCV Ag•HRPO → Plaque complexe (antigènes HCV)•Anti-HCV•HCV Ag•HRPO 4. Laver pour retirer le matériel non lié. 5. Plaque complexe (antigènes HCV) •Anti-HCV•HCV Ag•HRPO + solution TMB → couleur bleu clair à bleu 6. Couleur bleu clair à bleu + solution d’arrêt → couleur jaune clair à jaune, mesurée à 450 nm avec une longueur d’onde de référence sélectionnée entre 620 et 690 nm*4 B. Échantillon (sans anti-HCV humain) : 1. Plaque (antigènes HCV) + échantillon (sans Anti-HCV) → plaque (antigène HCV) 2. Laver pour retirer le matériel non lié. 3. Plaque (antigènes HCV) + HCV Ag•HRPO → plaque (antigènes HCV) ------ Aucun complexe ne se forme 4. Laver pour retirer le matériel non lié. 5. Plaque (antigènes HCV) + solution TMB (incolore) → incolore 6. Incolore + solution d’arrêt → incolore, mesuré à 450 nm avec une longueur d’onde de référence sélectionnée entre 620 et 690 nm*4 3) DESCRIPTION DU MATÉRIEL FOURNI ET DU SYSTÈME DE CODE DU PRODUIT ● Les articles 1 - 7 du tableau de réactifs suivant doivent être réfrigérés entre +2 et +8 °C. La solution de lavage D (20X) et la solution d’arrêt peuvent être conservées entre +2 et +30 °C. ARTICL ES (1) Composants 1 plaque Contient de l’HCV Ag•Peroxydase (raifort) dans un tampon avec du sérum bovin. Conservateurs : 0,005 % d’azoture de sodium et 0,05 % de stabilisateur d'enzyme. 1 flacon, 1,8 ml Plasma humain inactivé positif pour l’antiHCV. Conservateur : 0,099 % d’azoture de sodium. 1 flacon, 2,0 ml Plasma humain normal non réactif pour les anticorps dirigés contre l’HCV. Conservateurs : 0,099 % d’azoture de Contrôle Hépatite C sodium. négatif 1 flacon, 3,0 ml HRP CONC Conjugué HCV Ag•HRPO concentré CONTROL H (3) Contrôle Anti-HCV positif CONTROL (4) Qté par 96 tests Plaque de microtitration tapissée d’antigènes HCV. Plaque antigènes HCV Ag (2) Description Nº de catalogue : KAPG4NAE3 L Nº de PI : 1701265 Nº de révision : 110711/1 Tampon PB avec du sérum bovin et du Tween-20. Conservateurs : 0,005 % d’azoture de sodium et 0,05 % de Diluant du conjugué stabilisateur d’enzyme. CONJ (5) (6) BUF CONC Chromogéne TMB concentré SUB (7) BUF Tampon du substrat RINC 3, 3’, 5, 5’-tétraméthylbenzidine (TMB) dans une base organique. 1 flacon, 12 ml Tampon acide citrique avec peroxydase d’hydrogène urée 1 flacon, 12 ml 1 flacon 110 ml Solution d'arrêt 1 flacon 12 ml (8) Solution de lavage D conc. (20X) STOP (9) 1 flacon, 24 ml SOLN Solution d'arrêt ● MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI ARTICLES Composants (1) Micropipettes de 50 µl, 100 µl, 200 µl et 1 ml et des embouts sont nécessaires. (2) Bain-marie à 37 +/- 1° ou incubateur à 37 +/- 1°. (3) Tubes pour la dilution de l’échantillon. (4) Matériel de lavage de la plaque. Lecteur de micropuits ELISA : (5) Longueur d’onde double à 450 nm avec longueur d’onde de référence de 620 à 690 nm*4, bande passante 10 nm. (6) Eau purifiée : eau distillée ou désionisée. Un analyseur de microplaque pour EIA totalement automatique est facultatif. L’utilisateur doit valider l’analyseur de (7) microplaque pour EIA automatique par rapport au kit. (8) Bande adhésive 4) MODE D’EMPLOI 4.1) Avertissements 4.1.1) Ce kit de réactifs est uniquement à usage professionnel. 4.1.2) Ce kit de réactifs est uniquement destiné à un diagnostic in vitro. 4.1.3) Placer l’ensemble des réactifs du kit et des échantillons à température ambiante (+20 à +30 °C) et mélanger soigneusement avant utilisation. 4.1.4) Ne pas utiliser les réactifs après la date d’expiration. 4.1.5) Ne pas échanger les réactifs entre différents lots. 4.1.6) Ne pas porter la pipette à la bouche. 4.1.7) Ne pas fumer ou manger dans les zones où des échantillons ou des réactifs sont manipulés. 4.1.8) Tous les composants du kit et les échantillons doivent être considérés comme potentiellement dangereux pour la santé. Ils doivent être utilisés et éliminés conformément aux procédures de sécurité de votre laboratoire. Ces procédures de sécurité incluent probablement le port de gants de protection et éviter de produire des aérosols. 