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Einsetzen der Sequenzierungsfließzelle
Zu den Schritten zum Einsetzen der Cluster-Fließzelle für die Sequenzierung gehören das
Entfernen der zum Vorfüllen verwendeten Fließzelle, das Reinigen des Fließzellenhalters, das Einsetzen der Cluster-Fließzelle sowie das Verifizieren des ordnungsgemäßen Flusses.
Entfernen der gebrauchten Fließzelle
1 Bewegen Sie den Fließzellenregler langsam in Position 1, um die Manifolds zu lösen.
Abbildung 11 Fließzellenregler in Position 1
2 Bewegen Sie den Fließzellenregler langsam in Position 0, um die Vakuumdichtung zu lösen und die Fließzelle freizugeben.
Abbildung 12 Fließzellenregler in Position 0
3 Heben Sie die gebrauchte Fließzelle aus der Halterung.
Reinigen des Fließzellenhalters
1 Ziehen Sie ein neues Paar ungepuderte Latexhandschuhe an.
2 Reinigen Sie die Oberfläche des Fließzellenhalters mit einem fusselfreien, mit Wasser in
Laborqualität befeuchteten Tuch, um Salze zu entfernen.
3 Reinigen Sie die Oberfläche des Fließzellenhalters mit einem Alkoholtupfer oder einem fusselfreien, mit Ethanol oder Isopropanol befeuchteten Tuch. Es darf kein Alkohol in die Vakuumöffnungen oder auf die Umgebung der Manifolds gelangen.
4 Trocken Sie den Tisch falls erforderlich mit einem fusselfreien Labortuch.
5 Unterziehen Sie den Fließzellenhalter einer Prüfung, um sicherzustellen, dass sich keine Fussel auf dem Halter befinden und die Vakuumöffnungen nicht blockiert werden.
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Material-Nr. 20000063
Dokument-Nr. 15066496 v01 DEU
Abbildung 13 Überprüfen der Vakuumöffnungen
Einsetzen der Sequenzierungsfließzelle
1 Legen Sie die Fließzelle so auf den Fließzellenhalter, dass die Einlass- und
Auslassanschlüsse nach unten weisen und der Barcode sich auf der rechten Seite befindet. Stellen Sie sicher, dass der Pfeil am linken Rand der Fließzelle, der die
Flussrichtung angibt, in Richtung Gerät zeigt.
2 Schieben Sie die Fließzelle vorsichtig bis zum Anschlag in Richtung der oberen und rechten Führungsstifte.
Abbildung 14 Fließzelle an oberen und rechten Führungsstiften ausgerichtet
A Oberer Führungsstift
B Rechte Führungsstifte
3 Nehmen Sie die Hand von der Fließzelle, um zu verhindern, dass im Laufe der Zeit eine Verschiebung der Ausrichtung auftritt.
4 Bewegen Sie den Fließzellenregler langsam in Position 1. Dadurch wird das Vakuum aktiviert und die Fließzelle wird in Position gehalten.
Wenn der Fließzellenregler grün blinkt, ist das Vakuum aktiviert. Falls der Regler nicht grün leuchtet, lesen Sie
Mögliche Probleme bei der Laufkonfiguration auf Seite 49
HiSeq 4000-Systemhandbuch
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Abbildung 15 Fließzellenregler in Position 1
5 Warten Sie fünf Sekunden, und bewegen Sie dann den Fließzellenregler langsam in
Position 2.
Wenn der Fließzellenregler dauerhaft grün leuchtet, ist ein Vakuum entstanden und die
Fließzelle ist einsatzbereit.
Abbildung 16 Fließzellenregler in Position 2
6 Stellen Sie sicher, dass das Kontrollkästchen Vacuum Engaged (Vakuum aktiviert) aktiviert ist und wählen Sie anschließend Next (Weiter).
Prüfen des Flusses
Bei der Überprüfung des Flusses wird auch festgestellt, ob die Fließzelle und die
Dichtungen ordnungsgemäß installiert sind und ein Vakuum entstanden ist.
1 Wählen Sie Lösung 5 aus der Dropdown-Liste.
2 Geben Sie die folgenden Standardwerte ein:
}
Volume (Volumen): 250
}
Aspirate Rate (Aspirationsrate): 250
} Dispense Rate (Zufuhrrate): 2000
3 Wählen Sie Pump (Pumpe).
4 Inspizieren Sie die Fließzelle auf Luftblasen, die die Lanes passieren, sowie auf
Undichtigkeiten in der Nähe der Manifolds.
5 Wenn eine erhöhte Anzahl an Luftblasen vorhanden ist, überprüfen Sie die Manifold-
Dichtungen auf Obstruktionen und wiederholen Sie den Vorgang mit Lösung 6, um zu verhindern, dass die Lösung an Position 5 aufgebraucht wird. Senken Sie die
Aspirationsrate auf 100 und pumpen Sie weitere 250 µl in die Fließzelle.
6 Wählen Sie Next (Weiter) aus.
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Material-Nr. 20000063
Dokument-Nr. 15066496 v01 DEU
7 Stellen Sie sicher, dass der Fließzellenregler grün leuchtet, und schließen Sie dann die
Tür der Fließzellenkammer.
8 Achten Sie darauf, dass die Kontrollkästchen Vacuum Engaged (Vakuum aktiviert) und Door Closed (Tür geschlossen) aktiviert sind, und wählen Sie Next (Weiter).
9 Wählen Sie Start (Start), um den Sequenzierungslauf zu starten.
HiSeq 4000-Systemhandbuch
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Table of contents
- 8 Einleitung
- 9 Weitere Ressourcen
- 10 Gerätekomponenten
- 15 Überblick über die Sequenzierungs-Verbrauchsmaterialien
- 18 Starten des HiSeq 4000
- 19 Anpassen der Systemeinstellungen
- 21 Anzeigen und Senden von Gerätedaten
- 22 Vom Benutzer bereitzustellende Verbrauchsmaterialien
- 24 Einleitung
- 25 Vorbereiten von SBS-Reagenzien
- 26 Vorbereiten von Indizierungs- und Paired-End-Reagenzien
- 28 Einleitung
- 29 Sequenzierungsworkflow
- 30 Eingeben von Laufparametern
- 33 Laden und Vorfüllen von Reagenzien
- 38 Einsetzen der Sequenzierungsfließzelle
- 42 Überwachen des Laufs
- 43 Entladen von Reagenzien
- 44 Durchführen eines Wasserwaschlaufs
- 45 Durchführen einer Schnellformatierung des Ausgabelaufwerks
- 48 Durchführen eines Wartungswaschlaufs
- 51 Versetzen des Geräts in den Leerlauf
- 52 Ausschalten des Geräts
- 54 Protokolldatei
- 55 Mögliche Probleme bei der Laufkonfiguration
- 56 Durchführen einer Fluidikprüfung
- 57 Unterbrechen oder Beenden eines Laufs auf dem HiSeq 4000
- 59 Gestaffelte Läufe auf Fließzelle A und Fließzelle B
- 60 Mögliche Primer-Rehybridisierung für Read 1
- 62 Überblick über die Echtzeitanalyse
- 64 Echtzeitanalyse-Workflow
- 70 Sequenzierung von Ausgabedateien
- 71 Plattennummerierung