4.1.9) Les échantillons potentiellement infectieux et les déversements ou fuites non acides doivent être nettoyés minutieusement à l’aide d’hypochlorite de sodium à 5 % ou traités selon votre procédure de contrôle des risques biologiques potentiels. 4.1.10) Avant d’éliminer les échantillons et les kits de réactifs usagés dans les ordures ménagères, ils doivent être traités conformément à la procédure locale de traitement des déchets biologiques potentiellement dangereux ou comme suit : Les déchets liquides et solides doivent être stérilisés par autoclave à +121 °C pendant au moins 30 minutes. Les déchets solides peuvent également être incinérés. Les déchets liquides non acides peuvent être traités à l’aide d’hypochlorite de sodium dilué à une concentration finale de 1 %. Les déchets liquides acides doivent être neutralisés avant traitement à l’aide d’hypochlorite de sodium tel que mentionné cidessus et doivent être stérilisés pendant 30 minutes pour obtenir une désinfection effective. 4.1.11) La solution d’arrêt est un irritant pour la peau, les yeux, les voies respiratoires et les muqueuses. Éviter le contact de la solution d’arrêt avec la peau et les muqueuses. En cas de contact, laver immédiatement et abondamment à l’eau. En cas d’inhalation, respirer immédiatement de l’air frais et consulter un médecin en cas de douleur. 4.1.12) Le chromogéne TMB concentré contient un solvant organique inflammable. Le chromogéne TMB concentré contient du sulfoxyde de diméthyle, un irritant pour la peau et les muqueuses. 4.1.13) Bien que tous les échantillons d’origine humaine soient testés exempts d’HBsAg et d’anti-HIV et ont été inactivés à +56 °C pendant une heure, le réactif doit être manipulé comme une substance potentiellement infectieuse. *5 Nº de catalogue : KAPG4NAE3 Nº de PI : 1701265 Nº de révision : 110711/1 4.2) Collecte et stockage des échantillons 4.2.1) Du sérum ou du plasma peut être utilisé avec ce kit de diagnostic. Les échantillons de sang total doivent être séparés au plus tôt pour éviter l’hémolyse. Toute particule (par ex., caillots de fibrine, érythrocytes) contenue dans l’échantillon doit être retirée avant utilisation. 4.2.2) Les échantillons doivent être stockés entre +2 et +8 °C et éviter l’inactivation par la chaleur pour minimiser la détérioration. Pour un stockage de longue durée, ils doivent être congelés en dessous de -20 °C. Un stockage en congélateur à dégivrage automatique n’est pas recommandé. 4.2.3) Les échantillons congelés doivent être entièrement décongelés et mélangés de façon homogène avant le test. 4.2.4) Éviter les procédures de congélation-décongélation multiples. 4.2.5) Les sérums partiellement coagulés et les échantillons avec une contamination bactérienne ne doivent pas être utilisés. 4.3) Stockage des réactifs 4.3.1) Le kit doit être conservé entre +2 et +8 °C. Ne pas congeler. 4.3.2) Les barrettes de la plaque doivent être utilisées dans le mois suivant l’ouverture du sachet en aluminium d’origine. Les barrettes non utilisées doivent être conservées dans le sachet en aluminium qui doit être solidement fermé. 4.3.3) Replacer les réactifs entre +2 et +8 °C immédiatement après utilisation. 4.3.4) La solution de lavage concentrée (20X) peut être conservée à température ambiante pour éviter la cristallisation, car les kits sont conservés et expédiés entre +2 et +8 °C. Si des cristaux se sont formés avant utilisation, réchauffer la solution dans un bainmarie à 37 °C jusqu’à dissolution des cristaux. 4.4) Procédure de lavage de la plaque 4.4.1) Préparation de la solution de lavage : Diluer la solution de lavage D concentrée (20X) avec de l’eau distillée ou désionisée pour obtenir une dilution 1:20. Ne pas utiliser d’eau du robinet. 4.4.2) Lavage de la plaque : (a) Pour un laveur de plaques avec fonction d’aspiration du trop-plein : 6 cycles avec au moins 0,5 ml de tampon de lavage par puits par cycle. Ou (b) Pour un laveur de plaques sans fonction d’aspiration du trop-plein : 8 cycles avec au moins 0,35 ml de tampon de lavage par puits par cycle. 4.4.3) Sécher la plaque en la retournant et en la tapotant fermement sur du papier absorbant. Une trop grande quantité de tampon de lavage résiduel entraînera des résultats erronés. AVERTISSEMENT Un lavage insuffisant entraînera des résultats erronés. 4.5) Procédure du test 4.5.1) Placer tous les réactifs et échantillons à température ambiante (+20 à +30 °C) avant l’essai. Régler le bain-marie ou l’incubateur à 37±1 °C. 4.5.2) Préparation du conjugué dilué 1. Utiliser uniquement un récipient propre pour éviter une contamination. 2. Préparer un conjugué dilué en réalisant une dilution 1:20 du conjugué HCV Ag•HRPO concentré avec le diluant du conjugué, ou selon le tableau de préparation du conjugué ci-dessous. Remuer doucement pour bien mélanger et éviter la mousse. 3. La solution de conjugué dilué en excès doit être jetée après utilisation. Tableau de préparation du conjugué : Volume nécessaire de diluant Nombre de puits utilisés du conjugué (ml) Volume nécessaire de conjugué HCV Ag• HRPO conc. (µl) 8 1 50 16 2 100 24 3 150 32 4 200 40 5 250 48 6 300 56 7 350 64 8 400 72 - 80 9 450 81 - 96 10 500 4.5.3) Laisser un puits pour le blanc. Ne pas ajouter d’échantillon ou de diluant de l’échantillon au puits pour le blanc. 4.5.4) Préparer le nombre nécessaire de puits, y compris 1 puits pour le blanc, 3 puits pour le contrôle négatif, 2 puits pour le contrôle positif et 1 puits pour chaque échantillon. Nº de catalogue : KAPG4NAE3 Nº de PI : 1701265 Nº de révision : 110711/1 4.5.5) Ajout de l’échantillon : 4.5.5.1) Ajouter 100 µl de contrôle positif, contrôle négatif et échantillon à chaque puits approprié de la plaque d’antigènes HCV. 4.5.5.2) Bien mélanger en tapotant la plaque. REMARQUE : Utiliser un nouvel embout de pipette après chaque prélèvement pour éviter la contamination croisée. 4.5.6) Sceller la plaque avec une bande adhésive. 4.5.7) Incuber la plaque dans un bain-marie ou un incubateur à circulation d’air à 37 + 1 °C pendant 60 minutes. REMARQUE : Ne pas empiler les plaques. 4.5.8) À la fin de la période d’incubation, retirer soigneusement et jeter la bande adhésive. 4.5.9) Laver la plaque selon le paragraphe 4.4) Procédure de lavage de la plaque. 4.5.10) Ajouter 100 µl de conjugué dilué à chaque puits sauf au blanc. 4.5.11) Sceller la plaque avec une bande adhésive. 4.5.12) Incuber la plaque dans un bain-marie ou un incubateur à circulation à 37 + 1 °C pendant 30 minutes. 4.5.13) Répéter les étapes 4.5.8) et 4.5.9). 4.5.14) Sélectionner l’une des deux méthodes suivantes pour la coloration : A. Mélanger immédiatement avant utilisation des volumes identiques de chromogéne TMB concentré et de tampon du substrat dans un récipient propre. Ajouter 100 µl de la solution de mélange à chaque puits, y compris au blanc. B. Ajouter tout d’abord 50 µl de chromogéne TMB concentré, puis ajouter 50 µl de tampon du substrat à chaque puits, y compris au blanc. Bien mélanger avec précaution. REMARQUE : Le chromogéne TMB concentré doit être incolore à bleu clair ; sinon, il faut le jeter. Le mélange de chromogéne TMB concentré et de tampon du substrat doit être utilisé dans les 30 minutes après le mélange. Le mélange doit être tenu à l’écart de toute lumière intense. 4.5.15) Sceller la plaque à l'aide d’une bande adhésive et incuber à 37 ± 1 °C pendant 15 minutes. 4.5.16) Stopper la réaction en ajoutant 100 µl de solution d’arrêt à chaque puits, y compris au blanc. 4.5.17) Déterminer l’absorbance des contrôles et des échantillons dans les 15 minutes, mesurée à 450 nm avec une longueur d’onde de référence sélectionnée entre 620 et 690 nm*4. Utiliser le puits blanc pour définir le zéro du spectrophotomètre. REMARQUE : La couleur du blanc doit être incolore à jaune clair ; sinon, les résultats du test sont invalides. Blanc du substrat : la valeur d’absorbance doit être inférieure à une DO de 0,100. 4.6) Calcul des données testées 4.6.1) Calcul du NCx (absorbance moyenne du contrôle négatif). Exemple : Nº d’échantillon Absorbance 1 0,045 2 0,060 3 0,051 NCx = (0,045+0,060+0,051) /3 = 0,052 Le NCx doit être ≤ 0,200, sinon le test n’est pas valide. 4.6.2) Calcul du PCx (absorbance moyenne du contrôle positif). Exemple : Nº d’échantillon Absorbance 1 1,510 2 1,826 PCx = (1,510 + 1,826) /2 = 1,668 Le PCx doit être ≥ 0,600, sinon le test n’est pas valide. 4.6.3) Calcul de la valeur P - N P-N = PCx - NCx Exemple : P - N = 1,668 – 0,051 = 1,617 La valeur P – N doit être ≥ 0,400, sinon le test n’est pas valide. 4.6.4) Calcul de la valeur du seuil de positivité Valeur du seuil de positivité = NCx + 0,100 Exemple : Valeur du seuil de positivité = 0,053+0,100 = 0,153 4.6.5) Calculer l’indice du seuil de positivité des échantillons Indice du seuil de positivité = Valeur DO de l’échantillon/Valeur du seuil de positivité Exemple : La valeur de l’échantillon est 0,596 Indice du seuil de positivité = 0,596/0,153 = 3,895 4.6.6) Zone grise : Indice du seuil de positivité = 1,000 ~ 1,500 Nº de catalogue : KAPG4NAE3 Nº de PI : 1701265 Nº de révision : 110711/1 4.7) Contrôle qualité du run de tests 4.7.1) Le NCx doit être ≤ 0,200, sinon le test n’est pas valide. 4.7.2) Le PCx doit être ≥ 0,600, sinon le test n’est pas valide. 4.7.3) La valeur P – N doit être ≥ 0,400, sinon le test n’est pas valide. REMARQUE : Contrôle négatif: la valeur d'absorbance doit être inférieure ou égale à 0,200 après avoir soustrait le blanc. 4.8) Interprétation des résultats 4.8.1) Les échantillons avec INDICE DU SEUIL DE POSITIVITÉ < 1,000 sont considérés comme NON RÉACTIFS par les critères de l’Anti-HCV Elisa V 4.0 de DIAsource. 4.8.2) Les échantillons avec un INDICE DU SEUIL DE POSITIVITÉ ≥ 1,000 sont considérés comme initialement RÉACTIFS. Ils doivent être TESTES A NOUVEAU en doublon. Si les deux INDICES DU SEUIL DE POSITIVITÉ du doublon sont SUPÉRIEURS à 1,500, l’échantillon est considéré comme RÉACTIF réitéré pour les anti-HCV par les critères de l’Anti-HCV Elisa V 4.0 de DIAsource ImmunoAssays SA. Les échantillons réactifs réitérés de l’Anti-HCV Elisa V 4.0 doivent être encore testés par des tests supplémentaires plus spécifiques. 4.8.3) Les échantillons initialement réactifs, dont les INDICES DU SEUIL DE POSITIVITÉ du nouveau test en double sont INFÉRIEURS à 1,000, seront considérés comme NON RÉACTIFS pour les anti-HCV. 4.8.4) Si l’un des deux INDICES DU SEUIL DE POSITIVITÉ du test en doublon est SUPÉRIEUR à 1,000, mais INFÉRIEUR à 1,500, l’échantillon peut être interprété comme DISCUTABLE et cette personne doit être surveillée par des échantillons de suivi ou des tests supplémentaires plus spécifiques doivent être effectués. 4.8.5) Si l’un des INDICES DU SEUIL DE POSITIVITÉ du doublon est SUPÉRIEUR à 1,500 et que l’autre est INFÉRIEUR à 1,000, cela indique une erreur expérimentale inhabituelle. Le test doit être refait. 4.9) Résolution des problèmes Si le résultat ne peut être reproduit, réaliser une procédure de contrôle préliminaire en vérifiant les possibilités ci-dessous : 4.9.1) Procédure de lavage de la plaque inappropriée. 4.9.2) Contamination avec un échantillon positif. 4.9.3) Volume incorrect d’échantillon, conjugué ou substrat. 4.9.4) Contamination du bord du puits avec un conjugué. 4.9.5) Échantillon inapproprié, par exemple sérum ou plasma hémolysé, échantillon contenant des sédiments et échantillon insuffisamment mélangé avant utilisation. 4.9.6) Durée ou température d’incubation incorrecte. 4.9.7) Tête et aiguilles d’aspiration/distribution du laveur obstruées ou partiellement obstruées. 4.9.8) Aspiration insuffisante. 4.10) Limites et interférences 4.10.1) Ce kit de réactifs doit être uniquement utilisé pour du sérum ou du plasma humain non mis en pool. 4.10.2) Ce kit de réactifs n’a pas été validé pour une utilisation avec des échantillons prélevés sur des cadavres. 4.10.3) Les échantillons présentant un très faible taux d'anti-HCV peuvent ne pas être continuellement positifs. Dans ce cas, il est recommandé de tester des échantillons de suivi. 4.10.4) Un résultat anti-HCV négatif n’exclut pas la possibilité d’une infection par HCV. 4.10.5) Des résultats faux positifs non réitérables peuvent se produire en raison d’une liaison non spécifique de l’échantillon et du conjugué sur la paroi des puits. 4.10.6) Substances pouvant provoquer des interférences : il n’existe aucune influence significative sur l’Anti-HCV Elisa V 4.0. 4.11) Conditions de stockage et stabilité Kit/composants Température de stockage KIT Anti-HCV Elisa V 4.0 +2 à +8 °C Contrôle Anti-HCV positif +2 à +8 °C Contrôle Hépatite C négatif +2 à +8 °C Plaque d’antigènes HCV +2 à +8 °C Solution du conjugué HCV antigen•HRPO concentré +2 à +8 °C Nº de catalogue : KAPG4NAE3 Nº de PI : 1701265 État Stabilité Original 18 mois Après ouverture 1 mois Original 18 mois Après ouverture 1 mois Original 18 mois Après ouverture 1 mois Original 18 mois Après ouverture 1 mois Original 18 mois Après ouverture 1 mois Nº de révision : 110711/1 Solution du conjugué antigène HCV•HRPO conc. Temp. ambiante Diluée 6 heures +2 à +8 °C Diluée 2 jours Diluant du conjugué +2 à +8 °C Solution de lavage D concentrée (20X) Temp. ambiante Solution de lavage diluée 20X Temp. ambiante +2 à +8 °C Chromogéne TMB concentré +2 à +8 °C Tampon du substrat +2 à +8 °C Mélange de solution du substrat TMB Temp. ambiante Solution d'arrêt Temp. ambiante Original 18 mois Après ouverture 1 mois Original 24 mois Après ouverture 1 mois Diluée 2 jours Diluée 1 semaine Original 24 mois Après ouverture 1 mois Original 24 mois Après ouverture 1 mois Mélange 6 heures Original 24 mois Après ouverture 1 mois 4.12) Performance 4.12.1) Spécificité analytique Substances pouvant provoquer des interférences : il n’existe aucune influence significative sur l’Anti-HCV Elisa V 4.0. Substances pouvant provoquer des interférences n de tests n de réactifs n de non réactifs Sérum avec des substances provoquant des interférences en proportions fixes 50 tests 0 50 (Triglycérides, hémoglobine, bilirubine, IgG et IgM monoclonales et facteur rhumatoïde) Panels d’inhibition 14 échantillons 0 14 (EDTA, hémoglobine, triglycéride, bilirubine et héparine) négatifs 14 0 14 échantillons positifs Panels d’anticoagulants 25 échantillons 0 25 (sérum, plasma EDTA, plasma hépariné et plasma négatifs 25 0 citraté) 25 échantillons positifs Total 128 échantillons testés 39 89 4.12.2) Spécificité clinique Spécificité clinique = 5356/5369 = 99,8 % Substances pouvant provoquer des interférences Donneurs de sang Échantillons cliniques / hospitaliers Échantillons sériques/plasmatiques avec réaction croisée potentielle Total n de tests 5 169 200 100 n de réactifs 12 1 0 n de non réactifs Spécificité 5 157 199 100 99,77 % 99,5 % 100 % 5 369 13 5 356 99,8 % 4.12.3) Sensibilité analytique La sensibilité analytique de l’essai Anti-HCV Elisa V 4.0 est supérieure au test de référence. Nº de catalogue : KAPG4NAE3 Nº de PI : 1701265 Nº de révision : 110711/1 30 30 ♦ Anti-HCV Elisa V 4.0 25 25 ■ Méthode de référence ▲Seuil de positivité ♦ Anti-HCV Elisa V 4.0 20 ■ Méthode de référence Anti HCV (S/Co) Anti-HCV IgG (S/Co) 20 15 10 10 5 5 0 GBC NANBASE C-96 ▲ Seuil de3.1 positivité Ortho HCV 3.0 SAVe Cut Off 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 0 2 4 6 8 Dilution Steps 10 12 14 16 18 20 Dilution Steps ♦ Anti-HCV Elisa V304.0 20 ■ Méthode de référence ♦ Anti-HCV Elisa V 4.0 25 15 ■ Méthode de référence 20 ▲ Seuil de positivité Anti HCV (S/Co) Anti-HCV (S/Co) ▲Seuil de positivité GBC NANBASE C-96 3.1 Reihe2 15 Reihe3 10 10 5 5 0 0 10 20 30 40 50 60 70 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 -5 20 Dilution Step Dilution Steps Panel de reference Anti-HCV PeliCheck 30 Anti-HCV (S/Co) 25 20 ♦ Anti-HCV Elisa V 4.0 ■ Méthode de référence 15 ▲Seuil de positivité 10 5 0 0 2 4 6 8 10 Dilution Step 4.12.4) Sensibilité clinique 1. Personnes infectées par le HCV : La sensibilité diagnostique de l’Anti-HCV Elisa V 4.0 de DIAsource ImmunoAssays SA était de 100 %. 421 des 421 échantillons positifs incluant 20 échantillons par génotype pour les génotypes 1a – 4a et 5 échantillons pour les génotypes 6 ont été testés et confirmés réactifs pour les anticorps dirigés contre le HCV. Nº de catalogue : KAPG4NAE3 Nº de PI : 1701265 Nº de révision : 110711/1 Total Sensitivity n=421 12,000 10,000 8,000 6,000 4,000 2,000 0,000 0,000 5,000 10,000 15,000 20,000 25,000 30,000 35,000 GBC NANBASE C-96 3.1 = 100% Anti-HCV Elisa V 4.0 = 100 % 2. Panels commerciaux de séroconversion : L’essai Anti-HCV Elisa V 4.0 a montré une sensibilité accrue de la séroconversion comparé à la méthode de référence choisie : l’anti-HCV ELISA marqué CE. Le nombre total d’échantillons testés parmi les 22 panels de séroconversion s’élevait à 198. Parmi eux, soixante-trois (63) échantillons ont été testés réactifs avec l’essai Anti-HCV Elisa V 4.0, tandis que seuls 44 de ces échantillons ont été testés réactifs avec la méthode de référence. 4.12.5) Précision 1. Reproductibilité intra-essai Sérum positif 1 INDICE DU SEUIL Moyenne CV (%) Sérum positif 2 Contrôle positif Moyenne CV (%) Moyenne CV (%) 9,01 5,94 21,79 4,91 Jour 1 4,49 7,22 Jour 2 4,16 13,06 8,54 9,41 21,44 4,23 Jour 3 5,07 5,24 10,64 9,27 21,70 3,08 Moyenne 4,57 8,51 9,40 8,21 21,64 4,07 2. Imprécision totale Nº de catalogue : KAPG4NAE3 Nº de PI : 1701265 Nº de révision : 110711/1 4.13) Représentation graphique de la procédure de test Ajouter 100 µl des contrôles (3 X NC, 2 X PC) et 100 µl d’échantillon aux puits. Laisser un puits pour le blanc. ↓ Incuber la plaque à 37 ± 1 °C pendant 60 minutes. ↓ Laver la plaque. (Préparer au préalable le conjugué dilué.) ↓ Ajouter 100 µl de conjugué dilué à chaque puits, sauf au blanc. ↓ Incuber la plaque à 37 ± 1 °C pendant 30 minutes. ↓ Laver la plaque. ↓ ↓ Mélanger des volumes identiques de chromogéne TMB concentré et de tampon du substrat. Ajouter 100 µl de la solution obtenue aux puits. ↓ Ajouter 50 µl de Chromogéne TMB concentré puis ajouter 50 µl de tampon du substrat. Bien mélanger avec précaution. ↓ Incuber à 37 ± 1 °C pendant 15 minutes. ↓ Ajouter 100 µl de Solution d'arrêt à chaque puits. ↓ Déterminer l’absorbance à une longueur d’onde de lecture de 450 nm avec une longueur d’onde de référence entre 620 et 690 nm*4 Date de révision : 2011-07-11 Nº de catalogue : KAPG4NAE3 Nº de PI : 1701265 Nº de révision : 110711/1 Anti-HCV Elisa V 4.0. Para la detección cualitativa in-vitro del Anticuerpo contra el virus de la Hepatitis C (anti-VHC) en suero o plasma humano es KAPG4NAE3 PARA USO DE DIAGNÓSTICO IN VITRO DIAsource ImmunoAssays SA - Rue du Bosquet 2, B-1348 Louvain-la-Neuve, Belgium Tel: +32 10 84 99 11 - Fax : +32 10 84 99 90 1) USO PREVISTO El kit de diagnóstico Anti-HCV Elisa V 4.0 es un inmunoensayo enzimático de cuarta generación para la detección cualitativa in vitro del anticuerpo contra el virus de la Hepatitis C (anti-VHC) en suero o plasma humano. 2) TEORÍA DEL DISEÑO/BREVE DESCRIPCIÓN DEL PRODUCTO Elisa V 4.0 Anti-VHC adopta el “principio del sándwich directo” como la base del ensayo para detectar anticuerpos contra el virus de la Hepatitis C (anti-VHC). Es un kit de inmunoensayo enzimático de cuarta generación que usa antígenos recombinantes del VHC (antígenos Core, NS3 y NS5) para la detección del virus de la Hepatitis C (anti-VHC) en suero o plasma humano.*1-3 Estos antígenos, que reaccionan con los anticuerpos predominantes contra el VHC, constituyen la fase solida antigénica absorbente. Cuando el suero o plasma humano se agrega a los pocillos, si anti- VHC está presente en la muestra, los antígenos del VHC formarán complejos con anti-VHC. Se lavan los pocillos para eliminar el material que no se ha unido. Se agrega el conjugado diluido HVC Ag•HRPO a los pocillos lo que resulta en la formación de un complejo (VHC) • (Anti-VHC) • (VHC Ag•HRPO). Después de eliminar por lavado el complejo que no se ha unido, se agrega una solución de sustrato TMB para desarrollar color. La intensidad del color es proporcional a la cantidad de anticuerpos presentes en la muestra. Los procesos reactivos están resumidos como sigue: A. Muestra (que contiene anti-VHC): 1. 2. 3. 4. 5. 6. B. Placa (VHC Ag) + muestra (que contiene Anti-VHC) - placa (VHC Ag) • Anti- VHC Lave para eliminar el material que no se ha unido. Placa (VHC Ag) Anti- VHC + VHC Ag•HRPO placa (VHC Ag)•Anti- VHC • VHC Ag•HRPO complejo Lave para eliminar el material que no se ha unido. Placa (VHC Ag) •Anti- VHC • VHC Ag•HRPO complejo + solución de sustrato TMB → de color azul claro a azul De color azul claro a azul + solución de parada →de color amarillo pálido a amarillo, medido a 450nm con una longitud de onda seleccionada entre 620 y 690nm*4 Muestra (sin anti-VHC): 1. Placa (VHC Ag) + muestra (sin Anti-VHC) → placa (VHC Ag) 2. Lave para eliminar el material que no se ha unido. 3. Placa (VHC Ag) + VHC Ag•HRPO → placa (VHC Ag)------ no se formará un complejo 4. Lave para eliminar el material que no se ha unido. 4. Placa (VHC Ag) + solución de sustrato TMB (incolora) → incolora 5. Incolora + solución de parada → incolora, medida a 450nm con una longitud de onda de referencia seleccionada de 620 a 690nm*4 3) DESCRIPCIÓN DE MATERIALES SUMINISTRADOS & SISTEMA DE CÓDIGOS DE PRODUCTOS ● Item 1 - 7 en la siguiente tabla de reactivos deben permanecer refrigerados entre + 2 y +8°C. La Solución de Lavado (20X) y la solución de parada pueden almacenarse entre +2 y +30°C. ITEMS Componentes (1) VHC Ag Placa Catalogo Nr: KAPG4NAE3 Descripción Una microplaca recubiertos con antigenos VHC. PI Numero : 1701265 Cant. para 96 ensayos 1 placa Revisión Nr : 110711/1 P.I. Number : 1701000 SOLN CAL 0 CAL N CONC Wash solution concentrated Zero calibrator Calibrator # N Control # Tracer Ag 125I Ab 125I Ag 125I CONC Ab 125I CONC INC BUF Tracer ACETONITRILE Serum SERUM DIL SPE Specimen diluent DIL BUF Dilution buffer ANTISERUM Antiserum IMMUNOADSORBENT Immunoadsorbent DIL CAL Calibrator diluent REC SOLN PEG EXTR SOLN Extraction solution ELU SOLN Elution solution Bond Elut Silica cartridges GEL PRE Pre-treatment solution SOLN NEUTR Neutralization solution SOLN TRACEUR BUF Microtiterplate HRP Conjugate Ab HRP Ag HRP Ab HRP CONC HRP Conjugate concentrate Ag HRP CONC HRP Conjugate concentrate CONJ BUF CHROM TMB CHROM TMB HRP Conjugate SUB BUF STOP SOLN INC SER Incubation serum Buffer BUF Ab AP SUB PNPP BIOT PREC CONJ AP Conjugate Substrate PNPP CONC AVID HRP Biotin conjugate concentrate Precipitating Agent Avidine HRP concentrate ASS BUF Ab BIOT Biotin conjugate Specific Antibody Ab SAV HRP CONC 2nd Ab ACID Streptavidin HRP concentrate Non-specific binding NSB BUF DIST TRAY PMSF solution PMSF STRIP Substrate SUB EXTR SOLN HRP Streptavidin HRP Pipette PIPETTE WASH CONC SOLN Revision nr 140723 P.I. Number : 1701000 Revision nr 140723 Symboles utilisés Consulter les instructions d’utilisation Température de conservation Utiliser jusque Numéro de lot Référence de catalogue Contrôle Dispositif médical de diagnostic in vitro Fabricant Contenu suffisant pour <n> tests WASH CAL SOLN 0 CONC CAL Calibrateur # N Solution de lavage concentrée Calibrateur zéro 0 N Contrôle # Traceur Ag 125I Ab 125I Ag 125I CONC Traceur concentré Ab 125I CONC Traceur concentré INC BUF Traceur Tubes Tampon d'incubation Acétonitrile ACETONITRILE Sérum SERUM DIL SPE Diluant du spécimen DIL BUF Tampon de dilution ANTISERUM Antisérum IMMUNOADSORBENT Immunoadsorbant DIL CAL Diluant de calibrateur REC SOLN Solution de reconstitution Glycol Polyéthylène PEG EXTR SOLN Solution d’extraction ELU SOLN Solution d’elution Cartouches Bond Elut Silica GEL PRE Solution de pré-traitement SOLN NEUTR Solution de neutralisation SOLN TRACEUR Tampon traceur BUF Microplaque de titration HRP Conjugué Ab HRP Ag HRP Ab HRP CONC HRP Conjugué concentré Ag HRP CONC HRP Conjugué concentré CONJ BUF CHROM TMB CHROM TMB HRP Conjugué Tampon conjugué CONC Chromogène TMB concentré Solution chromogène TMB Tampon substrat SUB BUF STOP SOLN Solution d’arrêt INC SER Sérum d'incubation Tampon BUF Ab AP SUB PNPP BIOT PREC CONJ AP Conjugué Tampon PNPP CONC AVID HRP Biotine conjugué concentré Agent de précipitation Avidine HRP concentré ASS BUF Tampon de test Ab BIOT Biotine conjugué Anticorps spécifique Ab SAV HRP CONC Concentré streptavidine HRP Liant non spécifique NSB 2nd Ab ACID Tampon d'acidification BUF Distributeur DIST Plaque d'incubation TRAY Solution PMSF PMSF Conserver à l'abri de la lumière Bandelette de dots STRIP Substrat SUB EXTR SOLN CONC Tampon d'extraction concentré Cartouche HRP Streptavidine-peroxydase de raifort PIPETTE PIPETTE Pipette WASH Tampon de lavage SOLN P.I. Number : 1701000 Revision nr 140723 Símbolos utilisados Consultar las instrucciones de uso Limitación de temperatura Fecha de caducidad Codigo de lote Número de catálogo Control Producto sanitario para diagnóstico in vitro Fabricante Contenido suficiente para <n> ensayos WASH CAL SOLN 0 CONC CAL Calibrador # N Solución de lavado concentrada Calibrador cero 0 N Control # Trazador Ag 125I Ab 125I Ag 125I CONC Trazador concentrada Ab 125I CONC Trazador concentrada INC BUF Trazador Tubos Tampón de incubación Acetonitrilo ACETONITRILE Suero SERUM DIL SPE Diluyente de Muestra DIL BUF Tampón de dilución ANTISERUM Antisuero IMMUNOADSORBENT Inmunoadsorbente DIL CAL Diluyente de calibrador REC SOLN Solución de Reconstitución Glicol Polietileno PEG EXTR SOLN Solución de extracción ELU SOLN Solución de elución Cartuchos Bond Elut Silica GEL PRE Solución de Pre-tratamiento SOLN NEUTR Solución de Neutralización SOLN TRACEUR Tampón de trazador BUF Placa de microvaloración HRP Conjugado Ab HRP Ag HRP Ab HRP CONC HRP Conjugado concentrada Ag HRP CONC HRP Conjugado concentrada CONJ BUF CHROM TMB CHROM TMB HRP Conjugado Tampón de Conjugado CONC Cromógena TMB concentrada Solución Cromógena TMB SUB BUF Tampón de sustrato STOP SOLN Solución de Parada INC SER Suero de Incubación Tampón BUF Ab AP SUB PNPP BIOT PREC CONJ AP Conjugado Sustrato PNPP CONC AVID HRP Concentrado de conjugado de biotina Agente de precipitación Concentrado avidina-HRP ASS BUF Tampón de ensayo Ab BIOT Conjugado de biotina Anticuerpo específico Ab SAV HRP CONC Segundo anticuerpo 2nd Ab ACID Estreptavidina-HRP Concentrado Unión no específica NSB Tampón de Acidificación BUF Distribuidor DIST Bandejas de incubación TRAY Solución de PMSF PMSF Proteger de la luz Tries Dot STRIP Sustrato SUB EXTR SOLN HRP Estreptavidina HRP Pipeta PIPETTE WASH Concentrado de tampón de extracción Cartucho CONC SOLN Tampón de lavado">

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Caractéristiques clés
- Essai immuno-enzymatique de quatrième génération
- Détection qualitative in vitro d’anticorps dirigés contre le virus de l’hépatite C
- Antigènes HCV recombinants
- Principe du sandwich direct
- Solution de substrat TMB
Questions fréquemment posées
Le kit doit être conservé entre +2 et +8 °C. Ne pas congeler.
Du sérum ou du plasma peut être utilisé avec ce kit de diagnostic.
La procédure du test consiste à ajouter les contrôles et l’échantillon dans les puits, à incuber la plaque, à la laver, à ajouter le conjugué dilué, à incuber à nouveau, à ajouter la solution de substrat, à incuber à nouveau, à arrêter la réaction et à déterminer l’absorbance.